ANXA2敲除的A549细胞系的构建及其对H1N1和H9N2流感病毒复制的影响北大核心CSCD

目的旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ANXA2敲除的A549细胞,并探索ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。方法本研究设计了3对靶向ANXA2基因外显子的特异性sgRNAs,分别将sgRNAs构建到LentiCRISPRv2载体上获得重组质粒,与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒后感染A549细胞,通过嘌呤霉素压力及有限稀释法筛选ANXA2基因敲除的单克隆细胞株,用靶基因测序及Western-blot验证ANXA2的敲除效果,并通过CCK-8试验比较ANXA2敲除细胞和野生型A549细胞的细胞活力。再分别用人流感病毒WSN(H1N1)和禽流感病毒SD98(H9N2)感染ANXA2敲除和野生型A549细胞,经TCID_(50)检测ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。结果成功获得了ANXA2敲除的A549细胞系,且与野生型A549细胞相比,细胞活力无显著差异;ANXA2敲除后WSN(H1N1)和SD98(H9N2)流感病毒的病毒滴度均升高,其中ANXA2对SD98(H9N2)流感病毒的影响要大于WSN(H1N1)。结论本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了ANXA2敲除的A549细胞,并发现ANXA2敲除促进了流感病毒的复制,本研究为流感病毒复制和致病机制的研究奠定了基础。     

2014—2017年甘肃省结核分枝杆菌耐药监测结果分析

目的 分析甘肃省肺结核患者结核分枝杆菌分离株耐药情况。方法 2014年9月1日至2017年8月31日,采用整群分层等比例随机抽样方法,选取甘肃省30家县级结核病定点诊疗机构作为监测点,排除痰涂片抗酸染色阴性且调查期间正在接受抗结核治疗或不同意接受调查的肺结核患者,对培养阳性的≥15岁的肺结核患者分离的1931株结核分枝杆菌分离株(初治患者分离株1815株,复治患者分离株116株)进行10种抗结核药品[异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(Sm)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、氧氟沙星(Ofx)、卷曲霉素(Cm)、丙硫异烟胺(Pto)、对氨基水杨酸钠(PAS)]的比例法表型药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。结果 1931株结核分枝杆菌分离株的总耐药率、耐多药率、单耐药率、多耐药率和广泛耐药率分别为26.26%(507/1931;95%CI:24.30%~28.22%)、8.44%(163/1931;95%CI:7.20%~9.68%)、11.39%(220/1931;95%CI:9.98%~12.81%)、6.42%(124/1931;95%CI:5.33%~7.51%)和0.41%(8/1931;95%CI:0.13%~0.70%)。其中,初、复治患者分离株的总耐药率[分别为25.45%(462/1815;95%CI:23.45%~27.46%)和38.79%(45/116;95%CI:30.10%~47.84%)]和耐多药率[分别为7.82%(142/1815;95%CI:6.59%~9.06%)和18.10%(21/116;95%CI:11.10%~25.11%)]差异均有统计学意义(χ²=5.357,P=0.021;χ²=11.623,P=0.001),且初治患者分离株在男性、中部地区的总耐药率[分别为26.22%(284/1083)和24.96%(158/633)]均明显低于复治患者分离株[分别为41.49%(39/94)和51.43%(18/35)],差异均有统计学意义(χ²=5.241,P=0.022;χ²=5.888,P=0.015)。对10种抗结核药品的总耐药率前3位依次为INH[16.78%(324/1931)]、EMB[15.38%(297/1931)]、RFP[10.10%(195/1931)]。据此估算,甘肃省每年新发耐药、耐多药、广泛耐药患者分别为2341~2764、665~940、5~70例。结论 甘肃省结核病耐药情况严重,以一线抗结核药品耐药为主。同时,初治患者的耐药情况应引起重视。     

