患者血清microRNA表达谱及相关生物信息学分析

探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清中microRNA(miRNA)的差异性表达谱,并通过生物信息学探索其意义。方法 下载GEO数据库开源数据集（GSE70080）,分析慢阻肺患者与正常人血清的miRNA差异性表达谱,分析其对慢阻肺的诊断价值,运用miRTarbase、Target Scan、PicTar 、miRDB等软件预测和筛选miRNAs的靶基因,并将得出的上述靶基因功能富集、信号通路及蛋白质互作网络分析。 结果 该数据集中慢阻肺与健康对照组血清差异表达的miRNA共62个(P＜0.05) ,其中较对照组上调8个,下调54个,上调miRNA和下调miRNA诊断慢阻肺的受试者曲线下面积分别为0.938和0.969。靶基因预测显示差异性表达miRNA共有15099个靶基因,GO功能分析显示上述靶基因主要涉及Wnt、MAPK、NF-κB等重要生物学过程,KEGG分析主要富集于Wnt、NF κB、MAPK等信号通路。miRNA和mRNA的网络图显示SLC4A8与多个miRNA相关。蛋白质互作网络显示靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,ACVR1B、ACVRL1、KRT2、KRT74、KRT82在互作网络中具有核心地位。结论 慢阻肺患者的血清miRNA存在差异性表达,miRNA可能通过调控靶基因参与调控相关的生物功能和通路参与慢阻肺发病机制调控     

急诊科护士对新发传染病知信行调查问卷的编制

目的 编制急诊科(emergency department,ED)护士对新发传染病(emerging infectious diseases,EID)知信行(knowledge attitude practice,KAP)调查问卷,并进行信效度检验。方法 以KAP理论为基础,通过文献回顾、德尔菲专家函询形成问卷初稿;于2021年5月方便抽样上海市3所三级甲等综合医院293名ED护士进行预调查,完成问卷条目筛选和信效度检验。结果 形成含有34个条目的ED护士对EID知信行调查问卷,其中知识维度12个条目、态度维度10个条目、行为维度12个条目。问卷整体Cronbach's α系数为0.926,各维度Cronbach's α系数为0.617~0.968;问卷整体分半信度为0.846,各维度分半信度为0.614~0.958。问卷水平内容效度指数(scale-level content validity index,S-CVI)为0.99,条目水平内容效度指数(item-level content validity index,I-CVI)为0.99~1.00;探索因子分析显示,知识、态度、行为3个维度分别提取公因子4个、1个、2个,累计方差贡献率分别为50.192%、78.319%、73.341%,问卷整体累计方差贡献率67.242%;验证因子分析显示,问卷整体及各维度拟合度较好。结论 EID知信行调查问卷具有良好的信效度,可作为ED护士对EID KAP的评估工具。     

甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜骨桥蛋白和整合素αVβ3表达的影响

目的 探讨甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及其受体整合素αvβ3表达的影响及其作用机制.方法 建立CIA大鼠模型,分为模型组和甲氨喋呤(MTX)组,后者用MTX进行干预治疗;采用免疫组织化学染色技术检测滑膜组织OPN和整合素αvβ3的表达,ELISA方法检测血清TNF-α水平.结果 ① CIA模型组和MTX组大鼠的滑膜OPN、整合素αvβ3表达均明显高于正常大鼠对照组(均为P<0.01);与模型组比较,MTX组OPN和整合素αVβ3的表达减少(均为P<0.01). ②正常对照组和MTX组大鼠血清TNF-α水平显著性低于模型组大鼠(均为P<0.01).结论 滑膜OPN和整合素αvβ3异常表达在CIA发病中具有重要意义.MTX通过下调滑膜OPN和整合素αvβ3的表达,降低血清TNF-α水平从而达到治疗CIA的作用.     

体外血栓形成机理的实验研究

血栓形成与流体力学因素关系密切，用健康成人血样进行的实验表明，Chandler血栓环内血液呈现出三维流动和二次流动状态，在管壁处的剪切应力最大。体外血栓形成应考虑血栓环弯曲和内部血液回流因素。血栓环内下弯月面处血栓的形成可能是流速相对较高的流体元冲击下弯月面导致血小板和红细胞聚集所至。当血栓环旋转时间低于10min时，血栓形成不良。15min是血栓形成的最佳时间。转速为3．75rpm时，不能形成血栓。     

法乐四联症心肌纤维结构变化与心功能关系研究

目的　探讨法乐四联症心肌纤维肥大的程度对心功能与术后恢复的影响。方法　对 80例法乐四联症患者右室流出道心肌组织切片改变观察及心肌纤维直径测定 ,结合临床术前彩超测定心功能参数以及右心导管测定参数进行分析。结果　心肌纤维肥大程度与心功能指标有一定的关系。一部分四联症病例心肌纤维发生增生肥大 ,肥大的程度对射血分数无影响 (P >0 0 5 ) ,但与心肌每搏量和年龄有十分显著的相关关系 (P <0 0 1) ,并对术后恢复有一定的影响。结论　法乐四联症心肌纤维形态改变随年龄增长而加重 ,提示在条件允许的情况下 ,应尽早手术为宜     

