肿瘤微环境中免疫细胞的生物学功能及其在癌症免疫治疗中的作用进展

21世纪初,Hanahan等[1]首次总结了癌症六大特征能力,即生长信号自给自足、无限复制潜力、逃避凋亡、对抗生长信号不敏感、持续血管生成、组织侵袭/转移。随着研对癌症研究深入,癌细胞和免疫细胞之间作用与关系逐渐被重视,并证实为癌症新特征。目前可以明确的是,除癌细胞外,肿瘤微环境还含有一系列免疫细胞、基质细胞、内皮细胞以及癌相关成纤维细胞。癌细胞利用一系列机制逃避免疫监督和破坏,基于免疫逃避机制,临床研究人员推出了多种免疫治疗方法,并在临床上应用较广[2]。相比传统化疗,免疫治疗机制是将肿瘤微环境内外免疫细胞进行特异性识别和攻击癌细胞,理论上提高了免疫治疗方法的特异性,降低了其不良反应[3]。     

不同浓度H2O2体外诱导大鼠海马细胞氧化损伤观察

目的 探索H2O2诱导大鼠海马细胞氧化损伤模型的最佳浓度.方法 应用不同浓度的H2O2与大鼠海马细胞共同培养 24 h.观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活性;免疫组化法检测细胞中Bax与Bcl-2的蛋白表达.结果 与正常组细胞比较,当H2O2浓度高于 1 mmol/L时细胞形态损伤明显加重,细胞活性降低,bax蛋白高度表达;当 H2O2浓度低于1 mmol/L时细胞形态无明显损伤, 细胞活性无明显改变,bcl-2蛋白高度表达.结论 在本实验条件下H2O2浓度1 mmol/L时为模型最佳复制浓度.     

后循环短暂脑缺血发作患者外周Treg、IL-17检测及意义

目的探讨后循环短暂缺血发作（TIA）患者外周血CD4。CD25’调节性T细胞（Treg）比例、白介素17（IL-17）的水平变化及意义。方法2012年9月至2013年2月纳入后循环TIA患者65例,根据ADCD2评分分为高危组（4～7分,34例）和低危组（0～3分,31例）,另取同期本院体检中心健康成人30例作为对照组。采用流式细胞分析法及酶联免疫吸附法检测各组外周血Treg占CD4＋T细胞比例及血清IL-17浓度值。结果高危组外周血Treg与CD4’细胞比值（11．38±3．58）％显著低于低危组[（14．83±4．10）％,P〈0．05]和对照组[（15．60±4．19）％,P〈0．05],低危组和对照组没有统计学差异（P〉0．05）。高危组血清IL-17浓度[（312．65~63．69）pg／m1]和低危组[（290．13＋63．65）pg／ml,P〈0．05]显著高于对照组[（207．26±63．00）pg／ml,P〈0．05],而高危组和低危组之间无统计学差异（P〉0．05）。结论高危后循环TIA患者外周血Treg减少、IL-17浓度升高,可能是导致其外周血自身免疫调节失去平衡,进而发生脑梗死的原因之一。     

刺五加多糖的抗氧化损伤作用研究

摘要 目的：研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides，ASPS）对大鼠海马细胞有无抗氧化损伤作用，并探讨其可能机制。方法：运用海马神经细胞原代培养技术，采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化；MTT法测定细胞活性；免疫组化法检测细胞中P53蛋白表达；检测细胞外液中的乳酸脱氢酶（LDH）的活力，细胞匀浆液中的过氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）产生。结果：形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻；ASPS组细胞活性（0.46）比模型组细胞活性（0.36）高(P＜0.01) , ASPS组P53表达量较低而模型组表达量较高； LDH、NOS活力及MDA生成量ASPS组明显低于模型组，但SOD活力ASPS组显著高于模型组。结论：ASPS能提高海马神经细胞的抗氧化能力，并具有一定的浓度依赖性。     

间充质干细胞源性外泌体提取鉴定方法研究

目的:探讨间充质干细胞源性外泌体的成功提取方法。方法:应用试剂盒二次提取huc-MSCs外泌体,凝胶电泳法及BCA蛋白定量法检测两次提取外泌体蛋白纯度与含量的不同;电镜及流式细胞仪鉴定外泌体。结果:凝胶电泳法及BCA蛋白定量法证实二次提取后外泌体蛋白纯度提高,形态特征明显,并高表达CD63及CD81蛋白。结论:间充质干细胞外泌体经过二次提取纯化后,纯度提高,可以更准确的开展后续实验。     

紫外线照射对血管内皮细胞的损伤效应

目的探究不同剂量紫外线照射对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的细胞形态、细胞凋亡率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的影响。方法实验分正常组和3个不同剂量辐照组,辐照组分别采用10J·m^-2、20J·m^-2、40J·m^-2紫外线照射血管内皮细胞,通过流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测各组细胞凋亡率,荧光试剂盒检测ROS的水平和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定VEGF和bFGF的含量。结果与正常组相比,细胞经不同剂量紫外照射24 h后,细胞凋亡率随着照射剂量的增加而升高;ROS、VEGF、bFGF的含量随着照射剂量的增加而升高。结论紫外照射对血管内皮细胞有一定程度的损伤效应,可能与诱导细胞凋亡,释放ROS和激活VEGF和bFGF有关。     

