内皮素-1基因TaqⅠ和肿瘤坏死因子α基因多态性与肝硬化门静脉高压的相关性

目的 探讨内皮素-1基因Taq Ⅰ多态性和肿瘤坏死因子(TNF)α基因多态性与肝硬化门静脉高压之间的相互关系。 方法 采用病例对照和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性等技术,检测了106例乙型肝炎后肝硬化患者和108名健康对照者内皮素～1基因Taq Ⅰ多态性和TNF α基因启动子-308G→A多态性,比较等位基因及基因型频率,并进行分层分析。 结果 在ET—1基因Taq Ⅰ多态性中,门静脉高压症组(LC )C等位基因频率和CC TC基因型频率分别为25.38％与46.15％,比正常对照组明显升高(16.67％与30.56％,x2=4.26,P<0.05)。在TNF α基因多态性中,LC 组TNF2/1基因型的频率比对照组明显升高(21.54％对10.19％,P<0.05)。分层分析发现由这两个基因多态性组成的不同基因型中,TCF 2基因型频率在LC 组高于正常对照组(P<0.05,OR=2.03)。Logistic多元逻辐回归分析显示,ET-1和TNFα基因多态性是门静脉高压形成的危险因子(P值分别为0.022和0.043)。 结论 ET—1和TNF α基因多态性与肝硬化门静脉高压症相关,是门静脉高压症形成的新的危险因子。TCF2基因型可能是门静脉高压症的易感基因型。     

参麦注射液对慢性间歇性缺氧大鼠胸骨舌骨肌收缩性能的影响

目的探讨参麦注射液(SMI)对慢性间歇性缺氧大鼠胸骨舌骨肌收缩性能的影响。方法健康雄性SD大鼠30只,单纯随机抽样分为正常对照组(A组)、慢性间歇性缺氧组(B组)和参麦药物干预组(C组),对B、C组大鼠间歇缺氧(8h/d,5周)以模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者慢性间歇性缺氧的特征。采用电刺激法测定等长收缩胸骨舌骨肌肌条在不同刺激频率下收缩性能的变化。结果(1)B组大鼠胸骨舌骨肌在10～100Hz的电刺激频率下的肌张力分别为(19.5±4.7)、(23.8±4.7)、(33.0±5.1)、(45.1±5.9)、(54.2±7.0)、(66.1±9.1)、(74.2±9.1)、(79.7±9.0)、(82.0±8.4)、(80.7±11.8)g/cm2,与A组比较差异均无统计学意义[A组肌张力分别为(23.2±5.6)、(26.2±5.0)、(35.1±5.4)、(46.0±8.5)、(57.0±9.9)、(69.9±9.7)、(79.2±9.5)、(85.7±7.6)、(87.9±7.9)、(86.6±12.4)g/cm2,P均>0.05];与C组比较差异均有统计学意义[(30.5±2.3)、(40.0±5.4)、(56.2±7.6)、(72.2±6.4)、(82.0±5.5)、(92.4±4.6)、(98.1±4.0)、(99.2±7.4)、(101.8±3.9)、(102.2±4.0)g/cm2,P均<0.05]。(2)在诱导疲劳试验中,B组大鼠胸骨舌骨肌1～5min张力百分比分别为(75.6±8.5)%、(41.6±7.3)%、(29.0±2.7)%、(20.4±2.9)%、(18.5±2.5)%,与A组同时间点比较差异均有统计学意义[(87.9±5.7)%、(72.1±11.5)%、(55.6±9.6)%、(39.7±10.7)%、(33.2±10.2)%,P均<0.05],与C组比较差异均有统计学意义[(87.9±4.4)%、(67.9±14.1)%、(48.4±9.9)%、(38.2±7.0)%、(33.8±9.3)%,P均<0.05]。结论慢性间歇性缺氧能够增加上气道肌的疲劳,SMI具有显著增强上气道肌收缩力和抵抗疲劳的作用。     

