高果糖膳食对大鼠脂肪组织肾素-血管紧张素系统的影响

目的:观察高果糖膳食对大鼠脂肪组织炎症及肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的影响,探讨Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)炎症信号通路在其中的作用。方法:16只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高果糖组、高果糖+si RNA阴性对照组及高果糖+TLR2-siRNA组,正常对照组以普通饲料喂养,高果糖组以含60%果糖饲料喂养,高果糖+TLR2-siRNA组和高果糖+si RNA阴性对照组大鼠另分别予以TLR2-siRNA和si RNA阴性对照转染。干预14周后,检测大鼠血尿酸水平,ELISA法检测血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的水平,称取腹部脂肪重量,免疫组化法检测脂肪组织巨噬细胞的浸润,realtime PCR法检测脂肪组织IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、AGT、血管紧张素转化酶1(angiotensin-converting enzyme 1,ACE1)、血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)和血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R) m RNA表达,Western blot检测TLR2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,高果糖组大鼠血尿酸明显升高,腹部脂肪重量明显增加,血清IL-6、TNF-α、AGT和AngⅡ水平明显升高,脂肪组织巨噬细胞浸润数量明显增多,脂肪组织IL-6、TNF-α、MCP-1、AGT、ACE1、AT1R和AT2R的m RNA水平明显升高(P 0. 05);与高果糖组比较,高果糖+TLR2-siRNA组大鼠血尿酸及腹部脂肪重量无明显变化,TLR2蛋白表达显著减低,血清及脂肪组织炎症因子的m RNA水平显著降低,脂肪组织巨噬细胞浸润数量明显减少,血清AGT、AngⅡ及脂肪组织RAS信号通路相关因子的m RNA水平明显下调(P 0. 05)。结论:高果糖膳食上调脂肪组织RAS,其机制可能与TLR2炎症信号通路激活相关。     

AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D联合检测在肝细胞癌中的诊断价值

目的 探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、异常凝血酶原(prothrombin induced by vitamin K absence/antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)和D-二聚体(D-dimer,D-D)联合检测对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值.方法 本研究为回顾性病例对照研究.比较本院2018-01/2021-01月83例HCC患者、91例肝硬化患者及同期检测的105例健康体检者的AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D的检测水平.采用Spearman相关分析方法探讨AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D的关系,通过ROC曲线评估3种标志物单项检测和联合检测对HCC患者的诊断效果.结果 Spearman相关分析显示,HCC患者中AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D三者之不存在显著相关性(P＞0.05),是3个独立的指标.与健康对照组和肝硬化组相比,HCC组患者AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D的水平显著升高(P＜0.01);受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)显示,AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D的cutoff值分别为9.61 ng/ml、52.50 mAu/ml和255.50 ng/ml,其中PIVKA-Ⅱ在单项检测中的曲线下面积(area under the curve,AUC)最大,AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D三者联合检测的AUC值为0.962(95％ CI:0.937～0.988)(P＜0.01),大于任意两项联合检测或单项检测,其敏感度、特异度、约登指数、阳性预测值和阴性预测值分别为85.5％、95.6％、81.1％、85.3％和97.5％.结论 AFP、PIVKA-Ⅱ和D-D三者联合检测对HCC患者具有重要的临床诊断价值.     

大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响

目的 探讨大鼠颅脑损伤后脑组织miR-122-5p含量变化及其对神经功能的影响。方法 将40只成年SD大鼠随机分为假手术组,TBI模型组,乱序miRNA组,miR-122-5p模拟物组。采用Feeney法制备TBI大鼠模型;乱序miRNA组造模24 h后,立体定向注射乱序miRNA 5 μl（20 μmol/L）;miR-122-5p模拟物组造模24 h后,立体定向注射miR-122-5p模拟物组5 μl（20 μmol/L）。qRT-PCR法检测大鼠脑组织miR-122-5p的表达变化;免疫印迹法法检测p53蛋白表达水平;水迷宫法检测学习记忆功能;TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况;流式细胞术检测脑细胞线粒体膜电位的变化。结果 与假手术组大鼠比较,模型组和乱序miRNA组大鼠脑组织miR-122-5p表达明显减少,p53蛋白显著上调,脑组织细胞凋亡数明显增多,线粒体膜电位下降显著,水迷宫测试大鼠寻找隐形平台时间显著延长;与模型组大鼠比较,miR-122-5p模拟物组大鼠miR-122-5p表达明显增加,并伴随p53蛋白低表达,细胞凋亡水平下降,神经功能障碍得到明显逆转。结论 颅脑损伤后miR-122-5p的表达下调可能导致p53蛋白的表达升高,促进神经细胞凋亡。     

TRAIL与硝普钠联合诱导胶质瘤细胞株U251凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(TRAIL)与硝普钠(SNP)联合诱导U251细胞凋亡的协同作用.方法 将TRAIL和SNP单药或联合作用于U251胶质瘤细胞系.MTT比色法、流式细胞术检测细胞生长抑制率、凋亡率;Western blot法检测DR5、Caspase-3、Bcl-2、Survivin 蛋白表达.结果 TRAIL和SNP单药组对U251细胞活性均有抑制作用;联合作用组细胞凋亡率明显高于单药组和对照组(P＜0.01),并存在协同作用;联合作用组较对照组DR5、Caspase-3蛋白表达明显上调,Survivin、Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.01).结论 TRAIL和SNP可显著抑制U251细胞增殖,具有协同细胞凋亡诱导作用.其机制与上调DR5、Caspase-3,下调Bcl-2、Survivin 蛋白表达有关.     

