肿瘤坏死因子-α基因多态性与妊娠期糖代谢异常的研究

糖尿病已成为威胁人类健康的重大疾病，妊娠期糖尿病（GDM）作为糖尿病的高危因素已引起学者们的关注，妊娠期糖耐量低减（GIGT）为早期的血糖稳态的改变，与GDM统称为妊娠期糖代谢异常。目前对妊娠期糖尿病的发病机理已深入到分子水平。已知，前炎症细胞因子一肿瘤坏死因子α与胰岛素抵抗有关，本研究观察炎症因子基因背景的改变与妊娠期糖代谢异常之间的关系及其作用。     

超声引导下脐静脉穿刺术用于产前诊断115例分析

目的探讨B超引导下脐静脉穿刺术在产前诊断中的成功率与安全性。方法回顾分析2003年11月至2007年3月115例孕妇因不同原因在超声引导下行脐静脉穿刺术进行产前诊断的临床资料,观察穿刺手术的成功性和并发症。结果一次性穿刺成功111例,成功率96.6%,二次穿刺成功114例,二次成功率为98.3%。手术并发症包括：胎盘或脐带渗血17例（14.9%）,胎儿心动过缓3例（2.6%）,流产、早产0例,感染0例。结论脐静脉穿刺术是一项较为安全易行的可靠的产前诊断取材技术。     

Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。     

急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间通讯的改变

目的 观察急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间隙连接蛋白43 (connexin43, Cx43)表达的变化及通讯功能的改变.方法 体外培养初发急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的与正常人的骨髓基质细胞,采用免疫细胞化学方法观察三者之间Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较三者之间间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication, GJIC)功能的差异.结果 正常人、急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的骨髓基质细胞上Cx43表达的阳性率分别为(88.0±3.5)%、(12.0±2.4) %和(52.0±3.1) %;基质细胞上Cx43蛋白的光密度值分别为(175.08±8.34)、(45.42±3.71)及(94.33±7.20);染料传输的细胞数分别为(9.20±0.35)、(1.84±0.33)和(4.07±0.53).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常人及化疗后完全缓解急性白血病骨髓基质细胞明显减弱.     

溶氧反馈-补料分批技术高密度培养基因重组MAGE1/HSP70/MAGE3工程菌

目的 建立人黑色素瘤抗原MAGE1/HSP70/MAGE3融合蛋白基因重组工程菌E.coli.BL21/pET-MHM的高密度发酵工艺.方法 以摇瓶发酵结果为基础,扩大至NBS Bioflo Ⅳ 20 L发酵罐发酵,利用溶氧反馈-补料分批培养技术,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、活化时间、诱导浓度及时间、pH值及分批补加营养物质等进行优化.结果 保持培养过程中40%的溶解氧,采用半合成培养基、活化至对数生长期时0.2 mmol/L IPTG诱导5 h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,连续3批重复发酵,最终菌密度D(600)均达45～50时,菌体量可提高至70 g/L以上,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38%以上.结论 确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺.     

急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能的研究

目的：研究急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接的功能方法：体外培养正常（正常对照组）及急性淋巴细胞白血病（急淋组）原代骨髓基质细胞,采用细胞免疫组化法及计算机灰度检测观察两组之间Connexin 43表达的变化,采用细胞划痕染料传输技术比较两组之间缝隙连接细胞间通讯（GJIC）功能的差异。结果：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞Connexin 43的表达较正常骨髓基质细胞明显减低,GJIC功能减弱。结论：急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞缝隙连接功能下降可能与白血病骨髓造血微环境功能异常有关。     