刺五加多糖对海马神经元抗氧化酶系统的影响

目的 研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides,ASPS）对大鼠海马神经元抗氧化酶系统的影响. 方法 运用海马神经细胞原代培养技术,采用过氧化氢（H₂O₂）诱导建立细胞氧化损伤模型. 实验共分为6组：阴性对照组、模型组和4个ASPS组（终浓度为10.00,5.00,2.50,1.25 μg.mL^-1）. 观察细胞形态学变化; MTT法测定细胞活性; 免疫组化法鉴定海马神经元,化学比色法测定细胞内超歧物过氧化物酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力和丙二醛（MDA）含量. 结果 形态学观察显示：与模型组比较,ASPS组细胞损伤程度明显减轻; ASPS组细胞活性比模型组细胞活性高（P＜0.01）,SOD、CAT、GSH Px活力ASPS组明显高于模型组,但MDA的含量ASPS组显著低于模型组. 结论 ASPS能提高海马神经元的抗氧化酶的活力,并对海马神经元氧化损伤有保护作用.     

成体神经干细胞脑内移植对脑外伤大鼠神经功能的影响

目的 观察脑内移植成体神经干细胞对脑外伤大鼠中枢神经功能的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为5组,正常组(A)、模型组(B)、假手术组(C)、PBS移植组(D)、干细胞移植组(E).Morris水迷宫实验测试各组大鼠的学习记忆能力;免疫组织化学及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达.结果与A组比较,B组大鼠寻找隐形平台的时间明显延长(P<0.01),脑组织中BDNF(27.70±1.65)ng/g蛋白、NGF(59.80±9.40)ng/g蛋白含量下降显著(P<0.01),模型复制效果理想;与B组比较,E组大鼠学习及功能明显改善,脑内BDNF(49.30±2.87)ng/g蛋白、NGF(88.50±9.23)ng/g蛋白的表达量上升,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成体神经干细胞的脑内移植能明显恢复外伤大鼠中枢神经功能.

Abstract：

Objective To study the neuroprotetive effect of dault neural stem cells intracerebral implantation to rats subjected to traumatic brain injury.Methods Sixty Wistar rats were divided into 5 groups randomly: normal group ( A ),model group ( B),sham-operated group ( C ),PBS transplated group (D),neural stem cells transplated group (E).Morris maze method was adopted to observe the impact on the learning and memory.Immunohistochemisty and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)were used to detect the expression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) and nerve growth factor (NGF) in brain issue.Results As compared with group A,in Morris maze experiment,time to reach the end point of the maze in group B was significantly prolonged ( P ＜ 0.01 ),and the content of BDNF (27.70 ± 1.65 ) ng/g prot and NGF ( 59.80 ± 9.40 ) ng/g prot were decreased significantly ( P ＜ 0.01 ).As compared with group B,the function of learning and memory was obviously improved,and the expression of BDNF (49.30 ±2.87) ng/g prot and NGF (88.50 ±9.23) ng/gprot in brain issues were statistically increased in group E (P ＜0.01 ).Conclusion Transplantation of adult neural stem cells can ameliorate learning and memory deficits following traumatic brain injury in rats.     

成体神经干细胞培养方法的建立

目的 探讨体外建立培养成体神经干细胞(MSC)的方法.方法 从6周龄大鼠脑组织中分离神经干细胞,用神经干细胞培养液[DMEM/F12培养液添加1%N2、2%B27、20 μg/L表皮生长因子(EGF)和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]使其稳定增殖,10%胎牛血清诱导其贴壁分化.倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE,成熟神经元的特异性标志)、半乳糖脑苷脂(Galc-C,成熟少突胶质细胞的标记物)的表达.结果 分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测显示Nestin阳性细胞为97.6%,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE、Galc-C阳性细胞.结论 采用无血清的神经干细胞培养液能培养出具有分化潜能的成体神经干细胞.     

刺五加多糖对H_2O_2损伤的海马神经元表达NF-κB的影响

目的研究刺五加多糖(ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元表达核转录因子-κB(NF-κB)的影响,进一步探讨ASPS对海马神经元的保护作用。方法从新生大鼠脑分离海马,其神经元经原代培养后分为阴性对照组、损伤模型组(1 mmol/LH_2O_2诱导)、ASPS干预组(该组按ASPS10、5、2.5μg/ml的终浓度又分为3个亚组)。采用H_2O_2复制海马神经元氧化应激损伤模型。用免疫组化法和逆转录PCR法检测NF-κB的表达。同时观察各组海马神经元的形态学变化。结果与损伤模型组比较,ASPS干预组神经元损伤程度明显减轻。NF-κB在10μg/ml和5μg/ml ASPS干预组中的表达水平明显降低。结论 ASPS能明显减少受损海马神经元NF-κB的表达,对海马神经元有明显的保护作用。