SD大鼠肝枯否细胞分离培养的改良方法与鉴定

目的枯否细胞(Kupffer cells,KC)是肝内巨噬细胞群,活化的KC参与多种生物、病理学反应过程。然而,KC分离、培养技术进展缓慢。为研究KC致炎、抗炎活化机制,旨在建立经济、简便、有效、稳定分离培养SD大鼠肝KC的方法。方法选用健康雄性SD大鼠,采用0.05%IV型胶原酶灌注肝,经25%和50%percoll密度梯度离心,提取肝KC。荧光显微镜下观察细胞自发荧光情况,锥虫蓝拒染实验鉴定细胞活力,倒置显微镜下观察KC培养过程中细胞形态变化,吞噬墨水、latex珠实验以及免疫细胞化学染色法鉴定细胞纯度。结果大鼠肝KC得率为(3.22±0.31)×107(n=24),细胞活力为(92.35±0.13)%,细胞纯度均在(94.62±0.24)%。结论该方法简单、可行,为进一步研究KC功能和作用机制奠定基础。     

毒理基因组学在生物标志物研究中的应用

近年来,毒理基因组学的快速发展为生物标志物的研究提供了一个更广阔的空间。生物标志物作为一种可以客观衡量和评价正常生理、病理过程及治疗药物药理学效应的指标,如今已被广泛应用于临床诊断和新药开发等多个领域。就毒理基因组学在发现和筛选生物标志物方面的研究现状和进展进行综述。     

三棱针点刺阿是穴治疗偏头痛疗效观察

目的:探讨三棱针点刺阿是穴治疗偏头痛的临床疗效.方法:将90例偏头痛患者随机分为治疗组(50例)和对照组(40例),2组分别采用三棱针点刺阿是穴治疗和口服尼莫地平治疗,观察2组疗效及治疗前后疼痛程度、头痛指数、持续时间以及血浆5-羟色胺和一氧化氮的含量的变化,评定临床疗效.结果:治疗组临床疗效总有效率为94%.而对照组为72.5%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组疗效优于对照组.2组治疗前头痛程度、持续时间、头痛指数比较,差异无统计学意义(P>0.05).2组治疗前头痛程度、持续时间、头痛指数均高于治疗后(P<0.05).治疗组治疗后头痛程度、持续时间、头痛指数差异有统计学意义(P<0.05).2组治疗前5-羟色胺和一氧化氮的含量比较差异无统计学意义(P>0.05).治疗组治疗后血浆5-羟色胺和一氧化氮的含量较对照组治疗后升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:三棱针点刺阿是穴治疗偏头痛有较好临床疗效,能减轻头痛程度、缩短头痛的时间、降低头痛指数,能提高血浆中血浆5-羟色胺和一氧化氮的含量.     

定量组织速度成像技术评价冠心病心肌缺血及冠脉支架植入术疗效的研究

目的探讨定量组织速度成像（QTVI）技术在冠心病患者心肌缺血评价中的价值,同时采用QTVI技术观察冠状动脉（冠脉）支架植入术后左室局部心肌功能变化,以评价其疗效。方法 53例临床诊断冠心病或可疑冠心病行冠脉造影检查（CAG）的患者纳入本研究。在行CAG检查前作QTVI检查,根据节段室壁运动速度情况（以心底部5cm/s,中段3cm/s界定）分为无心肌缺血组（n=26）和心肌缺血组（n=27）。测定左室6个壁的基底段和中段运动的收缩期峰流速（Vs）与峰值位移（Ds）,比较2组的Vs及Ds,并与CAG结果对照,以评价QTVI对冠心病的诊断价值。其中8例单纯左前降支（LAD）病变患者分别于支架植入前1天、植入后1周、4周采用QTVI技术分析室壁的运动速度指标（Vs）,以评价支架植入术的疗效。结果在左室长轴切面、心尖四腔切面、心尖两腔切面心肌缺血组左室相应节段的Vs和Ds均低于无心肌缺血组（P〈0.05）;QTVI发现的有心肌缺血的27例患者,CAG均能发现2支或以上主要冠脉狭窄;8例LAD病变患者冠脉支架植入术前LAD供血区各节段心肌Vs均明显低于无心肌缺血组（P〈0.01或P〈0.05）,与冠脉支架植入前相比,治疗后1周及4周,LAD供血区各节段心肌Vs明显增快（P〈0.01或P〈0.05）。结论 QTVI技术通过定量测定节段性室壁运动失调及局域性心功能不良,可以评价冠心病严重冠脉狭窄患者的心肌缺血,且可作为一种测定冠脉支架植入前后局部心肌速度的无创技术,用以评价冠脉支架植入术的疗效。     

