昆明小鼠胰腺干细胞分离培养及特异性标志物巢蛋白的鉴定

探讨胰腺干细胞的分离、培养及其特异性标志物巢蛋白鉴定的基本技术方法。选取新生昆明种小鼠25只,分离胰腺组织,V型胶原酶消化,结合自然沉降技术形成不连续密度梯度离心。分别从磷酸盐缓冲液/1.068g/L Percoll液(第一界面)、1.068g/L Percoll液/1.096g/L Percoll液(第二界面)、1.096g/L Percoll液/1.118g/L Percoll液(第三界面)收集细胞。各界面细胞均加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM低糖培养基,置于经多聚赖氨酸处理的培养瓶中常规培养。24h后将培养基更换为不含胎牛血清的DMEM低糖培养基,并加入10mg/L的角质细胞生长因子和20μg/L的碱性成纤维细胞生长因子,观察体外培养的各界面细胞的形态学特征。胰腺的内分泌部存在β细胞,双硫腙能与β细胞分泌颗粒中的锌螯合而呈现铁红色。将收集的各界面细胞进行双硫腙染色,检测细胞来源。免疫组织化学法检测各界面巢蛋白的表达。结果第一、二界面细胞65%～90%双硫腙染色呈阳性,来源于胰腺的内分泌部;第三界面细胞双硫腙染色呈阴性,来源于胰腺的外分泌部。从胰腺的内分泌部获得的细胞聚集呈胰岛样细胞团贴壁生长,48～72h后可见许多大、圆、单个核的细胞从胰岛样细胞团中向周围长出,以附壁生长的方式在局部形成细胞集落。从胰腺的外分泌部获得的细胞主要呈上皮样生长,并逐渐汇合成片,在上皮样细胞集落的周围可见大、圆、单个核的细胞生长并形成集落。各界面大、圆、单个核的细胞,巢蛋白均呈阳性表达。提示从胰腺内、外分泌部的组织中能成功获取胰腺干细胞特异性标志Nestin表达阳性的干样细胞。     

马氏珠母贝外套膜组织细胞体外培养技术改进及角质细胞生长因子在细胞培养中的应用

背景:关于消化外套膜组织获得的细胞悬液是否能在体外有效地扩增形成珍珠囊以及最终形成珍珠仍存在争议,且这方面研究不多.目的:建立一套有效的马氏珠母贝外套膜组织细胞体外分离及培养的技术和方法,同时探讨体外形成具有完整结构和分泌功能的珍珠囊并最终生成优质珍珠的最佳方法.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-08/12在广西中医学院基础医学院完成.材料:贝龄1.0～2.0岁马氏珠母贝由广西北海市营盘珍珠实业有限公司提供,自配改进的海水贝类平衡盐溶液(MWBSS);自制珍珠贝血清和珍珠贝体液;角质细胞生长因子为美国Sigma公司产品.方法:使用2.5 g/L胰蛋白酶消化马氏珠母贝外套膜组织,收获的细胞使用M199(含体积分数10%胎牛血清)培养基进行培养,并在其中加入10 μg/L的角质细胞生长因子、10%自制的珍珠贝体液和贝血清,持续培养30 d.主要观察指标:细胞生长特性和生长状态.结果:体外培养的珍珠外套膜上皮细胞增殖迅速,分泌功能旺盛,肌肉细胞增殖能力强,并最终能包裹外套膜上皮细胞,形成结构较完整、分泌能力较强的珍珠囊.结论:使用改进的培养技术和培养体系中添加角质细胞生长因子在体外培养珍珠外套膜组织细胞,可获得生长状态和分泌功能均较好的珍珠囊.     

人骨髓间充质干细胞的体外连续传代及鉴定

[目的]将成人骨髓间充质干细胞（hMscs）进行体外连续传代并对其进行干细胞特性的鉴定。[方法]采用不连续密度梯度离心法进行人骨髓间充质干细胞的分离,使用含10％胎牛血清的L-DMEM进行体外培养,经胰蛋白酶和EDTA联合消化法体外连续传代至P5代后,对其进行生长曲线的测定、细胞周期和表面分子标志物的检测以及多向分化潜能的观察。[结果]本实验可将hMSCs体外连续传至P5代,P5代hMSCs在保持良好的分裂增殖能力的同时,表达hMSCs的表面分子标志物及保持多向分化潜能。[结论]本实验成功地将人hMSCs进行体外连续传代并保持其干细胞的特性。     

新生昆明小鼠胰腺干细胞体外分离、培养及自然分化的潜能

背景：关于胰腺干细胞在胰腺组织中的分布情况,以及如何有效的将其分离、体外优化培养,目前仍有一定的困难。目的：从新生昆明小鼠胰腺组织中分离出胰腺干细胞,在体外条件下培养观察其形态学和生物学特征,并进行初步鉴定。方法：取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅴ型胶原酶消化,采用Percoll不连续密度梯度离心,使胰腺组织内、外分泌部细胞分离,分布在3个不同的密度界面;收集各界面的细胞,以无血清、添加碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的DMEM培养基培养。结果与结论：通过细胞形态学和细胞生长特性的观察,结合双硫腙染色证实：采用Percoll不连续密度梯度离心,第一、二密度界面的细胞来源于胰腺内分泌部;第三密度界面细胞来源于胰腺外分泌部。分别从胰腺内、外分泌部获取胰腺组织细胞,在体外培养观察发现均存在一类大、圆、单个核的细胞,呈集落样附壁生长,具有较活跃的分裂增殖能力,碱性磷酸酶染色阳性,表达胰腺干细胞的特异性标志巢蛋白,即为胰腺干细胞;随着体外培养时间的延长,分别表达PDX-1和CK-19,呈现向胰腺内分泌部细胞和外分泌部细胞分化的趋势。     

中医院校对外中医专业组织胚胎学理论课教学模式初探

双语教学（bilingual education）是为了适应我国高等教育与国际接轨、迎接新世纪挑战和教育改革发展而产生的一种新的教学模式。从2003年,我院开始招收对外中医专业学生,学制为六年,该专业的学生入学成绩特别是英语成绩都比较高,入学后除了接受高强度英语训练（包括听、说、读、写、译）以及中医专业英语学习外,还要接受医学基础课和临床课的中英文教学的训练。     

组织胚胎学教学中引入医学人文教育的初探

组织胚胎学是重要的医学基础课程之一,属自然科学范畴,纵观医学及其他学科的迅速发展,在组织胚胎学教学中融入医学人文素质教育是现代医学发展的必然要求,也是培养未来合格医学人才的迫切需要。本文浅谈几点如何将医学人文教育融入组织胚胎学教学的方法和途径。     

小鼠胰腺干细胞饲养层条件下的连续传代培养

自1981年Evans等和Martin利用胚胎成纤维细胞饲养层的培养体系，首先成功建立小鼠胚胎干细胞系后，胚胎成纤维细胞饲养层广泛应用于胚胎干细胞的克隆化培养研究，本研究使用经丝裂霉素C作用的小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层，观察在饲养层条件下胰腺干细胞体外连续传代的生长状况，希望建立一种体外获得单一性和富集度均较高的胰腺干细胞的技术和方法。