HIV-2 DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察

目的：用构建的HIV－2外膜蛋白gp105和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠，评价其免疫效果。方法：将HIV－2型gp 105和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中，构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明，构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp105或／和gag.构建的疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞亚类数，并用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体水平。结果：构建了3种HIV－2 DNA疫苗pIRES1gag、pIRSE1gp105和pIRES1gag-gp105，转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV－2特异性抗体，其中pIRES1gag-gp105免疫鼠中，淋巴细胞增殖最显著，而pIRES1gp105免疫鼠中HIV－2特异性抗体水平最高。结论：构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应，其中pIRES1gp105诱导的体液免疫应答最显著，而pIRES1gag-gp105 诱导的细胞免疫响应最显著。     

人干扰素基因植物表达载体的构建及其在人参愈伤组织细胞中的表达

目的：利用组织培养人参愈伤组织细胞表达人干扰素，探讨用植物细胞表达人类基因的可行性。方法：用PCR从pBV889扩增人干扰素α2b（hIFN-α2b）编码基因，将其克隆于pMD18-T载体和pBI121，进而构建植物细胞表达载体pBIFN。用冻融法将pBIFN导入根瘤农杆菌LBA4404，经卡那霉素和利福霉素筛选后利用农杆菌介导的转化法将hIFN-α2b基因导入人参愈伤组织细胞。经G418筛选，形成阳性细胞。用PCR、RT—PCR、Western blot和WISH／VSV系统检测转基因组织。结果：经PCR检测表明hIFN-α2b基因已成功整合到人参愈伤组织细胞基因组中。RT-PCR证明存在hIFN-α2b基因的转录产物。Western blot分析表明转基因人参愈伤组织细胞能有效表达hIFN-α2b蛋白。WISH／VSV系统检测分析表明表达的hIFN-α2b具有生物学活性。结论：本研究利用转基因人参愈伤组织细胞成功地表达了人干扰素，为进一步提高口服干扰素的疗效打下基础。     

rhGM-CSF作为成人乙肝疫苗无(弱)应答者免疫佐剂初探

Objective To investigate the effect of recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor (rhGM-CSF) as adjuvant on immune response in adults of non-and hyporesponders to hepatitis B vaccine. Methods Those who were once immunized with recombined yeast gene hepatitis B vaccine more than one standard scheme in two years and negative for hepatitis B markers were randomly sorted as group A and group B. 33 adults of group A were given hepatitis B vaccine 10 μg each time. The immune procedure was O, 1 and 6month. 34 adults of group B were given rhGM-CSF 300 μg for the first day, then 10 μg each time for routine immune. The blood samples were collected before the first injection and in 1, 2 and 8 months (T1, T2, TS)following the first injection to test Anti-HBs. Results Anti-HBs positive conversion rates of group A and B at T8 was 39.39% and 64.71% respectively(P=0.038). Anti-HBs levels of group B at TI, T2, T8 were(113.85±198.56) mIU/ml, (312.40±349.44) mIU/ml, (427.74±411. 58) mIU/ml (P=0.001). There was significant difference between group A and B in T8 Anti-HBs levels(P=0.010). Conclusion Better immune response was found in the group of rhGM-CSF with hepatitis B vaccine. So rhGM-CSF can induce the immune respond to hepatitis B vaccine.     

微囊藻毒素免疫检测技术研究进展

微囊藻毒素主要是由蓝绿藻属产生的的一类毒素,其毒性主要表现在特异性抑制细胞内的蛋白磷酸酶(Ppl和PP2A)。目前有关微囊藻毒素分析和检测的研究开展得十分广泛,免疫检测技术由于其众多的优点更显示出其良好的应用前景。本文详细地综述了目前国内外在微囊藻毒素免疫检测方面的研究方法和成果;并在总结这些研究的基础上,展望了微囊藻毒素免疫检测技术的发展方向。     

非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区5’-CpG岛的甲基化的研究

目的：探索p15基因异常甲基化在非何杰金淋巴瘤(NHL)中的变化及其在各分型中的表达。 方法：用特异PCR（MSP）的方法检测32例非何杰金淋巴瘤石蜡标本p15基因甲基化；检测非何杰金淋巴瘤患者标本21例，用RT-PCR方法测定p15基因的表达。 结果:非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区甲基化的发生率为18.9%（10/53），高度恶性比低度恶性更易发生甲基化，其发生率分别为27.3%和0%。 结论:p15基因甲基化可能是非何杰金淋巴瘤发病的原因之一，并与病程进展有关。     