关节镜下行踝关节融合术治疗晚期顽固性踝关节疼痛的临床疗效

目的 评估关节镜下行踝关节融合术治疗晚期顽固性踝关节疼痛的疗效.方法 2005年10月～2008年1月笔者所在医院收治了20例晚期顽固性踝关节疼痛患者,均采用关节镜行踝关节融合术,镜下清除踝关节内增生充血滑膜,磨削胫距关节面已磨损的关节软骨及其硬化骨,摘除出游离体,并以两枚松质骨无头螺钉固定踝关节功能位.结果 术后平均随访26周(20～32周),20例患者术前Mazur评分平均49.5分,术后平均90.7分( P <0.05),三维步态分析术前术后比较,术后患者完全融合时间为14周(12～16周).融合率为95%.2例未达到骨性融合,经治疗,术后18周时达到骨性融合.结论 关节镜下行踝关节融合术是治疗晚期踝关节顽固性疼痛行之有效的方法.     

结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用

目的 用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性.方法 常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的 片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定.纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况.结果 成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80 μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05).结论 成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础.     

单脐动脉与胎儿畸形（附9例分析）

我科自１９８９～１９９２年在２３８例胎盘病检中发现单脐动脉９例，发生率３．７８％。单脐动脉胎儿的特点是畸形率高、死亡率高。本组９例中８例胎儿有各类畸形，畸形率达８８．９％。７例胎儿死亡命死亡率７７．８％。本文就单脐动脉的发生率、形成原因及其与胎儿畸形的关系进行讨论，建议加强妊娠早期保健及围产期检查工作。及早发现单脐动脉胎儿，可为诊断先天性畸形或发现一些隐性畸形提供线索，从而指导临床产科处理，有利于优生优育。     

大鼠腓总神经端侧吻合于胫神经再生神经的逆行追踪

 【目的】 研究大鼠腓总神经被切断端侧吻合于胫神经后, 再生的腓总神经纤维的来源。【方法】 将大鼠腓总神经切断,将其远端与胫神经施行端侧吻合,存活24个月后,再次手术暴露并将HRP（辣根过氧化物酶）注入远段腓总神经干内,72h后取大鼠脊髓L3-6节段和L4、L5脊神经节冰冻切片,用四甲基联苯胺显色显示神经细胞;并取腓总神经远段、腓总神经近段中部行电镜观察神经纤维超微结构,正常腓总神经作对照。【结果】 模型鼠远段腓总神经再生神经纤维清晰、明显,神经纤维略细;脊髓L3-6节段双侧灰质前角和双侧L4、L5脊神经节均见到蓝染细胞,均以手术侧为少;腓总神经近段与正常腓总神经比较无差异、未见华勒氏变迹象。【结论】 断裂腓总神经端侧吻合于胫神经,再生神经纤维不支持因腓总神经近段溃变轴突退缩形成生长锥引导所致,来源于胫神经可能性大。     

大肠癌K-ras基因突变状况与VEGF-c、Ang-2相关性分析

目的:探讨大肠癌K-ras基因突变状况与VEGF-c,Ang-2在大肠癌中的表达及相关性。方法:采用基因测序法,S-P免疫组化法对80例大肠癌组织及15例正常组织进行K-ras基因测序及免疫组化染色。结果:大肠癌组织中K-ras基因突变发生率为27.5%,VEGF-c,Ang-2,表达率分别为48.75%和35.00%。统计学显示K-ras基因突变与VEGF-c表达呈正相关(r=0.624,P<0.05),与Ang-2表达无相关性。结论:肿瘤新生血管的形成是一种多因素多途径的相互协同过程,对K-ras基因突变患者寻找新的靶点以便控制肿瘤微血管形成,切断肿瘤转移途径具有重要意义。     

快速建立PACS系统的经验

探索小型PACS网络的建立,规划实施步骤,网络关键技术的运用及在建立网络过程中的体会,评价网络运行的实用性和稳定性.