小鼠支气管肺泡干细胞的培养鉴定和分选

目的对正常成年小鼠肺内支气管肺泡干细胞(bronchoalveolar stem cell,BASC)进行克隆培养、鉴定和流式细胞仪分选。方法用胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织制备肺单细胞悬液,并经免疫磁珠分选Sca-1+细胞;胶原蛋白和小鼠Swiss-3T3成纤维细胞系包被培养板;无血清乳腺上皮细胞培养基培养Sca-1+细胞;双重免疫荧光染色Clara细胞抗原(CCA)和肺泡表面活性蛋白C(SP-C)鉴定BASC,并用流式细胞仪分选BASC。结果通过胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织,平均每只成年小鼠可得到有核细胞总数(1.6~1.8)×107;经磁珠分选后的Sca-1+细胞纯度明显高于未经分选的肺Sca-1+细胞[分别为(87.3±5.9)%、(9.6±1.8)%,P<0.05];在无血清乳腺上皮细胞培养基中Sca-1+细胞在第4天可形成BASC克隆和其他不表达CCA、SP-C的细胞克隆;流式细胞仪检测CD45-CD31-Sca-1+CD34+细胞占肺细胞总数的0.7%~1.1%,根据此分子标记能够分选出高纯度的BASC。结论通过胶原酶和分散酶联合消化,免疫磁珠分选的Sca-1+细胞在无血清乳腺上皮细胞培养...     

经腹膜后腹腔镜输尿管中上段切开取石35例

目的探讨经腹膜后腹腔镜输尿管中上段切开取石治疗中的适应证选择、手术技巧及临床应用价值。方法对35例经腹膜后腹腔镜下输尿管中上段结石手术治疗中及术后恢复的情况进行分析。其中输尿管上段结石27例，中段结石8例。16例术前有体外冲击波碎石术（ESWL）失败，2例行输尿管镜取石术失败，17例术前未行其他治疗。结果35例中4例中转开放，余顺利完成取石成功。手术时间45～225min，平均75分钟。术中出血、术后恢复等指标明显好于开放输尿管取石术；术中出血量20～100ml，平均40毫升；术后1例漏尿2天；术后1～3d拔除后腹膜腔引流管，术后住院3～10d。随访2～12个月，患者肾、输尿管积水均明显好转，无切13疼痛、结石复发扣输尿管切开缝合处狭窄。结论经腹膜后腹腔镜下输尿管切开取石技术是输尿管中上段结石的重要、有效而安全的微创治疗方法，可作为ESWL治疗输尿管中上段结石失败的有效补充，可望替代大部分输尿管中上段结石的开放性手术。     

大鲵感染温和气单胞菌的实验研究

目的分离大鲵感染的病原菌并进行菌株鉴定和药敏实验。方法从患病大鲵的心脏血和腹水中分离培养到可疑菌落，采用法国梅里埃全自动微生物分析仪进行鉴定和药敏试验。根据药敏试验结果指导养殖场进行治疗。结果经法国梅里埃全自动微生物分析仪鉴定为温和气单胞菌，药敏试验证实对庆大霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、氨曲南、头孢替坦、头孢曲松和头孢唑啉等敏感。结论本次引起大鲵感染的是温和气单胞菌。该菌对庆大霉素、复方新诺明等抗菌药物敏感。     

爱必肤（EPIGLU）在粉碎性骨折内固定术中的应用观察

目的探讨组织粘合剂2-乙基氰丙烯酸酯（爱必肤）在骨折内固定术中的使用方法、临床效果和不良反应。方法用爱必肤将细小的骨碎片按解剖关系粘着在骨干创面上，使非常复杂的粉碎性骨折变为简单的骨折，以利于复位，再常规使用钢板内固定。观察患者术中的生命体征变化、手术前后的肝肾功能情况、切口愈合质量及骨折愈合的时间。结果全部病例术中生命体征平稳，对心、肝、肾功能均无不良影响，切口甲级愈合。本组39例，其中38例于3～6个月骨折愈合。在骨折平均愈合时间和愈合率两方面的数据与对照组进行统计学分析，P〉0．05，差异无统计学意义。结论爱必肤用于骨科手术中辅助内固定，使用极为方便，未发现不良反应，不影响骨折及切口愈合。     

壳聚糖纳米颗粒作为基因载体的初步研究

目的:采用适当粒径大小的壳聚糖纳米颗粒(CS-NP)连接质粒DNA,观察CS-NP结合DNA的能力及介导基因转染的效率.方法:利用静电吸附作用连接CS-NP与报告基因pEGFP-N1,形成pEGFP-N1-CS-NP复合物.用透射电镜及激光粒度分析仪观察pEGFP-N1-CS-NP的形态、粒径大小、分布及Zeta电位.用琼脂糖凝胶电泳分析CS-NP与DNA结合能力,以比色法检测其包封率;用DNase I消化实验观察pEGFP-N1-CS-NP抗核酸酶降解的能力.体外转染A549细胞观察pEGFP-N1-CS-NP的转染活性.结果:激光粒度分析仪及透射电镜观察到pEGFP-N1-CS-NP呈较均匀的不规则球形,平均粒径约为100～200nm,Ztea电位为16～22.8mV.WCS-NP/WDNA≥4时,能有效地结合DNA,包封率＞90%.CS-NP能有效介导pEGFP-N1转染A549细胞,并在A549细胞中表达绿色荧光蛋白.结论:CS-NP能有效地与质粒连接,并有很高的包封率,能保护DNA免受核酸酶的降解.CS-NP在体外能将报告基因转染入细胞内,并在细胞内表达.这些研究结果为采用CS-NP作为基因载体应用于活细胞及活体成像的研究奠定了基础.     

