siRNA-YAP1对TGF-β 2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用

目的:探讨小干扰RNA-Yes相关蛋白1(siRNA-YAP1)对转化生长因子β 2(TGF-β 2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。 方法:将人LECs株HLEB-3细胞分为对照组和TGF-β 2诱导组,正常对照组采用无血清低糖培...     

重组腺相关病毒介导的HSV-tk/GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系(HSV-tk/GCV)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的抑制作用,以及晶状体上皮细胞死亡的机制.方法 实验研究.rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率.重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞为实验组,以没有转染重组病毒的细胞作为对照组,MTT法检测HSV-tk/GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应;相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化.不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析;两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验.结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N/N1003A细胞.GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系(F=13 076.239,P<0.001);实验组N/N1003A-tk细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(F=53 947.119,P<0.001).实验组GCV的IC50为2 mg/L,而对照组IC50为524 mg/L.GCV的杀伤效应随时间延长而增强,且存在明显的旁观者效应.N/N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死,细胞的凋亡率7.18%±2.04%,与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(t=3.83,P<0.01);S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(S期细胞比例:t=3.55,P<0.01;G0/G1期细胞比例:t=4.29,P<0.01).结论 GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞,并具有较强的旁观者效应.     

眼科临床见习中循证医学思维培养的探讨

在眼科临床见习中培养学生的循证医学思维和方法,引导学生主动发现和处理眼科医疗实践中出现的各种问题,以这些问题为中心,师生共同探讨解决问题的方法,寻找科学的证据,实现教学相长,提高学生的素质和能力。     

二甲双胍对高糖诱导的RF/6A细胞增殖、迁移和血管形成的影响及其可能机制

目的 研究二甲双胍(MET)对高糖诱导的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A增殖、迁移和血管形成的影响,并初步探讨其作用机制。方法 RF/6A细胞随机分为5组：NC组、HG组、HG+15 mmol·L^-1MET组、HG+30 mmol·L^-1 MET组、HG+45 mmol·L^-1MET组,CCK-8法检测细胞增殖情况。将RF/6A细胞随机分为4组：NC组和NC+15 mmol·L^-1MET组、NC+30 mmol·L^-1MET组、NC+45 mmol·L^-1MET组,CCK-8法检测MET的细胞毒性。将RF/6A细胞随机分为3组：NC组、HG组和HG+15 mmol·L^-1MET组,细胞划痕法和Transwell法检测细胞迁移,Matrigengel法检测细胞血管形成,RT-PCR、Western blot检测Hippo信号通路的核心成分YAP、TEAD1的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8法检测结果显示,与NC组比较,HG组R...     

重组腺相关病毒介导的HSV-tk/GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系(HSV-tk/GCV)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的抑制作用,以及晶状体上皮细胞死亡的机制.方法 实验研究.rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率.重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞为实验组,以没有转染重组病毒的细胞作为对照组,MTT法检测HSV-tk/GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应;相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化.不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析;两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验.结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N/N1003A细胞.GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系(F=13 076.239,P<0.001);实验组N/N1003A-tk细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(F=53 947.119,P<0.001).实验组GCV的IC50为2 mg/L,而对照组IC50为524 mg/L.GCV的杀伤效应随时间延长而增强,且存在明显的旁观者效应.N/N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死,细胞的凋亡率7.18%±2.04%,与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(t=3.83,P<0.01);S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(S期细胞比例:t=3.55,P<0.01;G0/G1期细胞比例:t=4.29,P<0.01).结论 GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞,并具有较强的旁观者效应.     

