p21 WAF1/CIP1基因导入对p53突变人肺癌细胞系生长特性的影响

目的　探讨含突变ｐ５３ 基因癌细胞系表达ｐ２１ 基因的抗肿瘤作用。方法　构建人ｐ２１表达重组子,导入ｐ５３ 基因突变的人肺癌ＰＧ细胞系,建立稳定高表达ｐ２１ 的细胞系;然后观察其形态及生长特性的改变;ＣＤＫ４ ,ＰＣＮＡ水平;对基因毒性物的反应性。结果　在含ｐ５３ 基因突变的ＰＧ 细胞内导入外源性ｐ２１ 基因,其高表达ｐ２１ 约是ＰＧ 细胞的６ 倍;转染细胞出现核规则、核膜变薄等异型性降低;生长速度下降（５０％ ） ,叠落生长不明显;在０ ．５％ 血清条件下生长显著低于对照组;血清依赖性升高;软琼脂集落实验：转染细胞集落形成率降低为１ ％ （ 对照组为２８％ ） 。ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 显示,ｐ２１ 转染细胞的ＣＤＫ４ 和核仁组成区相关蛋白水平显著降低。但顺铂诱导下转染细胞凋亡发生延缓至４８ 小时以后（ 对照组２４ 小时）。结论　在有ｐ５３ 基因突变的肿瘤细胞ｐ２１ 的高表达仍能抑制癌细胞的生长,降低恶性表型;其作用可能与降低细胞ＣＤＫ４ 和ＰＣＮＡ 水平有关,而不依赖细胞凋亡机制。表达ｐ２１ 基因可作为恢复ｐ５３ 基因功能的旁路途径。     

P53对涎腺腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的为了探讨P53基因对腺样囊性癌细胞端粒酶活性的抑制作用及机制。方法构建携带人野生型P53基因的腺病毒表达载体，以脂质体法瞬时转染腺样囊性癌SACC-83细胞，RT-PCR检测转染细胞P53基因mRNA的表达，TRAP-PCR-ELISA法检测转染细胞端粒酶活性的改变。并将P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2—630共转染SACC-83细胞，测定转染细胞荧光素酶报告基因活性。结果1．瞬时转染含人野生型P53基因的重组腺病毒表达载体p△E1-P53于腺样囊性癌SACC-83细胞后，其P53基因mRNA的表达明显增强；2．基因转染后，SACC-83细胞内源性端粒酶活性显著降低。3．P53基因与含有hTERT启动子核心调控区的荧光素酶报告基因pGL2-630共转染SACC-83细胞后，其荧光素酶活性显著下降。结论外源性表达P53基因可以降低腺样囊性癌细胞SACC-83细胞端粒酶活性，并可能通过抑制端粒酶hTERT基因启动子的转录活性实现。     

F213I突变型高雪氏病分子伴侣治疗方法的研究

目的 研究高雪氏病新的分子治疗方法。方法 用β-葡萄糖脑昔脂酶(β-glucocerebrosidase，β-Glc)(EC3．2．1．45)的底物类似物(glucocerebroside analogue，GCA)作为分子伴侣，处理体外培养的不同突变型的高雪氏病患者皮肤成纤维细胞，采用荧光酶学手段测定β-Glc活性；Western印迹杂交技术分析该酶蛋白表达的量；细胞双染确定β-Glc在细胞内的定位；薄层层析法分析葡萄糖脑苷脂的降解情况。结果 该酶的底物类似物GCA可以提高体外培养的F213I突变型患者成纤维细胞内β-Glc活性；增加该酶蛋白的表达量；促进该酶蛋白向溶酶体内转运，加速底物葡萄糖脑苷脂(glucocerebroside，GlcCer)的降解。结论低分子量的GCA作为一种分子伴侣可能为F213I突变型高雪氏病的治疗开辟一条新的途径。     

尼古丁对大鼠不同部位骨钙磷含量和碱性磷酸酶活性的差异影响

目的 分析尼古丁对大鼠牙槽骨和颌骨内钙磷含量以及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法 将20只5周龄健康雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,实验组每天腹腔注射尼古丁0.73 mg•kg-1,对照组腹腔注射等量生理盐水,3个月后处死取材。浓酸消化法检测牙槽骨和颌骨内钙磷含量,改良Reddi法检测牙槽骨和颌骨内ALP活性。采用SPSS 16.0统计软件分别行独立样本的t检验。结果 与对照组相比较,实验组牙槽骨内和颌骨内钙磷含量均明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）;ALP活性无明显变化（P>0.05）。实验组中牙槽骨与颌骨比较,骨钙磷含量和ALP活性差异无统计学意义（P>0.05）。结论 尼古丁下调大鼠牙槽骨和颌骨内钙磷含量,对ALP活性的影响不明显。     

被动吸烟对鼠牙槽骨钙、磷含量及碱性磷酸酶活性的影响

目的 分析被动吸烟鼠牙槽骨钙、磷含量和碱性磷酸酶（AKP）的活性。方法 40只6周龄健康雄性Wistar鼠被随机等量分为实验组和对照组,每组再被随机等量分为15、30、45和60 d 4个亚组,烟熏法建立被动吸烟的大鼠模型,浓酸消化法提取牙槽骨内钙和磷,光谱分析法和改良Reddi法分别测定钙、磷含量和AKP的活性,行析因设计的方差分析。结果 与各对照组牙槽骨相比,被动吸烟鼠的钙、磷含量在15 d组略有升高,30 d组略有下降,差异无统计学意义（P〉0.05）,45、60 d组显著下降（P〈0.01）;AKP活性在15、30 d组略升高,45、60 d组略下降,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 本实验周期内,鼠牙槽骨钙、磷含量和AKP活性在被动吸烟初期略有升高,随被动吸烟时间的延长,钙、磷含量呈时间依赖性减少,AKP活性也呈时间依赖性减少的趋势。     

