和厚朴酚对哮喘小鼠肺组织炎症反应的干预作用及其机制

目的：探讨和厚朴酚（HNK）对哮喘小鼠肺组织炎症反应的影响,阐明其干预作用及相关机制。方法：选取健康雌性C57BL/6J小鼠20只,随机分为对照组、模型组、地塞米松（DXM）组和HNK组,每组5只。采用鸡卵清蛋白（OVA）联合氢氧化铝[Al（OH）₃]悬液腹腔注射致敏和OVA滴鼻激发构建哮喘小鼠模型,在激发前30 min分别对DXM组和HNK组小鼠予以腹腔注射DXM和HNK溶液,模型组小鼠予以等量生理盐水。处死小鼠后取小鼠肺组织,HE染色观察评估肺组织病理形态表现;收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行快速迪夫染色,观察炎性细胞浸润程度;ELISA法检测各组小鼠血清中白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平,比色法检测各组小鼠肺组织匀浆中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、核因子κB（NF-κB）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和H2AX组蛋白（γH2Ax）表达水平,检测各组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度。结果：与对照组比较,模型组小鼠气道上皮细胞脱落坏死数量明显增多,气道管壁增厚及气道旁炎症细胞浸润程度明显增加;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠上述表现减轻,而HNK组和DXM组小鼠肺组织病理改变表现相似。与对照组比较,模型组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平升高（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平降低（P<0.05）;而HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平与DXM组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织匀浆中MDA水平升高（P<0.05）,而SOD和GSH-Px活性降低（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织匀浆中MDA水平降低（P<0.05）,而SOD和GSH-Px活性升高（P<0.05）;HNK组小鼠MDA水平和SOD及GSH-Px活性与DXM组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平降低（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05）;HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3、γH2Ax和Bcl-2蛋白表达水平与DXM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度明显增强;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度减弱,HNK组小鼠γH2Ax免疫荧光强度与DXM组接近。结论：HNK可在一定程度上抑制哮喘小鼠的肺组织损伤及炎症反应,其机制可能与其抑制氧化应激反应及DNA损伤有关。     

七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤及其机制

目的：观察吸入麻醉药七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤,阐明七氟醚诱导脑神经毒性的可能机制。方法：HT22小鼠海马神经元细胞随机分为空白对照组、2%七氟醚组（2%Sevo 6 h组、2%Sevo 12 h组和2%Sevo 24 h组）、4%七氟醚组（4%Sevo 6 h组、4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组）和8%七氟醚组（8%Sevo 6 h组、8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组）,应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别检测各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率。根据实验结果将细胞分为生理盐水组、生理盐水+4%Sevo 12 h组、生理盐水+8%Sevo 12 h组、N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）、NAC+4%Sevo 12 h组和NAC+8%Sevo 12 h组。采用MTT法和LDH法分别检测NAC预处理后各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率;应用单细胞凝胶电泳检测各组HT22小鼠海马神经元细胞DNA双链断裂情况;Western blotting法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量;DCFH-DA法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与空白对照组比较,2%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率差异无统计学意义（P>0.05）;4%Sevo组和8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.01）,死亡率升高（P<0.01）。与4%Sevo组比较,同一时间8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与4%Sevo 6 h组比较,4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与4%Sevo 12 h组比较,4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与8%Sevo 6 h组比较,8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与8%Sevo 12 h组比较,8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与生理盐水组比较,生理盐水+4%Sevo 12 h组和生理盐水+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞内DNA双链断裂增多,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量增加、ROS水平升高（P<0.05）。与生理盐水+4%Sevo 12 h组比较,NAC+4%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）;与生理盐水+8%Sevo 12 h组比较,NAC+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）。结论：七氟醚能够通过诱导DNA损伤导致HT22小鼠海马神经元细胞死亡,其机制可能与诱导海马神经元细胞中ROS积聚有关。     