慢性铅中毒对大鼠脑神经细胞caspase家族的影响

目的 研究不同浓度醋酸铅染毒对大鼠脑细胞caspase家族表达的影响,探讨铅中毒诱导脑神经细胞凋亡的可能机制.方法 40只Wistar大鼠随机分为4组:正常组(双蒸水,A组),高铅浓度组(2 g/L,B组),中铅浓度组(1 g/L,C组),低铅浓度组(0.5 g/L,D组),各组大鼠分别自由饮用不同浓度的醋酸铅水溶液 2个月; 分光光度法检测脑组织匀浆液中caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的含量.结果 与A组大鼠比较,随染铅剂量增加B、C、D组大鼠脑组织中caspase- 3、caspase-8、caspase-9蛋白含量显著增高(P<0.001 、P<0.01、P<0.05),并出现一定的浓度依赖性.结论 铅中毒能明显增加caspase家族蛋白的表达,诱导大鼠脑神经细胞凋亡.     

血管紧张素原基因多态及血管生成因子与早发型重度子痫前期的相关性研究

目的:探讨血管紧张素原(AGT)基因多态性与早发型重度子痫前期相关性.方法:应用聚合酶链反应(PCR)及免疫组织化学染色法(ELISA),检测50例早发型重度子痫前期患者(子痫前期组)和50例正常孕妇(对照组)的血清中AGT基因多态及血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PlGF)、可溶性VEGF受体1(sFlt-1)的表达.结果:(1)对照组血清中VEGF含量(772.29±58.78)ng/L,PlGF含量(427.89±48.59) ng/L显著高于子痫前期组VEGF含量(410.95±55.74)ng/L,PlGF含量(337.44±68.46) ng/L,差异具有统计学意义(P＜0.01).(2)对照组血清中sFlt-1含量(32.37±9.64)ng/L显著低于子痫前期组sFlt-1含量(155.57±37.56)ng/L,差异具有统计学意义(P＜0.01).(3)子痫前期组MM型比率显著下降(P＜0.01),TT型比率明显上升(P＜0.01),MT型比率变化无统计学差异(P＞0.05).结论:携带有AGT基因TT型的妇女易发生早发型重度子痫前期,进一步探讨VEGF、PlGF和sFlt-1,有利于早发型子痫前期的病因及发病机制的研究.     

慢性铅中毒对大鼠脑组织抗氧化能力的影响

我们观察了染铅后大鼠脑神经细胞抗氧化能力,拟为探讨铅对神经细胞氧化损伤机制提供依据。     

葡萄籽原花青素对过氧化氢致大鼠海马神经元损伤的保护作用

[目的]观察葡萄籽原花青素（grape seed proanthocyanidin,GSP）对过氧化氢（H2O2）致大鼠海马神经元损伤的保护作用。[方法]实验分为5组：阴性对照组（A组）、H2O2模型组（B组）、GSP低剂量组（C组,1.25mg／L）、GSP中剂量组（D组,2.50mg／L）和GSP高剂量组（E组,5.00mg／L）。采用原代细胞培养的方法,建立H2O2致海马细胞氧化损伤模型。观察各组细胞形态和超微结构;采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率;化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）冶量;TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡率。[结果]形态学观察C、D、E组均可减轻H2O2诱导的海马细胞氧化损伤。与B组相比,C、D、E组细胞存活率由31.97％分别上升到61.42％、68.47％和80.04％（P〈0.01）;细胞凋亡率由8.83％分别降低到3.50％、2.83％和2.00％（P〈0.01）;D、E组细胞内SOD含量明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,C、D、E组抑制ROS能力和减少MDA含量明显增加（P〈0.01）。[结论]GSP对H2O2诱导的海马细胞氧化损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与提高海马细胞的抗氧化能力以及减少凋亡率有关。     

大鼠肝纤维化进程中原代Kupffer细胞吞噬能力及表型变化特征研究

目的考察肝纤维化不同阶段原代Kupffer细胞吞噬能力及M1型和M2型Kupffer细胞占比的变化趋势。方法 SD大鼠腹腔注射CCl4,每周2次,连续注射8周诱导肝纤维化。分别于第0、2、4、8周分离肝脏Kupffer细胞。采用墨汁吞噬实验考察Kupffer细胞的吞噬能力,采用ELISA检测Kupffer细胞中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1的含量,采用CD68抗体、CD86抗体和CD163抗体对肝脏巨噬细胞、M1型Kupffer细胞、M2型Kupffer细胞进行标记,流式细胞法分离不同的Kupffer细胞并计数M1型和M2型Kupffer细胞占比。结果模型大鼠炎症损伤加重,第8周呈现明显的纤维化特征。模型大鼠Kupffer细胞吞噬能力持续降低。M1型Kupffer细胞及IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α呈现先升后降的趋势,在第4周达到最高值。M2型Kupffer细胞及IL-10和TGFβ1则持续升高。结论肝纤维化形成过程中,Kupffer细胞吞噬能力持续降低。M1型和M2型Kupffer细胞均参与了肝纤维化发生发展过程。