肺动脉高压患者心率校正QT间期和QT离散度的研究

目的:检测肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)患者的心率校正的QT间期(heartrate-corrected QT interval,QTc)和QTc离散度(QTc dispersion,QTcd),并评价其与肺动脉压力的关系。方法:入选2003年12月至2008年7月因初步诊断为PH而进行右心导管术的患者。记录静息12导联心电图,手工测量QT间期并用Bazett公式进行校正。根据平均肺动脉压,将患者分为对照组,轻-中度PH组和重度PH组。结果:共入选201例患者。男性患者的QTc和QTcd在3组间差异无统计学意义。女性患者中,重度PH组的QTc比对照组高〔(436.1±39.4)msvs.(407.6±24.8)ms,P=0.037〕,重度PH组的QTcd(68.5±20.9)ms高于对照组(45.1±12.6)ms和轻-中度组(58.6±14.7)ms(P=0.002;P=0.003)。此外,女性患者的QTc和QTcd与平均肺动脉压正相关(r=0.207,P=0.03;r=0.236,P=0.012)。结论:本组资料中女性PH患者的QTc和QTcd与平均肺动脉压正相关,且在重度PH患者中显著增高,有待于进一步探讨。     

葛根素对糖尿病合并颈动脉硬化患者血液流变学和sICAM-1、sVCAM-1的影响

目的探讨2型糖尿病（T2DM）合并颈动脉硬化患者血瘀的病理基础,观察葛根素注射液对其血液流变学及细胞黏附分子的影响。方法将80例伴血瘀证的T2DM合并颈动脉硬化患者随机分为治疗组和对照组;两组均行饮食控制和DM常规治疗,治疗组加行葛根素注射液治疗15 d。治疗前后,检测两组血液流变学、可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）、可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）。结果与对照组比较,治疗组治疗后血液流变学指标、sICAM-1、sVCAM-1及hs-CRP均明显下降（P均〈0.01）。结论葛根素能改善T2DM合并颈动脉硬化伴血瘀证患者的血液流变学,调节免疫细胞黏附分子表达,有效地防治或延缓T2DM合并颈动脉硬化的发生、发展。     

p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠(NaAs02)致人胚胎肺成纤维细胞(HELF)凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞(p53组)、转染了PC质粒的HELF细胞(PC组)、常规培养的HELF细胞(正常组),在6孔板中培养48 h后,分别加入0、3、9、15 mmoL/L NaAsO2溶液,培养24 h后,用real-time PCR法检测p53、Bax、bcl-2 mRNA基因表达水平,采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋白表达水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 p53组细胞p53基因mRNA表达水平(0.51±0.29)低于PC组及正常组[(1.32±0.26),(1.00±0.20),P均<0.05],p53组p53基因蛋白表达水平[(4.10±1.20)%]低于PC组和正常组[(8.00±1.63)%、(7.90±1.79)%,P均<0.05];p53组、PC组、正常组在染砷0、3、9、15 mmol/L时,细胞凋亡率[(0.57±0.28)%、(22.91±4.86)%、(40.05±3.93)%、(44.87±3.58)%,(0.65±0.24)%、(14.09±3.49)%、(20.31±3.66)%、(32.42±3.63)%,(0.56±0.25)%、(12.14±3.70)%、(19.61±3.63)%、(30.43±2.83)%]、Bax mRNA表达水平[(12.73±3.96)、(25.12±6.42)、(104.96±26.77)、(154.04±3052),(14.63±3.57)、(36.75±3.67)、(272.26±66.11)、(846.12±243.36),(14.75±5.65)、(37.22±11.27)、(278.51±37.42)、(861.67±369.29)]、Bax蛋白表达水平[(15.07±0.83)%、(23.79±3.99)%、(3851±158)%、(53.86±124)%,(15.43±1.45)%、(36.11±1.37)%、(56.86±1.97)%、(76.09±2.01)%,(15.20±1.03)%、(35.25±1.09)%、(55.56±2.17)%、(74.48±2.85)%]均随着染毒剂量的增加而增高(P均<0.05),而bcl-2 mRNA表达水平[(443.00±244.47)、(156.79±53.18)、(62.13±13.66)、(23.10±6.44),(420.55±110.77)、(48.15±10.02)、(14.91±6.53)、(7.54±2.62),(577.75±123.22)、(49.68±10.11)、(12.41±1.28)、(7.22±1.89)]、bcl-2蛋白表达水平[(47.20±3.77)%、(41.80±2.94)%、(36.00±2.36)%、(29.00±2.91)%,(45.90±4.15)%、(35.70±2.77)%、(29.80±2.78)%、(24.80±2.66)%,(46.70±3.47)%、(36.20±2.90)%、(30.10±3.21)%、(25.10±2.28)%]均随着染毒剂量的增加而降低(P均<0.05);在染砷3、9、15 mmol/L时,p53组的细胞凋亡率、bcl-2 mRNA表达水平、bcl-2蛋白表达水平均高于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05),而Bax mRNA表达水平、Bax基因蛋白表达水平均低于同一染砷剂量的正常组和PC组(P均<0.05).结论 p53基因减少了NaAsO2致HELF的凋亡,可能是通过改变部分凋亡途径实现.     