双氢青蒿素对甲型流感病毒H1N1诱导人支气管上皮细胞TNF-α和IL-6表达的影响及机制研究

  目的  探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）A/PR/8/34（H1N1）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）促炎症因子和细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号通路蛋白表达的影响。  方法  采用不同浓度的DHA（即0、12.5、25、50和100 μmol/L）作用BEAS-2B细胞24 h ,CCK8法检测DHA对BEAS-2B细胞活性的影响。IAV吸附BEAS-2B细胞1 h ,分别采用不同浓度的DHA（低、中、高浓度DHA ,即12.5、25和50 μmol/L）作用24 h,同时设置正常对照组和IAV组。采用实时荧光定量PCR法（real time quantitative PCR, RT-qPCR）和酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）的mRNA和蛋白表达水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK（phospho-ERK, p-ERK）蛋白表达水平。采用特异性ERK激动剂（ERK agonist,20 ng/mL）作用BEAS-2B细胞（分组为正常对照、IAV、DHA、DHA+IAV、ERK agonist、DHA+IAV+ERK agonist组）24 h,观察对DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α、IL-6和p-ERK表达的影响。  结果  DHA浓度在12.5、25、50 μmol/L时,BEAS-2B细胞存活率与正常对照组比较差异无统计学意义;与正常对照组比较,IAV组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白及p-ERK蛋白表达水平增高 (P<0.05),与IAV组比较,IAV+ DHA低、中、高浓度组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6、p-ERK蛋白表达水平呈剂量依赖性的下降(P<0.05);而ERK激动剂减弱了DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞ERK信号通路蛋白p-ERK表达和促炎症因子TNF-α、IL-6的分泌。  结论  DHA可通过ERK信号通路抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α和IL-6的表达。     

机器人手术系统联合血管切除重建行胰十二指肠切除术的17例疗效评价（附手术视频）

  目的  探讨机器人手术系统下联合血管切除重建行胰十二指肠切除术治疗进展期胰腺癌的临床疗效。  方法  回顾性分析自2011年8月?2018年9月上海交通大学医学院附属瑞金医院完成的17例机器人手术系统下联合血管切除重建（操作见视频1）行胰十二指肠切除术的局部进展期的胰腺癌患者的临床资料。  结果  17例患者中4例胰腺癌患者由于肿瘤侵犯严重、胰腺质地软中转开腹,13例患者手术顺利完成。16例（94%）患者手术达到R0切除。14例联合静脉重建,3例联合动脉重建。平均手术时间（401±170） min,平均术中出血（647±345） mL,术后平均住院天数（20±8） d,无围手术期死亡。术后病理及随访结果:1例为胰腺导管内乳头状黏液肿瘤,1例为胰腺神经内分泌肿瘤（G1级）,目前情况良好,8例胰腺导管腺癌及1例胰腺神经内分泌癌患者于随访期间因肿瘤复发转移死亡,中位（最小值～最大值）生存期12（8～26）个月。5例胰腺导管腺癌及1例恶性胰腺导管内乳头状黏液肿瘤患者目前继续随访中,其中1例已存活了38个月（截止至2019年7月）。  结论  机器人手术系统下联合血管切除重建行胰十二指肠切除术难度较大,但安全可行,局部进展期的胰腺癌患者经谨慎评估患者病情和医院手术能力后可以采用。     

6-姜酚预处理对乏氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用

  目的  探讨6-姜酚（6-G）预处理是否能够减轻乏氧/复氧（H/R）诱导的H9C2细胞损伤及相关机制。  方法  采用常规方法制备心肌细胞H/R体外模型〔H9C2细胞加入经氮气饱和后的乏氧液后放于培养箱,通入混合气体（体积分数1%O₂,5%CO₂,94%N₂）作用15 min,培养3 h后取出细胞,置于常氧培养箱（37 ℃,体积分数5%CO₂）进行复氧培养1 h〕。在建立心肌细胞H/R体外模型前给予6-G预处理,采用MTT法测定细胞活力,并筛选6-G干预下细胞活力最大的6-G质量浓度进行后续实验。采用DCFH-DA荧光探针检测6-G预处理对H9C2氧化应激水平的影响,荧光显微镜以及流式细胞仪观察细胞内氧化应激的作用。Western blot法检测H/R诱导细胞炎症反应因子中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）表达的变化。  结果  与H/R组相比,6-G+H/R组细胞活力从 50 μg/mL 6-G 组开始上升,200 μg/mL 6-G时细胞活力最大,后续实验选6-G干预质量浓度为200 μg/mL。与对照组相比,200 μg/mL 6-G组活性氧（ROS）含量无明显变化（P>0.05）,ROS荧光波峰未见明显迁移,H/R组ROS的含量升高,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向右侧迁移,与H/R组相比,6-G+H/R组ROS含量降低,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向左侧回移。与对照组相比,6-G组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达无明显变化（P>0.05）;H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与H/R组相比,6-G+H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  6-G预处理能够减轻H/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

Exploring an Integrative Therapy for Treating COVID-19: A Randomized Controlled Trial