注射剂溶媒选择与说明书不符致医患矛盾3例分析

目的探讨药物溶媒选择与药品说明书不符致医患矛盾的处理,为医院多学科处理医患矛盾提供参考。方法对于注射用奥美拉唑钠、注射用丙氨酰谷氨酰胺及胺碘酮注射液3种药物因为稀释溶媒与药品说明书不符所引起医患矛盾进行了分析,药师发挥了在处理此类纠纷方面的积极作用。结果通过药师的药学服务和用药宣教工作,医患矛盾得以化解。结论医院应发挥药师专业技术特长,开展合理用药的药学服务工作,减少因不合理用药和药物配伍不当引起的医患矛盾和医患纠纷。     

2013年南阳市城区大、中学生网络成瘾行为调查

目的了解南阳市城区大中学生网络成瘾行为发生状况,为预防和干预提供依据。方法应用2013年南阳市青少年健康相关行为调查资料,分析南阳市城区大中学生网络成瘾行为发生情况。结果 2013年南阳市大中学生总上网率为93.33%;网络成瘾倾向率和网络成瘾率分别为11.80%和3.92%。结论南阳市城区大中学生网络成瘾行为发生率5年来呈上升趋势,学校和家庭要重点加强对具有网络成瘾高危特征学生的心理疏导和帮助。     

老年前列腺癌患者去势后性激素水平变化及对凝血和纤溶系统的影响

目的探讨老年前列腺癌患者去势后性激素水平变化及对血液凝血和纤溶系统活性的影响。方法27例早期前列腺癌经手术去势的患者作为研究组,39例非前列腺癌老年患者作为正常对照组。分别测定黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)、雌激素(E2)、部分凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶原活动度(PA)、纤溶酶原(PLG)活性、α2-抗纤溶酶(α2-PI)活性、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性、二磷酸腺苷(ADP)活性、D-二聚体(DD)含量、血小板聚集率和黏附率、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)抗原浓度。结果研究组中患者TT、FT、E2水平显著降低,E2降低幅度小于TT,LH、FSH、FT/TT、E2/TT显著升高;PT、APTT显著缩短,Fib及DD含量显著增加,血小板聚集率、黏附率及ADP活性均显著升高,PLG、α2-PI活性显著增强,t-PA抗原含量及t-PA/PAI-1显著下降,PAI-1含量显著增加。AT-Ⅲ活性无显著变化。结论前列腺癌患者去势后性激素比例严重失调;血小板活性及血液凝血活性显著增强,纤溶活性显著抑制,提示去势患者存在发生动脉硬化的高度危险性。     

重庆市居民蛔虫感染流行病学调查分析

目的了解重庆市人群蛔虫感染情况和影响蛔虫感染的相关因素分析,为制订防治措施提供依据。方法以全国第一次寄生虫病分布调查点为主层,在全市范围内抽取7个区县,每区县3个点,每个点检查500人,每人采集一份大便标本,采用KatoKatz厚涂片法计数检查蛔虫卵。结果共调查7个县21个点,检查10575人,蛔虫感染率在1.13%～50.33%之间,平均为20.91%;与第一次分布调查比较感染率下降幅度在41.75%～97.34%之间,平均下降了69.29%;性别间差异无统计学意义(χ2=0.53,P>0.05);年龄以30岁以下3个组感染率最高,显著高于其他年龄组(P<0.01),但此3组之间差异无统计学意义(P>0.05);大于60岁组显著低于其他年龄组(P<0.01);文化程度以学龄前儿童与初中、小学学历感染率最高。蛔虫感染因素分析,有6个变量的回归系数差异存在统计学意义,危险因素强度排序依次为生吃蔬菜(X10)、喝生水(X11)、未服驱虫药(X13)、低年龄组(X14)、不良厕所类型(X6)、饭前不洗手(X8)。结论蛔虫感染率较20世纪90年代大幅度下降,感染度亦相应减轻,蛔虫感染的主要方式是经口吞入感染期虫卵。生吃蔬菜、人畜粪便未经无害化处理和饭前不洗手是最危险因素。     

