NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达

背景研究表明,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用,但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达,探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只,过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白,并制备视网膜切片,分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化;采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位,并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实,C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达,而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达,随着鼠龄的增加,gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加,生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81,P=0．00）;生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）,以出生后14d表达量最高,为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加,视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致,不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00,P〈0．01）,不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明,rd小鼠出生后10d视网膜内层gp91phox阳性细胞开始增多,出生后14d达到高峰,外核层也可见到gp91phox阳性细胞。免疫荧光双染结果显示,gp91phox与小胶质细胞标志物CD11b共表达,呈现橙色荧光。结论NADPH氧化酶在rd小鼠视网膜中的表达随着鼠龄的增长而增多,其表达与小胶质细胞活化及感光细胞的凋亡相平行,提示NADPH氧化酶可能在小胶质细胞活化导致的感光细胞凋亡中发挥致病作用。     

兔视网膜下非活动载片植入后视网膜免疫组织化学观察

目的 观察兔视网膜下非活动载片植入后视网膜相关蛋白的表达.方法 健康成年新西兰白兔27只,随机分为手术组、伪手术组及对照组,3组分别为12、12、3只兔.手术组和伪手术组再分为手术后7、15、30、60 d亚组,每组随机分配3只兔,手术组为非活动载片植入,伪手术组非活动载片植入随即取出.于手术后7、15、30、60 d处死动物后进行免疫组织化学染色,对照组于饲养30 d后处死动物行免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)在视网膜的表达.结果 手术组手术后7、15、30 d组载片上外层视网膜明显变薄,内层细胞排列紊乱;60 d组胶质细胞增生,手术组载片上视网膜GFAP和BDNF阳性表达均较伪手术组和对照组增加,伪手术组GFAP和BDNF阳性表达均较对照组增加,各组内各时间点间GFAP和BDNF表达未见明显差异.结论 载片植入后局部视网膜神经保护相关蛋白表达升高,提示载片植入可能有神经保护作用参与,但其作用有限.     

降糖明目胶囊对糖尿病视网膜新生血管抑制作用的观察

目的观察降糖明目胶囊对STZ-糖尿病小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病小鼠模型。实验小鼠随机分为正常对照组、STZ模型对照组、降糖明目胶囊治疗大、中、小剂量组(分别为临床用药的18、9、4.5倍),每天灌胃给药。在诱发糖尿病后第3、7、30天和第60天,测空腹血糖,并称体质量。在诱发后第80天,进行视网膜血管计数及病理观察。结果模型组小鼠体质量明显降低,空腹血糖明显升高,视网膜内血管计数增高,视网膜节细胞神经纤维层增厚,节细胞核排列紊乱;降糖明目胶囊大、中、小剂量治疗组可显著缓解体质量减轻症状,大、中剂量组还对小鼠空腹血糖的升高有明显的抑制作用,大、中、小剂量组可使视网膜内血管计数较STZ-糖尿病小鼠明显降低,视网膜节细胞神经纤维层改变不明显。结论降糖明目胶囊对STZ诱发糖尿病小鼠的视网膜新生血管增生有抑制作用。     

新冠疫情抗疫期间“互联网+医疗”显观优势

<正>新型冠状病毒肺炎突如其来,传播迅猛。控制疾病传播的最佳策略是减少人口流动,减少人与人之间的密切接触。对很大一部分患者群体来说,"互联网+医疗"远距离、非接触性的优势是非常实用和急需的新医疗形式。在抗击新冠疫情期间,互联网+医疗服务模式解决了很多工作难点,并加速推进了多项工作的进展。     

Mer-/-视网膜色素上皮细胞在吞噬光感受器外节盘膜中的基因表达谱的改变

目的： 研究在视网膜色素上皮细胞（RPE）吞噬光感受器外节盘膜（POS）时,由于RPE的Mer基因敲出（Mer-/-）后,所导致的基因表达谱的改变。 方法： 将RPE从Mer-/-小鼠（实验组）和野生型小鼠（对照组）中分离出后,并培养至第3代。在实验组和对照组中,将提取的POS加入含有20nMGas6和Protein S的培养液中,以激活Mer受体通道所介导的RPE特异性吞噬POS。在刺激吞噬后3小时和12小时终止实验,在两组中分别通过显微镜评价RPE吞噬POS的能力,通过基因表达谱芯片筛选出差异表达的基因。并且,在相同的实验条件下,在实验组和对照组中,分别重复3次吞噬实验,采用QPCR,对于其中5个差异表达的基因进行确认。 结果： 显微镜下观察到不论在3小时还是12小时,与对照组相比,实验组中内吞的POS颗粒少。在基因表达谱芯片中发现,反应3小时和反应12小时,实验组中分别有38个和45个已知基因上调,68个和59个已知基因下调。与对照组相比,实验组中RPE内吞POS能力的下降与基因表达谱中差异表达的基因相一致,比如,发现信号转导（WNT,MAPK）、吞噬（Vav3, Hsd11b1）、细胞骨架成份（Myo7a）和代谢等方面相关的基因在不同的时间点均有不同的表达谱改变。QPCR结果发现Vav3、Hsd11b1、Myo7a、Rtn2等基因的表达变化与基因芯片结果相一致。 结论： Mer-/-基因敲出后的RPE在吞噬过程中随时间变化而出现的不同的基因表达谱的改变,给研究Mer受体通道介导的RPE吞噬POS的分子机制提供了新的研究方向和线索,特别有利于MerTK基因突变所致的人类视网膜色素变性患者发病机制的研究。     