诺如病毒表达衣壳蛋白单克隆抗体的制备、鉴定和初步应用

目的:建立能稳定分泌抗诺如病毒(Norovirus)N蛋白的单克隆抗体(mAb)细胞株, 制备抗诺如病毒核衣壳蛋白的mAb, 为诺如病毒的早期快速检测及致病机制的研究提供实验材料.方法:用E.coli表达的GⅡ组广州株NVgz01(DQ369797)Norovirus-N蛋白免疫BALB/c小鼠, 通过PEG使小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合, 使用HAT选择性培养基培养融合细胞, 用间接ELISA和Western blot测定mAb的效价、免疫球蛋白亚型和mAb的特异性, 并将各mAb之间进行配对.结果:通过细胞融合和克隆化, 共筛选出4株分泌抗Norovirus-N蛋白抗体的杂交瘤细胞株N2C3、 N7C2、 N4B1、 N8A9.间接ELISA和Western blot检测结果表明, 这4株mAb都可以与E.coli表达的GⅡ组广州株Norovirus-N蛋白产生特异性反应, 并且能与天然粪便标本中的GⅡ组Norovirus产生特异性反应.配对结果显示N2C3和N7C2之间配对, 对表达蛋白和天然病毒都具有较强的检测灵敏度.结论:获得了诺如病毒GⅡ组特异性mAb, 为制备免疫诊断试剂盒及致病机制的研究奠定了基础.     

CTLA-4在重症肌无力患者中的表达及其多态性导致的无效转录研究

目的 探讨重症肌无力(MG)患者细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)的表达状况及由CTLA-4基因启动区多态性导致的不同遗传易感性机制。方法 ELISA法测定MG患者血清中sCTLA-4的水平；限制性片段长度多态性分析用于检测启动区-1772、-1661位点的多态性；转录因子NF-1和c／EBPβ结合位点通过染色质免疫沉淀实验(CHIP)得以验证。结果 MG患者血清sCTLA-4的表达水平与等位基因的突变相关，携带T→C^1772突变基因的患者可表达高水平的sCTLA-4。TC^1772基因型的频率在MG患者尤其是胸腺瘤亚组明显高于对照组，而G^-1661等位基因和GG^-1661基因型的频率在MG患者则显著降低。当-1772位点的等位基因是T而非C时，存在转录因子NF-1结合位点；同样，当-1661位点的等位基因是G而非A时，存在转录因子c／EBPβ结合位点，刀豆蛋白A(Con A)、植物血凝素(PHA)能促进NF-1和c／EBPβ的这种位点特异性转录活性。结论 MG患者CTLA-4表达异常，启动区C／T^1772和A／G^-1661多态性可导致无效转录，T→C^1772的突变能影响基因的剪接，干扰蛋白的表达和功能，阻止了负性调节信号的传递而致发病。     

动眼神经池段与周围血管的关系

目的：研究动眼神经池段与周围血管的关系。方法：选取成人头颅标本，红色乳胶灌注，福尔马林固定，在手术显微镜下解剖观测。结果：动眼神经池段腹面的接触血管主要为小脑上动脉(100％)和脑桥后外动脉(42．9％)；背面主要为大脑后动脉(100％)、后交通动脉(14．8％)、四叠体动脉(100％)、副四叠体动脉(10．7％)和脉络膜后动脉(10．7％)。动眼神经滋养动脉主要来自脑底动脉环的后内侧动脉组。穿入动眼神经根的血管主要为四叠体动脉和副四叠体动脉(14．3％)。结论：动眼神经池段与周围血管的关系复杂，该区周围血管的压迫及周围血管的血管瘤可以造成临床眼肌麻痹和相应的中枢神经症状。     

用RACE技术对一株肠道病毒3''端进行扩增和序列分析

目的 应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增，并对其核苷酸序列进行比较分析。方法 提取病毒总RNA，以锚定oligdT（17）引物进行逆转录，用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增，将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果 获得了该病毒的3′端核苷酸序列，同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90％左右，而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80％；推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90％以上。结论 用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析，证明该病毒属新型肠道病毒类，为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。     

常熟市≥35岁人群肥胖测量指标与糖尿病患病关系研究

目的 探讨肥胖测量指标BMI(体质指数)、WC(腰围)、WHR(腰臀比)、WHtR(腰身比)与糖尿病患病的关系.方法 采用多阶段整群随机抽样的方法,随机抽取6个乡镇/街道≥35岁的居民11599名进行问卷调查并体检,分析BMI、WC、WHR、WHtR和糖尿病的关系.结果 常熟市≥35岁成人糖尿病患病率12.18％,空腹血糖平均水平为(5.66±1.32)mmol/L.不同BMI、WC、WHR、WHtR组间空腹血糖水平差异均有统计学意义(P值均＜0.05);BMI、WC、WHR、WHtR与空腹血糖水平呈正相关关系;BMI、WC、WHR、WHtR最高分位组糖尿病患病风险分别是最低分位组的4.40、2.50、2.26、2.13倍(P值均＜0.05).BMI、WC、WHR、WHtR每增加1个标准差,糖尿病患病风险分别增加40.0％、50.4％、52.3％、46.2％.结论 肥胖测量指标BMI、WC、WHR、WHtR与糖尿病关系密切,糖尿病患病风险随着肥胖程度的增加而升高,中心性肥胖指标对糖尿病的筛查价值优于BMI.