Objectives: To develop a new Chinese medicine(CM)-based drug and to evaluate its safety and effect for suppressing acute respiratory distress syndrome(ARDS) in COVID-19 patients. Methods: A putative ARDS-suppressing drug Keguan-1 was first developed and then evaluated by a randomized, controlled two-arm trial. The two arms of the trial consist of a control therapy(alpha interferon inhalation, 50 μg twice daily; and lopinavir/ritonavir, 400 and 100 mg twice daily, respectively) and a testing therapy(control therapy plus Keguan-1 19.4 g twice daily) by random number table at 1:1 ratio with 24 cases each group. After 2-week treatment, adverse events, time to fever resolution, ARDS development, and lung injury on newly diagnosed COVID-19 patients were assessed. Results: An analysis of the data from the first 30 participants showed that the control arm and the testing arm did not exhibit any significant differences in terms of adverse events. Based on this result, the study was expanded to include a total of 48 participants(24 cases each arm). The results show that compared with the control arm, the testing arm exhibited a significant improvement in time to fever resolution(P=0.035), and a significant reduction in the development of ARDS(P=0.048). Conclusions: Keguan-1-based integrative therapy was safe and superior to the standard therapy in suppressing the development of ARDS in COVID-19 patients.(Trial registration No. NCT 04251871 at www.clinicaltrials.gov)     

腹腔镜肝切除术与射频消融术对原发性肝癌患者肝功能和免疫功能及3年无瘤生存率的影响

【摘要】目的 探究腹腔镜肝切除(LH)与射频消融术(RFA)治疗对原发性肝癌(HCC)患者肝功能、免疫功能及3年无瘤生存率的影响。方法 回顾性分析2014年3月~2016年1月我院122例HCC患者临床资料,其中行LH术治疗68例（LH组）,行RFA术治疗54例（RFA组）。记录两组手术相关指标（手术时间、术中出血量、输血率、术后住院时间）及围术期并发症发生情况,比较两组术前及术后1周肝功能［谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)］、免疫功能［T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)］差异,并采用Kaplan Meier法绘制3年无瘤生存曲线,使用Log rank法比较两组3年无瘤率。结果LH组手术时间、术中出血量、输血率及术后住院时间均高于RFA组（P＜005）。两组围术期并发症发生率比较差异无统计学意义（P＞005）。术后1周时,两组肝功能指标（ALT、AST）、CD8+均较术前升高（P＜005）,且LH组高于RFA组（P＜005）;两组部分免疫功能指标（CD3+、CD4+）较术前降低（P＜005）,且LH组低于RFA组（P＜005）。术后3年时,LH组无瘤生存42例（6176%）,RFA组无瘤生存19例（3519%）,且LH组3年无瘤生存率明显高于RFA组（P＜005）。结论 RFA术与LH术治疗HCC各有优劣,RFA术在微创方面更具优势,但无瘤生存情况不及LH术,临床应根据实际情况,为HCC患者制定个性化的治疗方案。     

螺旋CT三期增强扫描对原发性肝癌合并门静脉癌栓的诊断价值

目的探讨螺旋CT三期增强扫描对原发性肝癌合并门静脉癌栓的诊断价值。方法选取我院2016年1月-2017年8月收治的原发性肝癌患者59例,收集患者的临床资料及影像学资料,以病理学检查结果为金标准,分析三期增强扫描对原发性肝癌合并门静脉癌栓的检出率、诊断准确率。结果 CT平扫对原发性肝癌合并门静脉癌栓的检出率、诊断准确率分别为74.57%、69.49%,三期增强扫描对原发性肝癌合并门静脉癌栓的检出率、诊断准确率分别为96.61%、94.91%,明显高于CT平扫,差异具有统计学意义(χ^2值分别为11.614、13.034,P<0.001);CT平扫中,41例(69.49%)患者瘤体边界不清,瘤体位于肝右叶者35例(59.32%),位于肝左叶者24例(40.67%);门静脉癌栓多为低密度或高低密度混合影,门静脉主干或分支均可见不同程度的扩张,门静脉主干平均直径(2.12±0.99)cm,右门静脉扩张呈现为竹节状。三期增强扫描中,31例(52.54%)患者动脉期低密度门静脉癌栓内及其周围可见网状供血动脉,出现"门静脉铸形",呈不均匀强化;多数原发性肝癌患者受累肝实质均可见斑片状强化;门静脉期及延迟期患者门静脉腔内呈现不同范围充盈缺损。结论螺旋CT三期增强扫描对原发性肝癌合并门静脉癌栓检出、诊断准确率高,能清晰显示病灶图像特征。