登革3型病毒prM-E和NS1多基因重组质粒DNA免疫原性增强效果观察

目的　观察登革 3型病毒的prM E和NS1基因重组质粒DNA混合免疫对免疫原性的增强作用 ,为登革DNA疫苗混合免疫提供实验依据。方法　将登革 3型病毒的prM E和NS1基因重组质粒DNA分别混合及单独免疫BALB/c小鼠 ,采用中和试验及MTT法检测免疫小鼠血清中和抗体及脾细胞特异性CTL(cytotoxicT lymphocytes)杀伤率。结果　混合重组质粒DNA免疫组与单一prM E基因重组质粒DNA免疫组均在末次免疫后第 14天检测到中和抗体 ,在第 33天达到高峰 ,为 1∶32。在末次免疫后第 4 1天 ,当效靶比为 4 0∶1时 ,混合重组质粒DNA免疫组的特异性CTL杀伤率为 15 % ,而 2个单质粒DNA组分别为 10 .9%和 12 .4 %。结论　重组质粒DNA混合免疫可同时诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫 ,而且细胞免疫应答具有一定的增强作用 ,但没有出现特异性CTL杀伤率的协同增强效果。     

烫伤后IL-6和IL-1α对大鼠外周血中性粒细胞凋亡的影响

目的:研究严重烫伤后血IL-6和IL-1α对中性粒细胞(PMN)凋亡的影响。方法:复制30%体表面积Ⅲ度烫伤大鼠模型;分离PMN,TUNEL荧光标记,流式细胞仪分析细胞凋亡;PMNcaspase3活性以荧光免疫吸附酶法测定;血清IL-6和IL-1α水平以酶联免疫法测定。结果:血清IL-6水平(μg/L)在伤后各组(3、6、12、24、48h依次分别为9.14±1.16、12.49±1.14、3.01±0.75、1.41±0.28和1.56±0.43)和IL-1α水平(ng/L)在伤后3、6、12h组(90.08±8.39、320.93±14.48和47.84±5.19)均分别显著高于伤前对照组IL-6(0.24±0.07)和IL-1α(27.65±4.86)水平(P<0.05);伤后各组PMN凋亡率(%)按时点依次为9.89±2.00、4.98±1.35、1.31±0.72、2.49±1.87和6.88±1.13显著少于伤前组13.66±3.88(P<0.05);PMNcaspase-3的活性测定结果与PMN的凋亡表现相一致。结论:大鼠烫伤后外周血PMN凋亡明显延迟;IL-6和IL-1α等细胞因子是重要的影响因素,减少细胞内caspase-3的激活可能是其机制之一。     

脂类代谢和运输涉及的基因与大鼠肝再生的相关性分析

目的在基因转录水平了解脂类代谢和运输相关基因在大鼠肝再生(LR)中的表达变化和模式。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与脂类代谢和运输基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术中基因表达的差异性确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中193个基因与肝再生相关。肝再生早期[部分肝切除(PH)后0.5~4h]、前期(PH后6~12h)、中期(PH后12~66h)、后期(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为113、20、66和1;基因的总表达次数为250、205、796和293。共上调852次,下调630次,分为27种表达方式。肝再生早期和前期胆汁酸代谢相关基因转录减弱;早期和后期糖皮质激素分解相关基因转录增强;前期和中期磷脂合成相关基因转录增强,磷脂分解相关基因转录减弱;中期脂肪酸、白三烯和鞘糖脂合成相关基因转录增强,甘油三酯和磷脂酰肌醇代谢相关基因转录增强,鞘糖脂分解相关基因转录减弱;中期和后期前列腺素合成和脂肪酸分解相关基因转录增强;几乎在整个肝再生中性激素、糖皮质激素和孕酮合成相关基因转录增强,鞘磷脂代谢相关基因转录增强,脂类运输相关基因转录增强,胆固醇代谢相关基因转录减弱。结论肝再生中脂类代谢和运输变化较大,与肝再生密切相关。     

嗅鞘细胞/细胞外基质夹层支架的制备和形态学观察

目的研究嗅粘膜嗅鞘细胞在细胞外基质夹层支架内的生长特性,为治疗神经系统损伤寻找新的移植供体。方法嗅鞘细胞/细胞外基质夹层支架由四层毯状细胞外基质支架和三层嗅粘膜嗅鞘细胞相间叠加构成。纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建单层毯状细胞外基质支架,在支架表面种植嗅粘膜来源的嗅鞘细胞。于倒置显微镜下观察嗅鞘细胞在支架上/内的生长过程,培养3d后,在细胞表面再次滴加上述细胞外基质混合胶以构建第二层毯状支架,依次重复两次。夹层支架制成组织切片和超薄切片后,用光镜和电镜观察和分析夹层支架的内部结构以及嗅鞘细胞在支架内的生长情况。结果由顶层至底层,支架内的嗅鞘细胞数量逐渐增多,细胞突起逐渐延长,细胞内分泌颗粒逐渐增多及其电子密度逐渐增高;细胞可在支架之间迁移,其水平排列方向具有一致性;嗅鞘细胞的细胞膜可与支架紧密粘附,支架内局部区域出现组织间隙。结论嗅粘膜嗅鞘细胞可在细胞外基质夹层支架内正常增殖和分化,细胞与支架具有良好的组织相容性。该夹层支架可作为嗅鞘细胞三维生长的载体,用于移植治疗神经损伤。     

肝癌细胞微细胞介导染色体转移方法学的建立与探讨

目的建立肝癌细胞微细胞介导染色体转移方法，为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位建立技术平台。方法人单染色体供体细胞通过微核化、出核、融合步骤将随机标记有耐药neo基因的正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞系C5F中，对微细胞杂交克隆进行药物筛选和单细胞克隆，并填序列标签位点-PCR和全染色体涂染荧光原位杂交方法验证人染色体转移的结果。结果获得具有G418和HAT双重抗性的微细胞杂交细胞，通过单细胞分离克隆方法获得15个具有双重抗性的微细胞杂交克隆，序列标签位点-PCR结果发现导入染色体的随机片段丢失，全染色体涂染荧光原位杂交结果发现导入的人8号染色体与大鼠染色体发生了稳定的重组。结论成功建立微细胞介导的染色体转移技术，为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位奠定了技术基础。