端粒与肿瘤细胞耐药关系的研究进展

端粒是人类染色体末端结构,在维持基因组稳定性中发挥重要作用.有丝分裂导致的端粒长度的进行性缩短是细胞衰老的标志,肿瘤细胞则克服了这种现象,保留了无限增殖的能力,故端粒成为临床治疗的靶点.肿瘤细胞对化疗药物的耐受现象是临床治疗的难题.如何克服肿瘤的耐药性一直是肿瘤治疗研究的重点.该文从端粒的基本组成结构人手,对端粒与肿瘤细胞获得性耐药的关系以及端粒如何介导肿瘤细胞耐药性的产生进行综述,旨在为克服肿瘤耐药性提供新的治疗思路.     

DEAD box1基因与相关肿瘤的研究进展

DEAD box基因,DEAD box 1(DDX1),位于染色体2p24,过表达于视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中,并与MYCN基因共同扩增在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)和原发性肿瘤的细胞系中.最近研究发现在鼠的子宫内膜癌细胞中DDX1基因与MYCN基因共同扩增.经研究发现在多数生物体中都存在DEAD box蛋白.正如我们所意料,DDX1存在解旋酶区域,在体外DDX1蛋白表现有ATP酶和解旋酶的活性.目前,DDX1确切的功能和在肿瘤中的作用还在进一步的研究当中.现将DEAD box蛋白家族和DEAD box 1基因与肿瘤的关系进行综述.

Abstract：

DEAD box gene, DEAD box 1 ( DDX1 ) ,a gene mapping to the 2p24 region, was identified to be overexpressed in retinoblastoma and co-amplified with MYCN in neuroblastoma cell lines as well as in primary tumor specimens. DEAD box proteins are found in most organisms. As expected from the presence of the helicase domain, DDX 1 shows in vitro ATPase and RNA helicase activities. The exact function of DDX 1 and its role in the pathogenesis of cancer are still under investigation. Here, we review the DEAD box proteins family and the relationships with between DEAD box1 gene and tumor.     

MIF基因多态性及其与疾病关系的研究进展

巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一种具有多种生物活性的细胞因子,处于免疫调节的中心环节,在机体的炎症和免疫反应中起重要作用.在一些疾病中,MIF的表达水平发生改变.其启动子的两个多态位点影响其表达,并且与某些疾病的易感性、严重性及抗药性相关.本文首先介绍MIF的生物学功能,然后对近些年来MIF基因多态性与疾病易感性与严重性的研究进展作一综述.     

原发性非小细胞肺癌DNA标本中EBV基因的PCR扩增

目的 探讨非小细胞肺腺癌与肺鳞癌DNA标本中EB病毒(Epstein-Barr vins，EBV)的存在情况，以及EBV与非小细胞肺癌的关系。方法 以非小细胞肺腺癌和肺鳞癌DNA标本为模板，EBV持续感染细胞系B95—8细胞DNA为阳性对照，用PCR方法扩增EBV的BamHI-W部分片段。结果 在53例非小细胞肺癌标本中有36例扩增出EBV基因的特异性产物，PCR扩增产物为129bp，与目的片段一致。其中肺腺癌中EBV基因的阳性检出率为94．1％(16／17)，肺鳞癌中的阳性检出率为55．6％(20／36)。结论 非小细胞肺癌DNA标本中有EBV基因的存在，其阳性检出率与非小细胞肺癌的病理类型有关。     

双微体的形成及结构研究

基因扩增是人类肿瘤细胞中一种常见的基因组不稳定表现形式,其最主要的细胞遗传学表现形式为双微体.双微体的结构复杂,由一个或几个来源相同或不同的扩增子构成.扩增子之间的断裂融合接头连接方式多种多样,涉及非同源末端连接、同源重组和非同源末端连接基础上的新型修复机制等多种DNA断裂重接方式.分析双微体结构、了解扩增子连接方式对于阐明双微体的形成机制及进一步理解基因扩增有重要意义.     

