以壳聚糖为絮凝剂的消炎退热颗粒原药水提液絮凝效果研究

目的采用絮凝技术优化消炎退热颗粒原药水提液除杂净化工艺,保留有效成分的同时去除更多杂质,提高原药水提液的澄清度。方法明确消炎退热颗粒原药水提液中杂质的成分后,通过筛选絮凝剂的实验,确定了采用壳聚糖絮凝剂对原药水提液进行絮凝除杂。针对以消炎退热颗粒原药水提液中有效成分秦皮乙素的保留率,杂质成分蛋白质和鞣质的去除率以及絮凝处理后药液上清液的浊度作为研究指标,分别研究考察了壳聚糖絮凝剂的配比及用量、絮凝温度、絮凝快搅速度及快搅时间对絮凝整体效果的影响。结果通过实验得出壳聚糖作为絮凝剂用于消炎退热颗粒原药水提液除杂净化的最佳絮凝工艺条件为壳聚糖加入量1.25 g/L,絮凝温度为40℃,快搅速度为350 r/min,快搅时间为3 min。该条件下有效成分秦皮乙素的保留率为88.92%,蛋白质和鞣质的去除率分别为62.96%和67.19%,絮凝后药液静置24 h后浊度为5.0 NTU。结论壳聚糖作为絮凝剂用于消炎退热颗粒原药水提液的除杂净化,能有效提高药液中杂质的去除率,同时能提高药液的澄清度。     

芸香苷诱导K562细胞凋亡机制

目的研究芸香苷诱导白血病K 562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达。方法体外培养白血病K 562细胞,M TT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/P I双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TR IZOL试剂提取K 562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×1-0 5m o l/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,W estern b lotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。结果芸香苷浓度为2×1-0 5、4×10-5、8×10-5m o l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K 562细胞44h后,应用M TT比色法计算IC50为4×1-0 5m o l/L;4×10-5m o l/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/P I双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达;W estern B lotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论芸香苷诱导K 562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一。     

感冒药YL2000水煎剂中挥发性成分的GC-MS分析

目的:研究感冒药YL2000水煎剂中挥发性成分,并考察其中含挥发油的羌活、独活、黄芩、黄连4味中药配伍后对各单味中药挥发油成分的影响。方法:水蒸气蒸馏法提取YL2000水煎剂的挥发性化学成分,气相色谱-质谱法分离并分析鉴定其成分,用峰面积归一化法测定其相对含量,并与文献中报道的各单味中药挥发油成分进行比较。结果:从挥发油中分离出146种化合物,初步鉴定了其中39个化合物,其挥发性成分总量占色谱峰总面积的85.66%。大部分单味中药中挥发油含量较高的成分在YL2000共煎液中未能检测到,多数成分存在于共煎液挥发油中而在单味药挥发油中无任何相关文献报道。结论:YL2000组成中药配伍对挥发油成分的变化提示,在煎煮过程中发生了增溶作用,可能存在一定的化学反应以及挥发性的成分蒸发了,导致部分成分发生改变。     

HPLC法测定中保心宁颗粒中丹参素的含量

目的：建立保心宁颗粒中丹参素的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定丹参素的含量。色谱柱为Agilent C18柱（250mm×4．6mm，5μm），以水-甲醇-醋酸（88：12：0.05）为流动相，柱温为室温，流速为1ml·min。结果：丹参素在2，0～10．0μg进样量的与峰面积有良好的线性关系。r=0.9998（n=5），平均回收率为97．5％（IKSD=0．61％）。结论：该测定方法精密度高，重现性好，可用于测定丹参素的含量。     

多柔比星斑马鱼胚胎心脏发育毒性表现

目的通过观察多柔比星的斑马鱼胚胎心脏毒性表现,为其作为心脏毒性评价模型提供可靠的检测指标。方法选择发育正常的6hpf(hours post fertilization)斑马鱼胚胎暴露于多柔比星2.16～34.48μmol·L-148h。显微镜观察72hpf斑马鱼心血管系统的形态学改变。通过DVC摄像系统测定心率;测量静脉窦-动脉球(SV-BA)间距,HE染色观察斑马鱼心肌结构。结果多柔比星2.16μmol·L-1组斑马鱼心血管系统形态无改变,但心率下降,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(237±13)μm。多柔比星4.31μmol·L-1可引起斑马鱼出现心包水肿,心脏畸形,心率减低,为(166±5)min-1;SV-BA间距增加,为(268±13)μm。随着多柔比星浓度增加,斑马鱼出现体长缩短、体节发育异常、脊柱弯曲、卵黄囊水肿、出血、心脏缩小等多种表型改变。心脏组织切片显示,多柔比星8.62μmol·L-1可引起斑马鱼心包腔变大、心脏缩小、心肌层变薄和心肌细胞减少。结论多柔比星对斑马鱼胚胎心脏毒性作用的表现与对哺乳动物的毒性作用表现相同,有望成为评价药物心脏发育毒性的模型。     

胡蔓藤中非生物碱类成分的分离与鉴定(Ⅲ)

目的研究胡蔓藤(Gelsemium elegans Benth.)中的化学成分。方法采用硅胶柱色谱和ODS柱色谱进行分离,Sephadex LH-20及制备液相进行纯化,根据理化性质和光谱分析进行结构鉴定。结果分离鉴定了8个化合物,分别为(+)-8-hydroxypinoresinol(1)、cleomiscosin C(2)、cleomiscosinA(3)、3,4-二羟基苯甲醛(3,4-dihydroxyphenyl aldehyde,4)、咖啡酸(caffeic acid,5)、1-O-咖啡酰基奎宁酸(1-O-caffeoylquinic acid,6)、4-O-咖啡酰基奎宁酸(4-O-caffeoylquinic acid,7)、1-O-咖啡酰基奎宁酸甲酯(1-O-caffeoylquinic acid methyl ester,8)。结论化合物1-8为首次从该属植物中分离得到。     