RNA干扰抑制Snail表达对A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭的影响

目的:研究用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制转录因子Snail表达后,对人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化表型和体外侵袭能力的影响.方法:构建能表达针对Snail的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)的RNA干扰载体(Snail siRNA vector)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNA干扰载体(control siRNA vector),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Snail表达受抑制的A549-siSnail细胞和Snail表达未受影响的A549-siControl细胞.针对非转染(A549-nontransfection)、A549-siSnail、A549-siControl三组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测Snail、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden chamber模型检测细胞侵袭能力.结果: A549-nontransfection组:Snail和α-SMA表达强阳性,E-钙粘素表达弱阳性；A549-siSnail组:和A549-nontransfection组相比,Snail和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E-钙粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden chamber穿膜细胞数显著减少(P<0.01)；A549-siControl组:Snail、α-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden chamber穿膜细胞数和A549-nontransfection组无显著差异(P>0.05).结论: 通过RNA干扰阻滞Snail表达能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力.Snail可能在肺腺癌上皮-间充质转分化及侵袭过程中扮演重要角色,抑制Snail表达可能成肺腺癌治疗的可行策略.     

鼻咽癌颅底骨侵犯SPECT及MRI检测对比研究

目的 探讨SPECT及MRI对鼻咽癌颅底骨侵犯的检测能力及诊断价值.方法 对61例异咽癌初治患者于放疗前同期进行SPECT伞身前后位、左右头侧位平而显像和颅底断层骨显像及MRI鼻咽、颅底横断和冠状检杏,采用双盲法对两者检测结果进行比较.结果 SPECT和MRI对颅底骨侵犯的阳性检出率在全部患者中分别为51%、46%(P=0.508),在头痛、颅神经损害及两者并存患者中分别为83%、80%、88%和86%、80%、94%(P值均为1.000),在T1+T2和T3+T4期患者中分别为22%、74%和0、82%(P=0.031、0.250),在N0+N1和N2+N3期患者中分别为50%、53%和48%、40%(P=1.000、0.500).SPECT与MRI检测符合率为85%.Binary Logistic同门分析显示T分期是SPECT对颅底骨侵犯阳性检出的关联因素(χ2=4.23,P=0.040;OR值=3.04),头痛有成为SPECT和MRI对颅底骨侵犯阳性检出关联因素的趋势(χ2=3.13,P:0=077,OR=4.54;χ2=3.64,P=0.056.DR=12.00).结论 SPECT对鼻咽痛颅底骨侵犯的检测敏感性与MRI相当,检测结果与MRI有较高符合率,且与T分期有良好相关性,其临床应用价值值得进一步研究.对头痛明显、T分期晚、CT检测颅底阴性、无条件接受MRI检查的鼻咽癌患者行SPECT颅底断层骨显像阳性应考虑早期颅底骨侵犯,并以此指导放疗靶区(GTV)的确定.     

中日当归属药用植物ITS序列分析

目的建立当归属药用植物功效的分子系统学基础,为当归属药用植物功效的差异性提供分子依据。方法采用PCR技术与克隆技术相结合,获得ITS基因,进行测序,经Phy lip软件统计分析和分支分析,建立系统发育树,计算各类群间的遗传距离。结果当归属药用植物中ITS1-5.8 S-ITS2序列长度为600~629 bp,去除序列长度为165 bp的5.8 S,ITS1 ITS2排序后的长度为468个位点。系统树将当归属药用植物分为两组,以独活、白芷为代表分别聚类,甘肃产岷当归Ang elica sinensis不与上述任何一组聚类,却与欧当归L ev isticum off icina le遗传距离相对较小。结论上述结果与当归属药用植物功效差异基本吻合,启示药用植物亲缘演化关系可能是研究药用植物功效规律的一条重要途径。     

某市嘉陵江水中提取物对大鼠肝细胞AHR信号途径的诱导

目的研究某市主城区嘉陵江水中有机污染物对大鼠肝细胞细胞色素P450 1A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)基因表达和7-乙氧基-3-异吩嗯唑酮.脱乙基酶(7-ethoxyresorufin-O-deethylase,EROD)活力的诱导,比较不同剂量的有机提取物诱导大鼠肝细胞CYP1A1基因表达量和EROD酶活力的变化。方法将大鼠分为2、12和72 L/(kg体重)3个染毒组及1个玉米油溶剂对照组和1个空白对照组,每组20只动物,雌雄各半,灌胃染毒13周。染毒结束,提取大鼠肝细胞总RNA进行CYP1A1基因的RT-PCR扩增,将肝组织匀浆后测定其EROD酶活力。结果各染毒剂量组CYP1A1基因均有表达,空白对照和溶剂对照组CYP1A1基因不表达;中剂量组与高剂量组CYP1A1的相对表达量与低计量组相比,增加非常显著(P<0.01),各染毒组大鼠肝组织均可检出EROD酶活力,EROD酶活力随染毒剂量的增加而增加。结论嘉陵江水中有机污染物可诱导大鼠肝细胞芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)途径。     

肩关节镜技术与临床应用

关节内镜是应用于关节的一种内窥镜。应用于人体各关节伤病的检查诊断与治疗即称为关节镜术。关节镜的发展与19世纪某些体腔镜的发展有着密切的关系。日本东京大学的高木宪次(1888～1963年)教授于1918年首次在尸体上对关节进行了观察,为经过人体非自然孔道(内镜入路)进入体腔进