MTHFR、MS基因多态及NF2基因甲基化与乳腺癌发病关系的研究

目的：本研究探讨MTHFR、MS基因多态性与抑癌基因NF2甲基化及乳腺癌发病的关系。方法：选取原发性乳腺癌患者47例,健康人52例及乳腺良性病变患者15例,采用RT-PCR、DNA甲基化特异性PCR（methylation-sPecific PCR,MSP）聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测NF2的基因表达、甲基化水平及MTHFR、MS基因多态性。结果：NF2基因的表达量在乳腺癌组织（0.16±0.11）及癌旁组织（0.27±0.14）明显低于乳腺良性病变组织（0.64±0.17,P〈0.05）。NF2基因甲基化发生率在乳腺癌组织和癌旁组织中分别为57.4%（27/47）和23.4%（11/47）,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。MTHFR677等位基因T型较C等位基因T型在病例组和对照组分布有显著差异（P〈0.05）。携带MTHFR677TT基因型与携带MTHFRCC基因型比较,前者使乳腺癌患病风险增加5.44倍（95%CI,1.91~15.48）。MS2756等位基因G型较等位基因A型在病例组和对照组分布有显著差异（P〈0.05）。携带MS 2756AG基因型与携带MS 2756AA基因型比较,前者使乳腺癌患病风险增加2.73倍（95%CI,1.42~5.24）。MTHFR677多态性与NF2基因甲基化有相关性（χ2=7.29,P〈0.05）。MS2756多态性与NF2基因甲基化无显著关联。结论：NF2甲基化与乳腺癌发生密切相关,MTHFR677、MS2756多态性可以增加乳腺癌的患病风险,MTHFR677多态性可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达。     

人成釉细胞瘤中pRb和E2F-1表达与端粒酶活性的关系

目的　研究 pRb、E2F 1和细胞周期素E(cyclinE)在人成釉细胞瘤 (ameloblastoma,AB)中的表达及其与端粒酶 (hTERT)的关系 ,探讨其临床生物学意义。方法　用原位杂交和免疫组化SP法分别检测了AB中 pRb、E2F 1、cyclinE及hTERTmRNA的表达。结果　pRb在AB细胞核中阳性率为2 0 4 % ( 11/ 5 4 )。E2F 1mRNA阳性率为 92 6 % ( 5 0 / 5 4 )。cyclinEmRNA阳性率为 6 6 7% ( 36 / 5 4 )。hTERTmRNA阳性率为 94 4 % ( 5 1/ 5 4 )。伴随AB的复发与恶变 ,hTERT、E2F 1、cyclinE的表达逐渐增高 ,pRb表达丢失。hTERT与E2F 1、cyclinEmRNA之间经Spearman相关分析 ,rs 均为 1 0 0 0 ,P =0 0 0 0 1,呈高度正相关。结论　pRb/E2F 1与AB细胞的增殖、去分化相关 ,端粒酶活性的释放激活与pRb的低表达及E2F 1的高表达可能相关 ,并在G1晚期受cyclinE调节有较高表达     

疏血通注射液治疗瘀血阻络型急性脑梗死44例

目的:观察疏血通注射液治疗瘀血阻络型急性脑梗死的临床疗效。方法:将88例患者采用随机数字表法随机分为治疗组和对照组各44例,两组均采用西药常规治疗,治疗组在常规疗法基础上加用疏血通注射液,静脉滴注,1次/d。两组均以14 d为1个疗程。结果:治疗组治愈6例,显效24例,有效12例,无效2例,有效率占95.45%;对照组治愈2例,显效9例,有效25例,无效8例,有效率占81.82%。两组对比,差别有统计学意义(P<0.01)。结论:疏血通注射液对治疗瘀血阻络型急性期脑梗死有显著疗效。     

糖尿病患者股骨颈骨折围术期健康教育

糖尿病是一种常见的内分泌代谢性疾病,临床上常常遇到糖尿病合并股骨颈骨折患者,骨折围手术期患者的血糖水平能否控制,达到接近正常值范围,直接影响骨折术后伤口的愈合,而全面有效地控制糖尿病单靠用药难以达到效果,还需要正确宣教[1].     

扇贝裙边糖胺聚糖对SH-SY5Y细胞氧化及凋亡影响

目的探讨扇贝裙边糖胺聚糖（SS-GAG）对6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的SH-SY5Y细胞丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）含量及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-9表达的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,随机分为对照组、6-OHDA损伤组和SS-GAG（200、400和800mg/L）处理组,测定各组细胞中MDA含量、LDH活性,实时荧光（real-time）PCR检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,流式细胞技术（FCM）检测活化Caspase-9蛋白表达。结果与对照组相比较,6-OHDA损伤组的MDA含量、LDH活性增加,Bcl-2mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高,表达活化Caspase-9蛋白的细胞数增加,差异均有统计学意义（F=27.699-280.567,P〈0.01）。与6-OHDA损伤组比较,各浓度SS-GAG处理组SH-SY5Y细胞中MDA含量、LDH活性降低,Bcl-2mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,活化的Caspase-9蛋白表达量减少,并且呈剂量依赖性,差异均有显著意义（F=27.699-280.567,P〈0.01）。结论 SS-GAG能降低6-OHDA诱导的氧化应激水平,保护生物膜的完整性。SS-GAG通过上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达,抑制Caspase-9蛋白的活化,从而抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。