不同浓度七氟醚对急性心肌缺血再灌注老龄大鼠血清、心脏5-HT、白细胞介素和海马组织SOD、MDA的影响

目的 探究七氟醚对急性心肌缺血再灌注（AIRI）模型的老龄大鼠血清5-羟色胺（5-HT）、白介素（IL）-1α、IL-1β和海马组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响。方法 选取SPF级健康雄性老龄大鼠40只,随机分为5组,建立AIRI模型,模型组给予氧气吸入,七氟醚组分别吸入1%、2%、3%及4%的七氟醚,采用免疫组织化学法检测大鼠心脏组织5-HT、IL-1α、IL-1β的蛋白表达量;ELISA法检测血清5-HT、IL-1α、IL-1β浓度;采用黄嘌呤氧化酶法测定海马组织SOD的活性,硫代巴比妥酸显色法测定海马组织MDA活性;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测血清5-HT、IL-1α、IL-1β和海马组织SOD、MDA中mRNA的表达量。结果 与模型组比较,七氟醚2%、3%、4%浓度组心脏组织、血清中5-HT、IL-1α、IL-1β蛋白水平、血清中5-HT、IL-1α、IL-1β mRNA水平显著降低（P<0.05）;七氟醚2%、3%、4%浓度组海马组织MDA蛋白及mRNA水平显著降低,SOD蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.05）。结论 2%~4%的七氟醚能够显著降低AIRI模型老龄大鼠心脏、血清5-HT、IL-1α、IL-1β表达水平,降低海马组织MDA水平,提高SOD活性。     

培养大鼠海马胆囊收缩素阳性神经元的电生理学特性

目的 探索海马内胆囊收缩素(CCK) 阳性（CCK⁺ ）神经元的电生理学特性。方法 用整合有CCK启动子-绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒对培养海马CCK⁺神经元进行标记,应用全细胞膜片钳技术对标记CCK⁺神经元的电生理学特性进行研究。结果 CCK⁺神经元的胞体长径为(22.85±0.77)μm,短径为(16.21±0.42)μm (n=20),静息电位 (RMP)为(-55.90±1.30)mV,膜电容 (Cm)为(45.77±2.06)pF,膜阻抗 (Rm)为(711.00±46.69)MΩ; CCK+神经元500 ms内100 pA去极化电流诱发动作电位的发生频率为(26.17±3.41)Hz (n=12); CCK⁺神经元的自发抑制性突触后电流的发生频率［(5.26±0.71)Hz, n=7］显著高于自发兴奋性突触后电流的发生频率［(3.24±0.62)Hz, n=6］。 结论 CCK⁺神经元的相关电生理学特征可能与其在中枢神经系统内重要的调节功能相关。     

SH-SY5Y细胞凋亡过程中Cpne5蛋白表达的变化

目的探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化。方法显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化。结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加。A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平。血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2±2.1%,与对照组1.1±0.1%比,差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化。结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路。     

载碱性成纤维细胞生长因子温敏水凝胶对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨分化的作用研究

目的:实验合成载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,研究其对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)成骨分化的作用.方法:制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶水凝胶,冻干后电子显微镜下观察其表征;检测水凝胶毒性;CCK-8法筛选出载bFGF温敏水凝胶促BMMSCs增殖最适浓度并用于后续研究;碱性磷酸酶染色、茜素红染色及钙结节半定量分析观察其对BMMSCs成骨向分化能力的作用;实时荧光定量PCR检测其对BMMSCs成骨相关基因表达的影响.结果:(1)成功制备壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶,扫描电镜下冻干后的水凝胶孔径为20～80μm.(2)活/死细胞染色结果显示壳聚糖/β-甘油磷酸钠/明胶温敏水凝胶具有良好的生物相容性.(3)载bFGF温敏水凝胶能显著促进BMMSCs增殖,并呈剂量依赖性,最适浓度为100 ng/mL(P<0.01).(4)载bFGF温敏水凝胶组碱性磷酸酶表达增多,钙结节形成增多(P<0.05).(5)载bFGF温敏水凝胶组成骨相关基因(ALP、BMP-2、Runx2)表达增高.结论:载bFGF温敏水凝胶能促进大鼠BMMSCs成骨分化.