重组腺相关病毒介导的HSV-tk/GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用

目的 探讨2型重组腺相关病毒(rAAV2)载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系(HSV-tk/GCV)对体外培养兔晶状体上皮细胞(N/N1003A)的抑制作用,以及晶状体上皮细胞死亡的机制.方法 实验研究.rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染体外培养N/N1003A细胞,倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测病毒的转染效率.重组病毒rAAV2/HSV-tk转染体外培养的N/N1003A细胞为实验组,以没有转染重组病毒的细胞作为对照组,MTT法检测HSV-tk/GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应;相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化.不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析;两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验.结果 rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N/N1003A细胞.GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系(F=13 076.239,P<0.001);实验组N/N1003A-tk细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(F=53 947.119,P<0.001).实验组GCV的IC50为2 mg/L,而对照组IC50为524 mg/L.GCV的杀伤效应随时间延长而增强,且存在明显的旁观者效应.N/N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死,细胞的凋亡率7.18%±2.04%,与对照组(3.50%±0.56%)比较差异有统计学意义(t=3.83,P<0.01);S期细胞比例明显增加,G0/G1期细胞比例明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(S期细胞比例:t=3.55,P<0.01;G0/G1期细胞比例:t=4.29,P<0.01).结论 GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2/HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞,并具有较强的旁观者效应.     

早期生长反应因子1在H2O2损伤的晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的探讨早期生长反应因子1（early growthresponse-1,Egr-1）在经H2O2损伤后的晶状体上皮细胞中的表达及其意义。方法用SP免疫组化法测定经H2O2处理后2h、8h、24h的晶状体上皮细胞中Egr-1的表达,用MAIS300图像分析系统测定其光密度值,采用t检验分析其在各时间点的表达水平。结果在H2O2作用后2h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为强阳性表达,平均光密度值为0.55±0.08;在H2O2作用后8h的晶状体上皮细胞中,Egr-1多为阳性表达,平均光密度值为0.40±0.09;两组比较,差异有非常显著的统计学意义（P〈0.01）。在H2O2作用后24h的晶状体上皮细胞和对照组晶状体上皮细胞中,Egr-1未见表达,平均光密度值为0。结论Egr-1在H2O2损伤后的晶状体上皮细胞中早期表达,可能为氧化损伤引起的白内障的早期反应之一。     

Hippo信号通路在眼底疾病中的研究进展

Hippo信号通路是一条由一系列蛋白激酶和转录因子组成的激酶链,在控制器官生长、调节组织再生以及肿瘤的发生发展中具有重要作用.眼底组织中存在典型的Hippo信号通路,Hippo信号通路主要的下游效应分子Yes相关蛋白/具有PDZ结合域的转录共激活因子等在视网膜神经感觉层及色素上皮层均有表达.Hippo信号通路的异常调节...     

光环境与近视发病机制研究进展

在许多国家,近视的发生率都呈上升趋势。人类流行病学和动物模型研究表明,暴露于高强度或户外照明可以降低近视的严重程度,但目前还未完全明确光与视觉信号相互作用对近视的影响及机制。本文就光环境与近视发病机制和临床干预的潜在靶点进行综述,以期为近视的预防提供理论基础和进行一定的临床探索。     

分泌粒蛋白Ⅲ(Scg3)抗体对角膜新生血管的抑制作用

目的 分析分泌粒蛋白III (Scg3)抗体对兔角膜新生血管(CNV)的干预作用。方法 选取健康新西兰白兔45只,未做碱烧伤的5只作为对照组,剩余40只白兔用碱烧伤法构建CNV模型,随机分为模型组(20只)和干预组(20只),自碱烧伤之日起每隔2 d结膜下分别注射0.1 mL 1×PBS溶液或0.5 mg·L^-1的Scg3抗体工作液。碱烧伤后14 d, Western blot检测对照组与模型组兔角膜组织中Scg3的蛋白表达。分别在碱烧伤后1 d、7 d、14 d应用眼前段分析仪测量CNV的面积和长度,应用角膜共聚焦显微镜观察眼表变化,利用蛋白芯片法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等炎症相关细胞因子的表达。结果 角膜碱烧伤后14 d,模型组兔烧伤区域出现大量CNV,而干预组兔角膜无明显CNV生长。Western blot检测结果显示,与对照组相比,模型组兔角膜中Scg3蛋白表达显著升高(P<0.05)。角膜共聚焦显微镜下观察可见,模型组兔的角膜缘内出现大量活动性CNV。角膜碱烧伤后7 ...