几种肿瘤特异性启动子在人肝癌细胞系中的活性比较

目的 克隆甲胎蛋白(AFP)、survivin(SUR)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子,检测并评价其在不同肝癌细胞系和正常组织细胞中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据.方法 采用PCR法扩增获得AFP、SUR、hTERT基因的启动子片段,将之克隆到表达虫荧光素酶基因的报告质粒上,检测AFP、SUR、hTERT基因启动子在肝癌细胞系和正常组织中的转录活性,评价其转录活性水平和肿瘤特异性.结果 成功克隆了AFP、SUR、hTERT启动子,证实AFP、SUR、hTERT启动子在肝癌细胞中具有肿瘤特异性转录活性,SUR启动子活性最高,其活性水平为AFP启动子的52～98倍;hTERT启动子次之,其活性水平为AFP启动子的14～30倍;AFP启动子活性最低.结论 hTERT和SUR启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性和显著的肿瘤特异性,可望开发成为新型的肝癌靶向性基因治疗工具.     

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠肺病毒滴度和肺组织病理改变的影响

目的观察经典合方犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠的治疗作用,分析病毒滴度与肺组织病理改变的关系。方法 ICR小鼠120只随机分为6组:正常组,模型组,犀角地黄汤合银翘散中药高、中、低剂量组,利巴韦林组,25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒鼠肺适应株感染的小鼠肺炎模型(除正常组外),感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予中药46、23、11.5 g/(kg.d)灌胃;利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液0.1 g/(kg.d);各组均给药2次/d,连续给药7 d。每日观察小鼠的生存率、平均存活天数,体重、体温的变化至感染后14 d。BALB/c小鼠72只随机分为4组,正常组、模型组、中药中剂量组和利巴韦林组,在感染后的24、6、d分别取材,动态观察小鼠肺匀浆中病毒血凝滴度、肺组织切片在光镜和电镜下的病理改变。结果临床等效剂量(中剂量)的犀角地黄汤合银翘散可明显降低感染小鼠的死亡率,延长生存时间,增加体重和升高体温。感染组肺病毒滴度在第2天最高,随后显著下降,而肺组织病理改变在第6天达高峰,二者不同步。犀角地黄汤合银翘散在第2天可降低肺匀浆中的病毒滴度,第4天、第6天与模型组比无差异;在第6天可明显减轻感染小鼠肺组织炎症病变。结论犀角地黄汤合银翘散对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用,直接的抗病毒增殖非其主要作用,可能主要通过抑制机体的炎症级联反应发挥作用。     

重组人脂联素基因在减毒沙门氏菌中的表达

目的：构建携带人脂联素（AdipoQ）基因真核表达载体并在减毒沙门氏菌中表达,为AdipoQ对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的基因治疗提供依据.方法：从人脂肪组织中提取总RNA,通过实时荧光定量PCR（rRT-PCR）方法获得Adi-poQ基因并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,构建pEG-FP-N1-AdipoQ重组载体.重组质粒经鉴定后再电转入减毒沙门氏菌SL7207中表达.结果：克隆的人AdipoQ基因744bp测序结果显示：1个碱基发生突变,654位：A→T,突变率为0.1%,氨基酸Glu→Asp.经SDS-PAGE,Western Blot检测融合蛋白Mr约为55×10^3（绿色荧光蛋白Mr约为27×10^3）,能够被AdipoQ抗体识别.结论：成功构建携带AdipoQ基因真核表达载体的减毒沙门氏菌株,AdipoQ基因能够在减毒沙门氏菌中表达并与绿色荧光蛋白融合.为进一步研究其在NAFLD中的作用机制奠定了基础.     

TGF-β1真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的：构建人转化生长因子-β1（TGF-β1）的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达,为阐明TGF-β1在肝纤维化发生、发展中的作用以及建立相应的基因沉寂治疗途径奠定基础.方法：从人的肝脏组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人TGF-β1基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1,转染真核表达细胞COS-7中,通过荧光显微镜检测其表达,RT-PCR和Western Blot检测TGF-β1基因在真核细胞中的表达.结果：通过RT-PCR方法克隆人TGF-β1基因为1173bp,与目的基因片段大小相一致; 测序结果显示,于531位有1个碱基突变：T→C,为无义突变.通过RT-PCR和Western Blot检测到TGF-β1基因的表达,其融合蛋白分子质量约为52ku（绿色荧光蛋白分子质量约为27ku）,说明重组质粒在COS-7细胞内正常表达.结论：成功的构建了真核表达质粒pEGFP-N1-TGF-β1,并在真核细胞COS-7中表达,为进一步研究其在肝纤维化的基因治疗中奠定了基础.     

