颈动脉损伤大鼠新生内膜增生与局部平滑肌细胞的增殖

目的:观察大鼠颈动脉损伤后高同型半胱氨酸血症对新生内膜形成和局部炎症因子单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达及局部平滑肌细胞增殖的影响。方法:实验于2004-10/2005-02在北京大学第一临床医院心血管研究所完成。①Wistar雄性大鼠50只,采用随机数字法分为蛋氨酸组:1g/(kg·d)L-蛋氨酸灌胃;对照组:饮用水灌胃,每组25只。4周后检测两组血浆同型半胱氨酸浓度,并行左颈动脉球囊拉伤,分别于3,7,14,28d取材,检测血管损伤后新生内膜增生和局部单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达情况。结果:①两组大鼠血浆同型半胱氨酸浓度:蛋氨酸组血浆同型半胱氨酸浓度明显高于对照组[(106.19±19.75),(4.90±0.10)μmol/L]。②两组大鼠血管组织形态学观察结果:苏木精-伊红染色血管损伤后7d可见内膜增生,14,28d蛋氨酸组新生内膜增生厚度比对照组增加36%,33%;新生内膜面积增加41%,30%;内膜面积/中膜面积增加36%,21%;管腔面积减少47%,61%;两组间比较差异均有显著性,但中膜面积无显著性差别。蛋氨酸组14d血管内膜和中膜平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性颗粒百分比是对照组的1.7倍和2.3倍[(84.40±9.05)%比(49.00±4.51)%,P<0.01;(53.30±5.25)%比(23.70±6.17)%,P<0.01]。未损伤的右颈总动脉两组血管内膜及中膜增殖细胞核抗原阳性颗粒数小于0.1%。蛋氨酸组血管损伤局部单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达增强,单核细胞趋化因子1主要分布在新生内膜和中膜,细胞间黏附分子1主要分布在内皮下和新生内膜,3d,7d明显,持续28d。结论:高同型半胱氨酸血症上调血管损伤局部炎症因子单核细胞趋化因子1、细胞间黏附分子1表达,促使局部平滑肌细胞增殖,使新生内膜增生。     

踝足矫形器对脑卒中偏瘫患者步行能力的影响

目的:从步行速度和步行效率两方面观察踝足矫形器对脑卒中偏瘫患者步行能力的影响。方法:选择2004-06/2006-08郾城中心医院收治脑卒中偏瘫患者40例,以20例年龄相匹配的健康人为对照组。①所有受试者分别在佩带和不佩带踝足矫形器的情况下评测10m最大步行速度和生理消耗指数,观察踝足矫形器对步行速度和步行效率的影响。②根据在不佩带踝足矫形器时的最大步行速度将脑卒中患者分成低速组、中速组和快速组3组,比较各组在佩带和不佩带踝足矫形器情况下的10m最大步行速度和生理消耗指数。结果:60例均进入结果分析。①在佩带踝足矫形器情况下,脑卒中患者的步行速度比不佩带时明显加快[(50.1±14.4),(43.2±14.3)m/min,P<0.01],对照组步行速度没有明显的变化(P>0.05)。②在佩带踝足矫形器情况下,脑卒中患者的生理消耗指数较不佩带时降低(0.92±0.15,1.02±0.18,P<0.01),对照组生理消耗指数较佩带时增高(P<0.01)。③低、中快速组患者的步行速度在佩带踝足矫形器时比不佩带明显增加(P<0.01),且3组步行速度改善值之间差异不显著(P>0.05)。④低、中快速组患者的生理消耗指数在佩带踝足矫形器时比不佩带时明显降低(P<0.01),但低速和中速组患者生理消耗指数较快速组降低明显(P<0.01)。结论:踝足矫形器可以提高脑卒中偏瘫患者步行速度和步行效率,改善患者的步行能力。     