血脑欣胶囊对急性缺血性中风患者血浆内皮素及降钙素基因相关肽的干预作用

目的:观察血脑欣胶囊对急性缺血性中风(属中医气滞血瘀型)患者的血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)及神经功能缺损程度的影响.方法:采用随机、阳性药物平行对照的方法,选择符合西医诊断急性脑梗塞及中医辨证气滞血瘀证的患者59例,随机分为两组,治疗组30例,对照组29例.治疗组口服血脑欣胶囊,每次4粒,每日3次;对照组口服尼莫地平片,每次20mg,每日3次;14d为1个疗程.比较两组治疗结束时血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平、神经功能缺损程度评分(NDS)的变化.结果:治疗结束时,治疗组血浆ET水平(57.658±14.877)pg/L,低于对照组(70.456±17.059)pg/L,CGRP(84.404±8.705)pg/L,高于对照组(78.402±10.699)pg/L,两组比较差别均有统计学意义(P＜0.05);14d时,治疗组NDS明显较对照组降低,差别有统计学意义(P＜0.05);中医症效疗效:治疗组愈显率83.33%,总有效率96.67%;对照组愈显率58.62%,总有效率86.21%,两组间比较差别有统计学意义(P＜0.01),治疗组疗效优于对照组.结论:血脑欣胶囊通过调节急性缺血性中风患者的血浆内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)水平,减轻神经功能缺损程度,改善患者的预后.     

驱虫斑鸠菊抗肿瘤化学成分的初步研究

目的：分离筛选驱虫斑鸠菊中具有抗肿瘤活性的化学成分。方法：利用生物活性追踪的方式,采用溶剂法、高速逆流色谱技术及柱色谱法对驱虫斑鸠菊成熟果实进行抗肿瘤化学成分的分离筛选。结果：分离并确定了4个化合物的结构,分别为紫铆素、紫铆查尔酮、5,6,7,4’-四羟基黄酮、圣草酚,其中化合物圣草酚为从该植物中首次分离获得;同时经M1Tr法测定,紫铆素和紫铆查尔酮对黑色素瘤细胞株（B16、A375）均有抑制作用,且IC50值小于10uLg·mL^-1。结论：本文结果为进一步探讨驱虫斑鸠菊药材在抗肿瘤方面的作用提供了依据。     

紫杉醇联合重组人粒细胞集落刺激因子动员 乳腺癌患者外周血干细胞的效果及影响因素

 目的研究紫杉醇联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员乳腺癌患者外周血干细胞（peripheral blood stem cell,PBSC）的效果及影响因素分析。方法2006年2月至2009年6月我科收治行紫杉醇动员的26例乳腺癌患者,紫杉醇（PTX,175 mg/m2 持续静脉滴注24 h）化疗后,白细胞降至1.0×109/L左右时使用rhG-CSF 5 μg /(kg·d) 动员至采集结束。并进一步分析患者年龄,化疗后白细胞最低数,采集前各类血细胞数,术后分期以及既往化疗等因素对采集单个核细胞（mononuclear cell,MNC）、CD34+细胞数的影响。结果白细胞计数于紫杉醇化疗后中位7d降至1.0×109/L 左右,皮下注射rhG-CSF中位4d进行外周造血干细胞采集,采集总MNC平均(7.89±1.45)×108/kg,采集总CD34+细胞平均(4.88±1.54)×106/kg。年龄与采集CD34+细胞数显著相关。而其他因素对MNC及CD34+细胞数均无显著影响（P>0.05）。所有患者均未出现严重不良反应。结论PTX（175 mg/m2 持续静脉滴注24h）联合rhG-CSF为转移性乳腺癌患者动员的有效安全方案。患者年龄显著影响CD34+细胞的采集数量。     

回苏宝液对A549细胞抑制作用及其机制的初步探讨

目的:观察红藤脂酸钠中药制剂回苏宝体外对人肺腺癌细胞系A549的生长抑制作用,并对其作用机制作初步探讨.方法:MTT法测定不同时间点不同浓度紫杉醇、回苏宝对A549细胞生长的抑制百分率,计算IC50(半数抑制浓度) 值,用DIP染色法观察A549细胞核的改变.结果:对照组(紫杉醇)作用30min后对A549细胞抑制率可达93%,24h达到100%;实验组血浆药浓度(80.3mg/ml)或2倍稀释回苏宝(40.15mg/ml)在8h内对A549细胞抑制率迅速升高,12h后缓慢上升(抑制率超过90%),48h到达平台期,72h达到98%左右.回苏宝在24h、48h的IC50值均为22.1mg/ml.正常A549细胞8h、24h DAPI染色其细胞核染色质饱满;2倍稀释回苏宝液作用8h的A549细胞核染色质有边集、减少现象,作用24h后显微镜视野中完整的A549细胞极少,核有固缩、凋亡现象;血浆浓度回苏宝液作用8h、24h后细胞残存很少,细胞核染色质边集、固缩,有凋亡小体形成的现象.结论:回苏宝体外对A549细胞生长有明显的抑制作用,其作用机制可能主要是诱导肿瘤细胞发生凋亡.