结核分枝杆菌新抗原Mtb8.4基因的克隆及真核表达载体的构建

目的 克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因，并构建真核表达载体pcDNA3.1( )—mtb8.4。方法 提取人结核杆菌H37Rv株的基因组作为模板，进行PCR扩增，获得mtb8．4目的基因后，与pcDNA3．1( )载体进行连接重组。结果 pcDNA3．1( )—mdt8.4真核表达栽体构建完成后，用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定，证实其构建成功。结论 pcDNA3.1( )—mtb8．4真核表达质粒的成功构建，为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备结核病pcDNA3．1( )—mtb8.4DNA疫苗奠定了基础。     

乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的构建与鉴定

目的采用基因重组技术,将乙肝病毒4段小基因与协同刺激分子CD80基因嵌合,构建成嵌合乙肝小基因DNA疫苗。方法①根据文献选择和设计HBV的一段pres2、三段core表位编码小基因,以人工合成DNA片段P1~P10,通过退火、连接成为含约170bp的嵌合基因,用HindⅢ酶切;②提取和纯化pcDNA3-CD80,用HindⅢ酶切和去磷酸化;③将酶切小基因定向插入pcDNA3-CD80载体的HindⅢ位点之间,构建成pcHBV-CD80小基因质粒;④pcHBV-CD80转入E.coli JM109扩增、提取质粒,测序鉴定。结果①各DNA小片段经退火、连接,成功嵌合为一大小约170bp之目的基因;②pcDNA3-CD80提取、酶切均成功;③170bp之目的基因定向克隆到载体上,构建了重组质粒pcHBV-CD80,经测序鉴定均构建正确。结论乙肝病毒小基因与协同刺激分子CD80嵌合DNA疫苗构建成功。     

茶碱对喹啉酸损毁NBM核所致大鼠学习记忆的影响

目的　采用一次性训练被动跳台实验 ,观察茶碱对喹啉酸损毁单侧NBM核团造成大鼠记忆障碍病理模型的影响。方法　丹酰氯柱前衍生反相高效液相 (HPLC)法测定小鼠脑内谷氨酸 (Glu)和γ 氨基丁酸 (GABA)含量。结果　茶碱组在跳台法的动物被动回避性实验中错误次数明显减少并且记忆时间明显延长 ,脑皮层中的γ 氨基丁酸含量升高 ,分别与模型组比较有显著性差异 (P <0 0 1 )。结论　茶碱对痴呆大鼠的学习记忆功能具有明显的改善作用     

ST段抬高型急性心肌梗死患者外周血心肌特异性微小RNA-208a水平的变化

目的 观察心肌特异性微小RNA-208a(microRNA-208a,miR-208a)在ST段抬高型急性心肌梗死(STEAMI)患者血中的含量变化,探讨血miR-208a在STEAMI诊断中的作用.方法 采集30例STEAMI患者发病12h内的外周血,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血中miR-208a相对含量,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量.以30例健康者血标本作为对照.结果 STEAMI患者血cTnⅠ (μg/L)、CK-MB (μg/L)含量明显高于健康对照者(cTnⅠ:17.72±8.43比0.05±0.01,CK-MB:250.83±177.26比71.20±20.50,均P＜0.01).在PCR 60个循环内,健康对照者血均未能检出miR-208a,STEAMI患者血中可检出miR-208a(0 ～6 h为44.95±4.77,6～ 12 h为43.98±4.68);以健康对照者血miR-208a阈值循环(Ct)值60为基础进行统计,AMI患者血miR-208a相对含量至少高于健康对照者215倍以上,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血miR-208a可作为STEAMI患者早期诊断的新型敏感生物学标志.     

34例甲型H1N1流感病例临床特征分析

目的研究34例甲型H1N1流感患者的临床特征。方法分析总结34例甲型H1N1流感患者的流行病学资料、临床表现、实验室检查、影像学资料以及治疗经过。结果患者年龄6～23岁,平均(15±4.56)岁。患者均为本市本土发病,有7例(20.59%)患者在起病前有短暂外地居住史。常见主要临床症状有发热34例(100%),畏寒、寒战6例(17.65%),全身乏力、酸痛10例(29.41%),头晕、头痛8例(23.53%),咽痛28(82.35%),咳嗽18例(52.94%)。主要体征有咽部充血25例(73.53%),扁桃体肿大13例(38.24%),双肺啰音4例(11.76%)。实验室检查:外周血常规:WBC绝对计数大于正常值上限4例(11.76%),低于正常值下限有9例(26.47%)。肝功检测仅2例(5.88%)谷丙转氨酶高于正常参考值(>42 IU/L),肾功均在正常范围内。本组病例入院时甲型H1N1流感病毒核酸检测(RT-PCR)均为阳性,入院后对患者进行动态甲型H1N1流感病毒核酸检测发现,转阴时间为入院后1天,最长的在出院后1周仍然发现甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性。本组病例均予以痰热清和/或者抗病毒冲剂以...     

HSP70/CD80嵌合DNA疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用

目的 研究HSP70/CD80嵌合DNA质粒对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用,为安全可靠的新型免疫调节性疫苗奠定基础.方法 将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、哮喘组、pcDNA3.1载体组、HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组,每组10只.用HSP70/CD80嵌合疫苗免疫小鼠后,建立鸡卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型,观察其气道阻力变化,支气管肺泡灌洗液中IL-13、IFN-γ含量的变化.取肺组织进行病理组织学分析,观察肺内炎症情况.结果 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,能有效减轻气道炎症(P＜0.05),降低气道阻力(P＜0.05),肺泡灌洗液中IFNl的分泌增加(P＜0.05),IL-13降低.结论 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移并增加IFN-γ的生成,减轻气道炎症,降低气道阻力,这为过敏性哮喘新型免疫调节性疫苗的机制及应用研究提供了实验资料.