生物材料修补颅骨缺损的研究与进展

目的:概述用于颅骨缺损修补的生物材料应用和研究进展。资料来源:检索PubMed 1990-02/2005-12关于生物材料应用于颅骨缺损的研究的文章。检索词为“biomaterials;repair ofskull defect”并限定语言种类为英文。同时利用检索中国期刊全文数据库1995-01/2006-12的相关文章,检索词“生物材料;颅骨缺损”,并查阅相关书籍。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①与颅骨缺损修补相关的材料学研究。②生物材料在颅骨缺损修补临床应用情况。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集到130篇文章,排除99篇重复性研究,纳入31篇与纳入标准最为贴近的文章。资料综合:传统的非降解生物假体仅可作为颅骨缺损的填充材料。随着医学和组织工程技术的发展,各种合成生物材料相继出现,但这些材料移植后无法被机体吸收,存在排异和炎性反应,难与宿主骨整合。目前国内使用的颅骨修补材料有机玻璃、硅橡胶、钛板、钛网及其他有机材料。这些材料分别存在着易老化、易破损、不易塑形或生物相容性差等缺点,其中钛网、钛板由于易导热、导电,造成患者术后在高温环境中有头部灼热感,而且钛网板价格昂贵。对硅橡胶材料来讲,虽然生物相容性较好,却存在强度偏低的问题。理想的骨移植材料应具有良好的生物相容性和整合能力、化学性质稳定、术后长期维持其形状、不易滑脱移位、可预知其长期生物学性质、易于塑形、轮廓化方便、价格便宜。结论:虽然有机玻璃、钛板和聚乙烯等仍然是目前临床上大量使用的颅骨修补材料,但由于其存在各自不可避免的缺点,新型的生物材料仍需进一步开发。     

Non‐invasive assessment of kidney allograft fibrosis with shear wave elastography: A radiological‐pathological correlation analysis

Objectives

To evaluate the use of shear wave elastography in assessment of kidney allograft tubulointerstitial fibrosis.

Methods

Shear wave elastography assessment was carried out by two independent operators in kidney transplant recipients who underwent allograft biopsy for clinical indications (i.e. rising creatinine >15% or proteinuria >1 g/day). Allograft biopsies were interpreted by the same pathologist according to the 2013 Banff Classification.

Results

A total of 40 elastography scans were carried out (median creatinine 172.5 μmol/L [interquartile range 133.8–281.8 μmol/L]). Median tissue stiffness at the cortex (22.6 kPa [interquartile range 18.8–25.7 kPa] vs 22.3 kPa [interquartile range 19.0–26.5 kPa], P = 0.70) and medulla (15.0 kPa [interquartile range 13.7–18.0 kPa] vs 15.6 kPa [interquartile range 14.4–18.2 kPa]) showed no significant differences between the two observers. Interobserver agreement was satisfactory (intraclass correlation coefficient of the cortex 0.84, 95% CI 0.70–0.92 and intraclass correlation coefficient of the medulla 0.88, 95% CI 0.78–0.94). The areas under the receiver operating characteristic curves for detection of tubulointerstitial fibrosis were estimated to be 0.75 (95% CI 0.61–0.89), 0.85 (95% CI 0.75–0.95) and 0.65 (95% CI 0.53–0.78) for cortical, medullary tissue stiffness and serum creatinine, respectively.

Conclusions

Shear wave elastography can be used as a non‐invasive tool to evaluate kidney allograft fibrosis with reasonable interobserver agreement and superior test performance to serum creatinine in detecting early tubulointerstitial fibrosis.     

体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法：差速贴壁＋阿糖胞苷＋胰酶法

目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖氨酸(Sigma);胶质纤维酸性蛋白,神经生长因子受体蛋白抗体(博士德)。②选取出生3d内的Wistar大鼠5只,乙醇浸泡后断头处死,取嗅球的最外两层,通过1.25g/L胰蛋白酶消化分离嗅鞘细胞,体外原代培养。③采用Nash差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶法纯化嗅鞘细胞。培养18h后将未贴壁的细胞悬液转种于另一未涂层的器皿中,再培养36h,重复上述步骤移入0.1g/L多聚赖氨酸包被的塑料培养瓶中进行培养,纯化后的细胞在24h内陆续贴壁,常规培养2d,加入终浓度为2mg/L的阿糖胞苷,作用48h后,换上新的培养基,继续培养1d,弃去培养基,用无钙镁的Hanks液清洗2次,然后用1.25g/L的胰酶消化10min,待细胞突起回缩、胞体变圆时,立刻加入纯血清终止,其血清终浓度为20%,制备单细胞悬液。④倒置显微镜下观察其形态变化,苏木精-伊红染色,同时行神经生长因子受体蛋白和胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定嗅鞘细胞,并计算嗅鞘细胞阳性百分率。结果:①活细胞形态观察:分离培养的嗅鞘细胞具有双极或多极突起,且突起细长,相互交织。②嗅鞘细胞的苏木精-伊红染色鉴定:细胞呈三角形或梭形,有长的突起,胞浆被染成粉红色,胞核呈蓝紫色,胞核内深染的为核仁,有1～3个核仁。③嗅鞘细胞的胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定:细胞呈现棕黄色,胞核淡染,阳性细胞成网状连接,胞体多为三角形,有细长突起,阳性率91.5%。④嗅鞘细胞的P75免疫组化染色鉴定:阳性细胞呈绿色,多数细胞染色阳性,阳性率89%。结论:实验所采用的Nash差速贴壁 阿糖胞苷 胰酶法分离纯化培养嗅鞘细胞切实可行,为神经诱导修复材料的研究提供种子细胞。     

骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。     

健胃愈疡颗粒干预下大鼠胃溃疡黏膜乳癌相关肽和血小板活化因子的表达及与胃黏膜疏水性的相关性研究

目的:观察对胃溃疡复发有较好疗效的健胃愈疡颗粒对溃疡黏膜乳腺癌相关肽和血小板活化因子表达的影响,分析其可能的作用机制。方法:实验于2005-07/2006-07在湘雅医院中心实验室完成。SD大鼠110只,雌雄各半,随机抽签法分为5组,即正常对照组、假手术组、雷尼替丁组、健胃愈疡组,各20只;模型组30只。以Okabe改良法复制大鼠实验性胃溃疡,假手术组仅以生理盐水代替乙酸注入玻管内。造模后24h,雷尼替丁组、健胃愈疡组大鼠分别灌服盐酸雷尼替丁和健胃愈疡颗粒(药物组成为:柴胡、党参、白芍、延胡索、白芨、珍珠层粉、青黛、甘草,湖南湘雅制药有限公司生产)药液10mL/kg,分别相当于2.70,1.62g/kg,1次/d。假手术组、模型组灌服蒸馏水10mL/kg。10d后各组中随机取出10只大鼠剖腹取胃(处死前大鼠禁食24h),90d时将模型组20只大鼠再分为模型复发组和模型非复发组,各10只;除正常对照组、假手术组、模型非复发组大鼠腹腔内注射生理盐水外,其余各组大鼠腹腔内注射白细胞介素1,1μg/kg;在注射48h,大鼠禁食24h后,剖腹取胃。观察其对胃溃疡大鼠胃黏膜氨基己糖及磷脂含量、溃疡指数和胃黏膜血流的影响,并用RT-PCR观察乳癌相关肽乳癌相关肽和血小板活化因子表达的变化。结果:实验动物110只,全部进入结果分析。①模型组10,92d胃黏膜血流均低于正常对照组(P<0.01);健胃愈疡组同期胃黏膜血流均高于模型组(P<0.01)。②健胃愈疡组和雷尼替丁组10d溃疡指数均低于模型组(P<0.01,P<0.05);模型复发组、健胃愈疡组和雷尼替丁组92d溃疡指数均高于模型组(P<0.01);健胃愈疡组10,92d溃疡指数及复发率均低于雷尼替丁组(P<0.05,P<0.01)。③模型组10,92d氨基己糖和磷脂含量均低于正常对照组(P<0.01)。健胃愈疡组10,92d氨基己糖和磷脂含量均高于模型组和雷尼替丁组(P<0.01)。溃疡指数与氨基已糖、磷脂含量呈负相关(r=-0.957,-0.960,P<0.01)。④健胃愈疡组和雷尼替丁组10d乳癌相关肽mRNA表达较正常组和假手术组提高,血小板活化因子mRNA的表达下调(P<0.01),健胃愈疡组两指标表达变化较雷尼替丁组显著(P<0.01);模型复发组、健胃愈疡组和雷尼替丁组92d乳癌相关肽mRNA、血小板活化因子mRNA的表达同组10d比较差异无显著性意义(P>0.05);模型组乳癌相关肽mRNA、血小板活化因子mRNA的表达同组10d比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:健胃愈疡颗粒可提高乳癌相关肽mRNA及下调血小板活化因子mRNA的表达,影响胃黏膜氨基己糖及磷脂含量,可能是其促进溃疡愈合的机制之一。     

