应用氯化锶对小鼠卵母细胞孤雌活化的研究

根据弓形虫P30基因序列设计二对引物分别进行了PCR一次扩增和套式扩增，结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段914bp,522bp和522bp；套式扩增出现的条带比一产供销扩增出现的条带亮度明显增强，提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性，用外引物进行扩增后，最低可以检测到1pg的弓形虫DNA，说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织进行弓形虫DNA的检测，结果均扩增出522bp的扩增带。根据B1基因序列设计的弓物进行PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的扩增带，半套式扩增比一次扩增更敏感。     

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立

HBx基因为HBV基因组上的一个开放读框,可编码具有转录反式激活作用的蛋白(HBxAg).已证实在体外HBxAg可使哺乳细胞株发生恶性转化[1].为了探索在体内HBxAg转化细胞的作用,国外数个实验室已相继建立了HBx转基因鼠模型[2,3].为研究HBx基因在肝细胞癌变过程中的确切作用提供有效的动物模型,我们初步建立了携带乙型肝炎病毒X基因的转基因小鼠,现报道如下.     

人内皮抑素基因治疗卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的探索人内皮抑素基因治疗人肿瘤的可行性：方法将人卵巢癌(SKOV3)瘤组织或其细胞移植于裸鼠皮下，建立成裸鼠移植瘤模型；用高保真PCR从含有人内皮抑素基因的重组质粒中扩增出与人生长激素信号肽序列融合的人内皮抑素编码区，将此基因克隆入pGEM-T载体中，经序列测定证明其序列的正确性；将此基因克隆入真核表达载体pcDNA3。经免疫荧光试验证明能在CPS-1细胞中表达。结果用重组质粒注射已形成移植瘤的裸鼠，能显著抑制移植瘤的生长；将基因注射与肿瘤移植同时进行，基因注射不仅能部分抑制移植瘤的形成，而且能抑制移植瘤的生长。结论本研究构建的分泌型表达人内皮抑素的重组质粒可以用于肿瘤的基因治疗研究。     

共刺激分子配体B7-DC基因真核表达载体和转基因细胞的构建

目的：克隆小鼠B7-DC基因，并构建含该基因的真核表达载体pEF6／-B7-DC-V5His，证明该基因在CHO细胞中的表达方式，为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础。方法：从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板，通过RT—PCR技术，扩增出B7-DC编码区片段。按常规方法克隆进pEF6V5His载体中，重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞，48小时后进行间接免疫荧光实验，72小时后用blasticidin进行筛选，挑选出能稳定表达B7-DC的细胞株。结果：已成功克隆小鼠B7-DC基因并构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体，经间接免疫荧光实验（IFA）证明，该基因在CHO细胞中得到表达。经Western blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-DC基因。结论：构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体pEF6／-B7-DC-VSHis，并能在CHO细胞中稳定表达目的基因，为该基因功能的后续研究奠定了基础。     

地方株HPV16 L1基因免疫保护性研究

人乳头状瘤病毒（human papillomavims，HPV）至今已鉴定的HPV型超过200个，约40个型能感染生殖道，以性接触方式传播。分子流行病学证据显示HPV是引起浸润性宫颈癌和宫颈上皮内癌的主要原因，其中HPV16型在宫颈癌中检出率最高，约50％的宫颈癌患者肿瘤组织能被检测到，HPV16也是我国妇女宫颈癌的主要型别。因为HPV感染性疾病的难治性、复发性和潜在致癌性，研制开发安全、有效的HPV疫苗有一定的实用意义。     

用台盼蓝鉴定小鼠胚胎发育能力的研究

应用台盼蓝作为活体染色剂,设计PBS与台盼蓝浓度比例分别为6:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0:1的染色液染色,以选择适合于鉴定小鼠体外胚胎发育能力的最佳浓度。染色后各组胚胎发育率分别为70.7％,66.5％、77％、60％、45％、30％,表明台盼蓝染色液3:1组的效果最为理想。电镜观察进一步证明用台盼蓝染色液鉴定胚胎发育能力是可行的。     

人慢性粒细胞白血病动物模型研究进展

目前制备人慢性粒细胞白血病动物模型的方法主要有3种，包括用慢性粒细胞白血病细胞种植免疫缺陷鼠(SCID或NOD／SCID)、用表达P210^bcr／abl逆转录病毒载体转染小鼠骨髓细胞并移植入正常鼠体内和构建bcr／ahl转基因鼠，所有这些慢性粒细胞白血病动物模型的研究有助于加深人们对慢性粒细胞白血病致病机理的认识，本文就目前人慢性粒细胞白血病动物模型的研究进展作一综述。     

乙肝表面抗原核酸疫苗诱导小鼠产生母源抗体

目的　研究核酸疫苗激发的抗体传递给仔代的能力。方法　以编码人类乙型肝炎病毒表面抗原 (ayw亚型 )的质粒 pcDNA HBs作为疫苗 ,肌肉注射 6周龄的BALB/c雌鼠 ,三星期后加强免疫一次 ,再过两周后使其配种怀孕 ,怀孕第 19天剖腹产取出胎儿并分离孕鼠及胎儿的血清 ,作ELISA检测。结果　经ELISA检测 ,10只小鼠中有 7只产生了抗体 (IgG)并传递给胎儿 ,且母体与胎儿的抗体效价相同 ,实验组与对照组差异显著 (P <0 .0 5 )。 结论　核酸疫苗与传统疫苗一样能诱导产生母源抗体。     

重组TRAIL抑制7402肝癌细胞生长的实验研究

目的　重组TRAIL对BALB/c裸鼠肝癌细胞皮下移植模型的抑瘤作用。方法　建立裸鼠 740 2肝癌细胞皮下移植瘤模型 ,纯化后的质粒DNA与PEI混合后经肌肉注射进行基因转染 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性 ,采用原位缺如末端标记 (TUNEL)法 ,进行肿瘤组织凋亡检测。结果　肿瘤体积测定显示TRAIL对肝癌生长有明显抑制作用 ,凋亡检测表明实验组镜下有蓝紫色凋亡细胞。结论　荷瘤小鼠经肌肉注射TRAIL质粒DNA后 ,能引起肿瘤细胞的凋亡 ,有效抑制 740 2肝癌细胞在裸鼠体内的生长。     

小鼠39个微卫星的PCR条件及其运用

目的探索小鼠基因组39个微卫星的PCR条件,评价微卫星在小鼠遗传检测中的运用.方法采用梯度法探索39个微卫星的PCR条件;选择本中心不同来源及引种时间的C57BL/6、BALB/c、DBA/2J、CBA/N、FVB/NJ、ICR共6个品系(8个组)小鼠,每组采用10只个体的鼠尾,提取DNA并混合成DNA池,用39个微卫星扩增后电泳观察、比较种系纯度.结果小鼠微卫星的PCR条件差异较大,Mg2+浓度多数在1.5 mmol/L左右,退火温度多数在59℃左右.在6个品系小鼠的39个微卫星位点中,C57BL/6、BALB/c、DBA/2J都是纯合的; 其余品系有1～3个杂合位点. BALB/c在D5Mitl68、D8Mit320、D13Mit262三个位点,DBA/2J在D14Mit205位点与数据库记录有差异.结论本研究为小鼠39个微卫星提供了候选的PCR条件,并对6个品系小鼠的微卫星概貌及微卫星的运用价值进行了探讨.