构建Neuregulin1克隆载体的实验

目的：Schwann细胞具有促进神经元再生的作用，Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应，构建NRG1克隆载体，可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系，对神经损伤模型进行Schwann细胞移植．观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法。方法：实验于2003-09／2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。提取幼龄大鼠脑RNA，反转录聚合酶链反应，用：Xba I和EcoR I对目的基因和载体质粒进行双酶切，T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌，挑取LB(Amp )平板生长克隆菌摇菌扩增，用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因，同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒，进行克隆载体测序。结果：获得一株NRG1克隆质粒。测序结果显示为NRG1新的异构体，用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体。结论：构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体，可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究。     

STUDY OF THE RELATIONSHIP BETWEEN PSORIASIS AND THE POLYMORPHIC SITE C677T OF METHYLENETETRAHYDROFOLATE REDUCTASE

Objective. In order to investigate 5, l0-methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR)‘s polymorphic changes in psoriasis vulgaris. Methods. We detected mutation of site C677V of MTHFR in 39 psoriasfics by PCR-RFLP. Results. Genotype frequencies of the psoriasfics were C/C= 20.15%,C/T= 48.72% and T/T= 30.77%; the allelic frequencies were C = 0.4487 and T=0.5513. Homozygous mutant (TT) of the psoriastics was significantly different from the normal control goup by X2 test. Conclusion. C677V mutant of MTHFR might be related with psoriasis.     

新建1例人肺鳞癌细胞系

目的 建立人肺癌肿瘤细胞系，为肿瘤的研究工作提供重要的材料。方法 采用手术标本的组织块培养法，建立了１例新的肺癌细胞系ＨＢ－９９，并做初步的生物学特征鉴定。结果 该细胞系呈单层贴壁生长，用相差显微镜和电镜分析。其具有细胞的多形性，细胞倍增时间为２４ｈ，克隆形成率４０％，染色体易位复杂。众数６３～６５。异体移植实验显示在裸鼠体内生长的肿块具有与原始手术标本相似的组织形态。结论 根据细胞系的特征显示该     

信号转导分子smad4基因表达抑制体外培养人血管平滑肌细胞的增殖

目的:探讨细胞内转化生长因子β信号通路中信号转导分子Smad4与平滑肌细胞的增殖关系。方法:实验于2003-08/10在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。①取体质量200g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞。用体积分数为0.2和0.05(去血清培养)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培养基,37℃,体积分数0.05CO2进行培养,2.5g/L胰酶消化传代。血管平滑肌细胞经锥虫蓝染色,存活细胞数在98%以上。形态学上出现典型的“峰和谷”样生长状态,抗平滑肌特异α-肌动蛋白免疫组织化学染色阳性。取3～8代细胞用于实验。②观察项目:转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力的检测应用流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法凋亡检测试剂盒完成。smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因(p16、细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E)和细胞凋亡基因(半胱天冬酶2和半胱天冬酶3)表达变化应用免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测。结果:①转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定结果:smad4基因过表达调控人血管平滑肌细胞增殖能力下降DNA合成前期细胞明显增加[(72.33±4.35)%],正常培养细胞DNA合成前期细胞数相对较少[(45.88±1.58)%]。②smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测结果:转染后细胞凋亡能力增加;细胞周期抑制基因p16表达增加,细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E表达下降,凋亡相关基因半胱天冬酶2和半胱天冬酶3表达增加。结论:smad4基因对血管平滑肌细胞增殖能力的抑制作用主要通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的发生而实现。转化生长因子β信号传导通路对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用除了能够有效阻滞细胞周期的演进外,还能够诱导细胞凋亡。     

p53蛋白在口腔鳞癌中的表达

目的 通过对突变型p53蛋白在口腔鳞癌组织中表达的观察,分析p53与口腔鳞癌临床病理特征之间的关系,探讨p53在口腔鳞癌发生中的作用机制。方法 利用免疫组化(P-V法)检测116例患者口腔鳞癌组织及10例正常人口腔黏膜组织中突变型p53蛋白的表达情况。结果 p53蛋白在正常人口腔黏膜和口腔鳞癌组织中的表达率分别为20％、63.8％,二者比较差异有统计学意义(X2=5.660 4,P<0.05);口腔鳞癌在不同病理分级时,p53蛋白表达差异有统计学意义(X2=7.536 2,P<0.05);p53蛋白表达与年龄、性别、发生部位及有无淋巴结转移无相关性。结论 突变型p53蛋白表达与口腔鳞癌的发生有关。不同病理分级,p53蛋白表达也不同。