中频交变磁场照射后小鼠的行为学变化

目的:目前电磁辐射对生物体行为学方面的研究还很薄弱,设立不同磁场的强度和不同照射的周期,观察中频领域磁场照射对小鼠的自主活动和学习记忆的影响。方法:实验于2007-05-10/06-15在清华大学医学院和中国医学科学院药用植物研究所完成。①实验材料:磁场发生装置:中频交变磁场发生装置由清华大学工程物理系医学物理与工程研究所自主研发,可产生频率为40kHz,场强为28.8A/m,28.8kA/m的中频交变磁场。自主活动测试箱:中国医学科学院药用植物研究所提供,为一可封闭的金属箱,内置摄像头。4只黑色塑料测试桶分别置于箱子四角。水迷宫测试箱:中国医学科学院药用植物研究所提供。②实验动物及方法:将80只小鼠随机分为不同场强照射组和对照组。强磁场照射1组:11.6kA/m/40kHz,1h/d,连续照射7d。强磁场照射2组:11.6kA/m/40kHz,2h/d,连续照射7d。强磁场照射3组:11.6kA/m/40kHz,2h/d连续照射15d。弱磁场照射组:28.8kA/m/40kHz,2h/d,连续照射7d。对照组除了未放入磁场照射,其他条件与照射组一致。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。③实验评估:观察其一般活动的改变,并采用自主活动测试箱和水迷宫测试箱进行测试,观察各组小鼠的自主活动和学习记忆的改变。结果:①一般行为观察:与对照组小鼠对比,经过中频交变磁场照射过的各组小鼠活跃度减低,毛色较差。强磁场照射3组(145G,2h/d,连续15d)于第11天和13天分别死亡1只。②自主活动检测结果:强磁场照射2,3组小鼠的运动路程、运动速度、运动时间明显低于对照组(P<0.05)。③水迷宫测试结果:在学习记忆检测阶段撤掉平台,发现各组动物2min内穿越平台原来所在象限的次数没有明显差别(P>0.05)。结论:中频交变磁场照射会给小鼠的自发活动造成一定影响,对学习记忆没有影响。     

超重及肥胖与脂肪肝关系的病例对照分析

目的:分析超重及肥胖与脂肪肝的关系,探索肥胖与其他危险因素在脂肪肝发病中的交互作用。方法:选择2002-09/2004-12期间某社区人群,按分层多级整群抽样原则进行抽样调查,共调查2458例。根据1∶1配对病例对照研究的设计原理,选择其中确诊的425例脂肪肝患者作为研究病例,纳入标准:要求所有病例均有B超诊断报告,且年龄≥18岁,并从该人群的非脂肪肝患者中选择425例条件相似的作为对照,病例与对照在年龄、性别、居住地区方面均衡可比。对全体调查对象进行当面访谈调查和体格检查。结果:纳入调查对象850例,均进入结果分析。超重及肥胖者比正常体重者有显著升高的脂肪肝患病危险(OR=4.07,OR95%CI为2.99～5.54),OR值随体质量指数的增大而增大,呈明显的剂量反应关系(趋势χ2=104.25,P<0.0001)。腰臀比偏高的腹型肥胖者比非腹型肥胖者脂肪肝的发病危险更大。交互作用分析提示,肥胖与饮酒同时存在能显著增加疾病的危险性,其超额相对危险度为8.16,归因比为0.5767。结论:超重及肥胖与脂肪肝的发病关系密切,肥胖与饮酒在脂肪肝的发病中存在协同交互作用,控制体质量是降低人群脂肪肝患病率的重要措施。RA     

国内干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究与应用进展

目的:一些研究证实,干细胞移植可以取代坏死心肌细胞、增加有功能的心肌细胞数量,并建立新血管来改善血供、改善心功能。本文旨在总结近年来国内干细胞移植治疗心血管系统疾病方面的情况。资料来源:应用计算机检索Medline、CBM、CNKI数据库2001-01/2006-11期间的相关文献。包括临床研究(不限研究对象年龄、性别)和基础研究,不限体内或体外研究。中文检索词包括“干细胞,移植,临床研究,心肌梗死,心衰”。英文检索词有“stem cell,bonemarrow,mesenchymal,transplantation”。资料选择:共收集到相关文献820篇,阅读全部文章的文题和大部分文章。纳入标准:①与干细胞移植相关。②与治疗心血管系统疾病相关。③与临床研究相关文献。排除标准:综述文献、重复性研究及Meta分析类文章。资料提炼:共得到符合纳入条件的文献225篇,排除595篇。选择其中30篇进行分析,其中英文13篇,中文19篇,其中中文有1篇为手工检索的增刊。资料综合:①国内于2002年陆续开展干细胞移植治疗心血管系统疾病的探索。②国内用于临床治疗的干细胞类型多为骨髓单个核细胞,其他有骨髓间充质干细胞、骨骼肌干细胞和外周血干细胞也见于临床实验的报道。③干细胞输注途径多以冠脉内注射为主,治疗的临床疾病主要为急性、陈旧性心肌梗死与慢性心功能不全等。结论:干细胞移植可以取代坏死心肌细胞、增加有功能的心肌细胞数量,并建立新血管来改善血供、改善心功能,已应用于临床,未出现安全性问题,故认为干细胞移植技术可以作为心血管系统疾病治疗的手段之一。