冬凌草甲素对鼻咽癌HNE-1细胞株生长及其PCNA、Caspase-3表达的影响

目的观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株HNE-1生长及其细胞核抗原(PCNA)、Caspase-3表达的影响。方法 HNE-1中加入冬凌草甲素,MTT法观察其生长情况,FCM检测细胞周期,免疫细胞化学染色法检测PCNA,Western-blot技术检测Caspase-3。结果加入冬凌草甲素后HNE-1细胞生长受抑制,细胞被阻滞于G_0/G_1期;冬凌草甲素作用48 h后,HNE-1细胞的PCNA蛋白表达下调,Caspase-3蛋白表达增加。结论冬凌草甲素在体外可显著抑制人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞生长并诱导其凋亡,其机制可能是下调PCNA蛋白表达,激活Caspase-3的活性。     

血清同型半胱氨酸与冠心病的相关性研究

目的探讨冠心病患者血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平变化的临床意义。方法检测106例冠心病患者和50例健康对照组的血清Hcy的水平。结果冠心病患者血清Hcy水平较健康对照组明显升高(P0.01);稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛及急性心肌梗死三组Hcy比较水平依次升高,差异有统计学意义(P0.05)。Hcy水平随着冠状动脉病变支数的增加依次升高,有显著性差异(P0.05)。结论血清Hcy水平变化与冠状动脉病变的严重程度相关,是冠状动脉病变程度的重要危险因素之一。     

二苯乙烯苷对H2O2诱导PC12细胞损伤的抗氧化作用

目的 探讨2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)对H2O2诱导PC12细胞损伤的抗氧化作用.方法 本实验分为正常对照组、H2O2处理组和TSG(0.1、1、10和50 μmol/L)预处理组.采用MTT比色法检测细胞活性,活性氧探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)试剂盒测定细胞的氧化应激变化.结果 与正常对照组相比,细胞经H2O2诱导处理后,细胞存活率降低,胞内ROS水平增高,抗氧化酶活力降低,脂质过氧化产物MDA含量增加.不同浓度的TSG预处理后能减轻H2O2所致的细胞损伤,减少胞内ROS累积,增加细胞的抗氧化酶活力,减轻脂质过氧化反应.结论 TSG可抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与其抑制氧化应激有关.     

多重巢式RT-PCR检测526例急性髓系白血病患者29种融合基因

目的:探讨多重巢式RT-PCR法检测急性髓系白血病患者(AML)融合基因的临床价值。方法:采用多重巢式RT-PCR方法对526例初诊AML患者进行29种常见融合基因检测,并观察检出结果在FAB分型中的分布情况。结果:在526例AML患者中检测出融合基因188例(35.7%),包括AML1/ETO、AML1/MDS1、CBFβ/MYH11、BCR/ABL、MLL基因异常、PML/RARα、TLS/ERG、PLZF/RARα、NPM/RARα、SET/CAN,其形态学分布基本符合文献报道。结论:多重巢式RT-PCR法检测初诊AML患者中的融合基因,是AML分层诊断、个体化及靶向药物治疗的必要依据,并提供与预后相关的重要信息。     

乙型脑炎病毒NS5蛋白原核表达与亚细胞定位研究

目的对乙型脑炎病毒NS5蛋白进行原核表达和亚细胞定位研究。方法通过PCR扩增乙型脑炎病毒NS5基因,并将之克隆至原核表达载体pET-28a（＋）中,构建的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。将表达产物纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备NS5蛋白特异性的多克隆抗体。同时,构建NS5基因与绿色荧光蛋白（EG-FP）融合表达的真核表达质粒pcDNA-NS5-EGFP,将之转染BHK-21细胞,利用激光共聚焦荧光显微镜观察NS5蛋白在BHK-21细胞中的亚细胞定位。结果 NS5蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达蛋白分子量大小约为103kD,该蛋白在真核细胞中的表达呈颗粒状不均匀分布于整个细胞,且颗粒状主要分布在细胞质中。结论成功表达乙型脑炎病毒NS5蛋白,并对NS5蛋白的亚细胞定位进行了分析,为进一步研究NS5蛋白提供依据。