压电免疫传感器两种抗体固定方法的比较研究

目的比较压电免疫传感器两种抗体固定方法的优劣,选择压电免疫传感器抗体敏感膜固定的最佳方法. 方法分别采用巯基化方法和蛋白A(SPA)固定法将抗人胰岛素单克隆抗体固定在压电免疫传感器金膜电极表面,比较不同抗体工作浓度、不同浓度标准溶液反应条件下抗体固定量、一致性以及传感器响应能力如频率变化、反应时间、检测线性范围以及反应非特异性等. 结果两种固定方法制备的压电免疫传感器其检测灵敏度、反应时间相当,但巯基化固定方法抗体固定量大、一致性好、检测线性范围较宽、非特异反应低. 结论抗体巯基化法制备的压电免疫传感器具有检测范围宽、非特异反应低等优点,是免疫传感器抗体敏感膜制备的理想方法.     

抗脂多糖单链噬菌体抗体在大肠埃希菌中的表达及筛选

目的研究小鼠鼠源性的抗脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)单链可变区片段(single-chain fragment variable, ScFv),即在大肠埃希菌TG1中的表达,并筛选出对LPS具有较高亲和力的ScFv. 方法将预先构建好的有效库容量为4.75×106的噬菌体抗体库接种至SOBAG培养基上,隔夜培养后扩容至约1×1010;严格控制lac启动子的表达,仅当加入M13KO7辅助噬菌体后才使ScFv以附着型的形式表达,然后利用LPS淘筛特异性的ScFv,富集的噬菌体阳性克隆重新感染TG1;最后随机挑选出190个菌落在96孔培养板分别培养单个含特异性ScFv的TG1菌落,经间接ELISA检测抗LPS的ScFv. 结果淘筛一轮过后即有3×104阳性菌落长出,190个菌落经间接ELISA检测有两个阳性克隆.结论成功地使鼠抗LPS ScFv在大肠埃希菌中表达,并从中筛选出了两株抗LPS ScFv.     

146株念珠菌的分布及药敏结果分析

目的对临床送检标本分离出的念珠菌,进行细菌分布及药敏结果分析,为临床用药提供依据. 方法按常规方法转种培养,经涂片染色,发现孢子或菌丝者转种法国科玛嘉显色培养基进行分纯,用法国生物梅里埃公司VITEK-32细菌仪专用YBC卡鉴定,用ATB Fungus进行耐药监测,其中氟康唑用纸片扩散法进行监测. 结果分离出念珠菌 146株,以白色念珠菌最为多见,其次是光滑念珠菌;药敏结果敏感率由高到低为:两性霉素B 87.7%、氟康唑87.7%、5-氟胞嘧啶84.3%、制菌霉素72.6%、益康唑17.8%、咪康唑15.0%、酮康唑14.4%. 结论念珠菌感染中以白色念珠菌最为多见,药敏结果显示氟康唑、氟胞嘧啶、两性霉素B敏感性高;对送检标本及时进行真菌培养和药敏试验,合理使用抗生素和抗真菌药,减少多重耐药和深部真菌感染的发生.     

枣属药用植物资源产业化过程副产物及废弃物的资源价值发现与循环利用策略构建

我国枣属（Ziziphus）植物可供药用的主要有枣、酸枣和滇刺枣,均属药食同源品种,资源需求量大。但其在生产及深加工过程产生大量废弃物及副产物,因无有效利用途径而废弃,造成资源浪费与环境污染。结合课题组前期研究进展,对该类群药用植物资源产业化过程废弃物及副产物的产生及其潜在资源价值进行了分析,对其资源利用途径与系统利用策略进行了整理,以期为我国枣属药用植物资源产业链延伸提供支撑,为其资源价值提升提供借鉴。      

雷珠单抗联合玻璃体切割术对PDR患者血清VEGF-A和SDF-1表达的影响

目的：探讨雷珠单抗联合玻璃体切割术(VT)对PDR患者血清VEGF-A、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达的影响。

方法：选取2017-01/2018-01本院收治的PDR患者120例,依据随机数字表法分为A组和B组,每组60例,A组给予VT治疗,B组在此基础上给予玻璃体腔注射雷珠单抗治疗,比较两组VT手术情况、并发症及VEGF-A、SDF-1、BCVA、CMT。

结果：两组术后血清VEGF-A、SDF-1水平明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05); B组VT手术时间、电凝止血、术中出血及并发症发生率明显低于A组(P<0.05); 两组术后1d, 3mo BCVA、CMT明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05)。