β3肾上腺素能受体Trp／Arg突变与糖尿病视网膜病变

目的：研究中国人β3肾上腺素能受体（β3AR）基因Trp64Arg突变与糖尿病视网膜病变（DR）的相关性。方法：随机选取2型糖尿病住院患者144例，男60例，女84例，平均体重指数（BMI）25．2，病程均≥5年。根据眼底荧光造影结果，分为增殖性糖尿病视网膜病变（PDR组）、非增殖性糖尿病视网膜病变（NPDR组）及无糖尿病视网膜病变（对照组）。用酶法测血脂，用葡萄糖氧化酶法测血糖，放免法测血胰岛素、C肽，HPLC法测HbAlc，用PCR—RFLP法判断β3AR基因型。结果：（1）中国人β3AR基因突变率为18．6％，低于Pima印地安人的31％，而高于欧关等白色人种的7％～12％，与日本人突变频率相似。②与正常基因型相比，杂合子BMI（25．8±3．8vs25．0±3．4，P〈0．05）增高，血糖、血脂、血胰岛素、C肽无明显差异。③NPDR组、PDR组与对照组之间β3AR 64Arg等位基因频率无明显差异。结论：β3AR基因参与中国人体重的调节，β3AR Trp64Arg突变与中国人DR发病无关。     

Cyr61在单纯及放创复合伤愈合过程中的表达及其临床意义

目的研究Cyr61在单纯和放创复合伤愈合过程中的表达变化,对伤口愈合和组织改建的影响,及其在创伤实验室诊断中的意义。方法制备单纯及放创复合伤动物模型,采用光镜、免疫组化、RT-PCR等方法,动态观察伤口愈合过程中Cyr61mRNA及蛋白表达变化规律。结果5Gy(γ射线)全身照射后对伤口愈合有明显的损害作用。在伤后第3、6、9、15天,Cyr61表达量均随创伤愈合时间延长而增加;但在同一时间点,放创复合伤组Cyr61蛋白和mRNA的表达量均低于单纯创伤组,第21天放创复合伤组表达继续升高,而单纯创伤组表达下降。Cyr61表达时相拖后与辐射所致伤口愈合延迟一致。结论Cyr61在放创复合伤肉芽组织中表达较单纯创伤组明显降低,影响细胞迁移、新生血管形成和组织改建等重要过程,这可能是辐射所致伤口难愈的重要原因之一,认识Cyr61在创伤愈合过程的表达规律有助于创伤的预后判断和治疗。     

血液透析患者认知功能的研究及护理策略

目的通过事件相关电位P300探讨维持性血液透析患者认知功能,并针对其特点制定护理干预策略。方法52例维持性血液透析患者接受P300及简易智能状态量表(MMSE)检测,以同期健康体检者作对照。结果维持性血液透析患者P300异常率为45.6%,MMSE得分21.3±2.8,明显低于正常对照组,P<0.01。结论维持性血液透析患者认知功能障碍发生率高,积极合理的护理干预对改善患者认知功能有重要意义。     

裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的建立

目的建立适合移植实验使用的裸鼠造血微环境损伤动物模型。方法分别用3．5Gy、5Gy、6．5Gy、8Gy4个^60Coγ辐射剂量照射裸鼠，检测经过辐照后各组裸鼠1、3、5、7、14、21d血象变化，检测辐射后1、7、14、21d裸鼠骨髓基质CFU—F形成情况，用流式细胞仪检测辐射后1、7、14、21d骨髓基质细胞VCAM-1的表达。结果8．0Gy辐射剂量裸鼠死亡率100%；3．5Gy、5Gy、6．5Gy辐射剂量组裸鼠的造血损伤均能在辐射后21天之内自我恢复；6．5Gy组骨髓CFU—F于移植后7d（22±6）、14d（33±6）较3．5Gy、5Gy组均具有显著降低（P〈0．01），VCAM-1表达于7d（21．67±7．45）、14d（22．33±9．07）、21d（23．33±4．51）较对照组显著降低（P〈0．01）、较3．5Gy组差异有显著性（P〈0．05），21d（23．33±4．51）较5Gy组（34．00±4．36）差异有显著性（P〈0．05）。结论6．5Gy是裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的适宜辐射剂量。