视网膜一步穿刺法植入视网膜下聚酰亚胺载片的实验研究

目的探讨视网膜一步穿刺法植入视网膜下人工视觉载片的可行性。方法健康成年新西兰白兔24只,采用随机数字表法分为植入组和伪植入组,每组12只兔。玻璃体切除手术后,将聚酰亚胺(polyimide)载片通过直接穿刺视网膜植入到视网膜下腔,伪植入组于成功植入0.5 min后将载片取出。植入手术后15、30、60 d进行眼底照相和光学相干断层成像观察。结果所有载片均可成功植入至视网膜下腔。2组术中和观察期内无载片移位、视网膜脱离和眼内出血等合并症。植入组后期载片上方视网膜变薄,伪植入组视网膜厚度正常。结论视网膜一步穿刺法可安全有效地将视觉载片植入兔眼视网膜下腔。该方法适用于视网膜下人工视觉的短期研究。     

Met-RANTES 在 rd 小鼠遗传性视网膜变性中的作用

目的：研究CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠视网膜外核层形态的影响,探讨其在rd小鼠遗传性视网膜变性中的潜在治疗作用。方法以出生后7drd小鼠作为研究对象,随机分为5组,分别给予腹腔注射Met-RANTES、PBS和玻璃体腔注射不同浓度Met-RANTES、PBS,直到rd小鼠出生后14d,过量麻醉法处死后摘取眼球制作冰冻切片,HE染色后观察测量视网膜后极部外核层厚度。结果腹腔注射met-RANTES、玻璃体腔注射0．7μlMet-RANTESrd小鼠与对照小鼠视网膜外核层细胞层数无明显变化（P＞0．05）。玻璃体腔注射1．0μlMet-RANTES和1．5μlMet-RANTES眼球视网膜外核层比对照眼球视网膜外核层厚,有统计学差异（P＜0．05）。结论CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠遗传性视网膜变性可能存有潜在治疗作用。     

大泡性角膜病变水通道蛋白和Na+K+-ATP酶表达变化

目的 研究水通道蛋白1(Aquaporin-1,AQP1)、水通道蛋白4(Aquaporin-4,AQP4)和Na+,K+-ATP酶在人大泡性角膜病变角膜中的表达变化,探讨其在大泡性角膜病变发生机制中的作用.方法 运用免疫荧光技术和免疫印迹方法分别测定人大泡性角膜病变角膜和正常角膜中AQP1、AQP4和Na+,K+-ATP酶的表达变化.结果 大泡性角膜病变角膜AQP1表达量升高而AQP4和Na+,K+-ATP酶表达量下降.结论 本实验结果表明,AQP1、AQP4和Na+,K+-ATP酶在角膜组织水容量调节中具有重要意义,它们的异常表达可能与大泡性角膜病变的病理改变有一定关联.     

降糖明目汤对糖尿病小鼠模型血糖及体质量的影响研究

目的通过观察降糖明目汤对经链脲佐菌素(STZ)诱导的C57BL/B小鼠糖尿病模型血糖及体质量的影响,探讨其对糖尿病视网膜病变治疗作用的机制。方法40只C57BL/B小鼠,随机分为A组:正常对照组、B组:正常小鼠喂中药组、C组:糖尿病小鼠模型组、D组:糖尿病小鼠模型喂中药组。应用链脲佐菌素(STZ)诱导的C57BL/B小鼠糖尿病模型,于造模后1d、7d、30d、60d、80d测量并记录空腹尾血糖并称量体质量。结果经STZ诱导糖尿病成模后,糖尿病模型C组血糖较糖尿病模型给药D组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病模型C组体重较糖尿病模型给药D组低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论临床应用证实,降糖明目汤对早期糖尿病视网膜病变有治疗作用。本实验观察可见降糖明目汤对糖尿病小鼠血糖及体质量的改善并不显著,说明降糖明目汤并非通过降低血糖而对糖尿病视网膜病变起到治疗作用。因此该药物对糖尿病视网膜病变的抑制作用尚需进一步试验探究。     

青光眼药物治疗的新趋势-合理联合用药

合理联合用药是青光眼药物治疗的新趋势.本文介绍拉坦前列素分别与噻吗心安、毛果芸香碱、碳酸酐酶抑制剂、双三甲基乙酰肾上腺索、喘灵,噻吗心安与杜塞酰胺以及毛果芸香碱与噻吗心安联合降眼压作用的研究进展.