纳洛酮早期应用于心肺脑复苏中的疗效观察

目的 探讨纳洛酮在早期心肺脑复苏中的治疗效果.方法 45例心脏骤停患者随机分为两组:治疗组(23例)予纳洛酮治疗及常规复苏治疗,对照组(22例)仅予常规复苏治疗,观察两组患者的自主循环恢复率、自主呼吸恢复率、意识恢复时间、复苏成功率及48 h存活率.结果 治疗组自主循环恢复19例(82.61%)、自主呼吸恢复13例(56.52%)、意识恢复时间(35.O±12.5)min、复苏成功12例(52.17%)及48 h存活12例(52.17%),与对照组[分别为11例(50.00%)、6例(27.27%)、(48.0±11.8)min、5例(22.73%)、4例(18.18%)]比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 纳洛酮早期应用于心肺脑复苏疗效显著且安全.     

尿微量蛋白定量的比值法测定

尿微量蛋白的定量测定需留取 2 4ｈ尿 ,殊为不便。近年我科用尿蛋白 /肌酐(ｕｐ/ｕＣｒ)的比值取代原方法 ,取得良好效果。介绍如下 :1　一般资料我们曾对 50例肾病患者男性 2 7人 ,女性 2 3人 ,最小年龄 7岁 ,最大年龄 4 6岁 ,平均年龄 2 3 .55岁。病例包括尿毒症 11例。肾病综合征 19例。亚临床肾炎2 0例 ,均同时作二种方法检测对照。2　方　法尿总蛋白 (ＴＰ)用 3 %磺基水杨酸沉淀法测定 ,尿白蛋白 (Ａｉｂ)、ＩｇＧ均用免疫浊度法测定 ,同时取晨尿标本检测尿肌酐 (采用东芝ＴＢＡ - 40ＦＲ全自动生化分析仪 )、计算出ｕｐ/ｕＣｒ之比值…     

超声刀手术治疗良性结节性甲状腺肿的护理

超声刀辅助颈部小切口手术治疗良性结节性甲状腺肿，术前术后的护理措施必须到位。在做好基础护理的同时，术前需要注意患者的心理变化、做好术前准备工作，术后在6小时内要密切观察患者的生命体征，注意观察是否有并发症的迹象，对引流管要特别注意观察引流液的性状。做好护理工作，可以促使患者早日康复。     

大电导钙离子激活钾通道与糖尿病冠状动脉病变

钙离子（Ca^2＋）激活钾通道根据电导大小和药理特性的差异可分为3类：即大电导ca^2＋激活钾通道（BK）、中电导Ca^2＋激活钾通道（IK）和小电导Ca^2＋激活钾通道（SK），其中BK通道因其对血管调节作用较大且分布广泛而备受关注^[1].BK通道广泛存在于兴奋和非兴奋细胞，在血管平滑肌细胞（VSMCs）膜上表达尤为丰富，不仅参与细胞膜电位的。     

血栓通联合β-七叶皂甙钠治疗突发性耳聋的疗效观察

目的：观察血栓通联合β-七叶皂甙钠治疗突发性耳聋的临床疗效。方法：30例患者静脉滴注血栓通和β-七叶皂甙钠，14天为1疗程。治疗前后检查电测听和血液流变学指标。结果：30例患者治疗后平均听力提高40dB，总有效率93．3％，血液流变学指标显著改善。结论：血栓通联合β-七叶皂甙钠能有效治疗突发性耳聋。     

坐位心电图对左侧气胸的诊断价值

目的评价坐位心电图对左侧气胸的诊断价值。方法对比分析70例左侧气胸患者（气胸组）与70例有类似心电图改变的其他住院患者（对照组）的平卧位及坐位心电图。结果平卧位两组均表现为I、aVL4-V6R波低电压（1．02±0．35VS．1．61±0．39mV），差异无显著性意义（P〉0．05）；坐位胸导联R波电压气胸组明显增加，增加率170％～820％（328。04％±79．82％），而对照组增加轻微或负增加，增加率-5．16％～40％（13。39％±3．74％），差异有非常显著性意义（P〈0．0：1）。结论平卧位I、aVL、V4-V6R波低电压可作为左侧气胸的参考指标，坐位V4-V6R波电压成倍增加可作为判断左侧气胸的独立指标。