结论：雷珠单抗联合VT可有效降低PDR患者血清VEGF-A、SDF-1水平,减少VT创伤及并发症,且可有效改善患者BCVA、CMT。     

氯化锂通过TGFBI促进角膜基质成纤维细胞增殖和自噬

目的：研究TGFBI和微管相关蛋白轻链3(LC3)在角膜营养不良患者中的表达,及氯化锂(LiCl)通过TGFBI对角膜基质成纤维细胞增殖能力的影响。

方法：用免疫组化和Western-blot方法检测角膜营养不良及正常角膜组织中TGFBI和LC3的表达。实验构建了TGFBI过表达载体并转染角膜基质成纤维细胞,分别以5、10、20、40mmol/L LiCl作用于突变型TGFBI转染的角膜基质成纤维细胞,检测不同时间(0、1、6、12h)后,TGFBI与LC3蛋白表达变化,并用CCK-8法检测细胞增殖活性。

结果：TGFBI和LC3在角膜营养不良患者角膜组织中显著高表达。TGFBI过表达抑制角膜基质成纤维细胞增殖活性(P<0.05)。LiCl抑制突变型TGFBI转染的角膜基质成纤维细胞中TGFBI和LC3蛋白表达,并增强其细胞增殖活性(P<0.05)。

结论：LiCl可以促进角膜基质成纤维细胞增殖活性和自噬,其作用机制与下调TGFBI和LC3的表达有关。     

中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症新生儿筛查及随访研究

目的 探讨中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（MCADD）中国人群流行病学特征、表型、基因型及预后。方法 回顾性分析2009年1月至2018年6月期间经高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）筛查并结合基因检测诊断为MCADD的新生儿资料。结果 2 674 835例接受筛查的新生儿中诊断MCADD的12例（1/222 902）。其中10例接受基因检测,发现ACADM基因16个突变位点的13种突变类型：7种为已报道突变（p.T150Rfs^*4、p.M1V、p.R206C、p.R294T、p.G310R、p.M328V、p.G362E）;5种新突变（p.N194D、p.A324P、p.N366S、c.118+3A > G、c.387+1del G）和1例11号外显子缺失,以p.T150Rfs^*4最常见（4/16）。ACADM基因突变位点检出率80%。未见表型-基因型相关性。确诊后给予饮食指导及对症治疗,随访4~82个月期间未见急性代谢失衡发作,除1例合并脑发育不良外均预后良好。结论 MCADD在中国南方人群相对罕见;p.T150Rfs^*4为中国人群热点突变;筛查阳性的病例建议联合辛酰基肉碱检测及基因判断。     

脓毒症急性肾损伤患者早期肾功能恢复的影响因素分析研究

目的：旨在分析脓毒症诱导的急性肾损伤（SA-AKI）患者肾功能早期恢复的影响因素。 方法：回顾性分析2021年1月至2022年12月在复旦大学附属中山医院重症医学科治疗的86例同时符合脓毒症3.0诊断标准和AKI诊断标准的SA-AKI患者。根据其是否在7天内恢复肾功能将其分为恢复组（37例）和未恢复组（49例）。对两组患者的临床资料和实验室检查进行比较,采用单因素和多因素分析筛选变量,确定影响SA-AKI患者肾功能恢复的危险因素,使用ROC曲线评估各因素对SA-AKI早期肾功能恢复的预测价值。 结果：SA-AKI的恢复率为43.02%（37/86）。与早期恢复组相比,未恢复组患者肾脏替代治疗率、住院死亡率和28天死亡率均更高（P<0.001）。年龄（P=0.047）、APACHE II评分（P=0.034）、尿量（P=0.025）、尿NGAL（P=0.038）、去甲肾上腺素剂量（P=0.035）是影响SA-AKI患者肾功能恢复的独立危险因素,用以上5个指标拟合出最终模型logit(P)=-4.091+0.001*尿NGAL-0.001*尿量+0.040*年龄+0.073*APACHEII评分+1.906*去甲肾上腺素剂量。该模型预测SA-AKI恢复的AUC为0.823,敏感度为73.5%,特异度为81.1%。 结论：SA-AKI患者早期肾功能未恢复与预后不良相关。年龄、APACHE II评分、尿量、尿NGAL、去甲肾上腺素剂量为影响SA-AKI患者肾功能早期恢复的独立危险因素,联合指标的综合判断对SA-AKI患者早期肾损伤恢复具有预测价值。