脑出血大鼠脑组织膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达及益气活血中药的干预效应

目的:观察益气活血中药对脑出血大鼠脑组织中膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达量的影响,从脑出血损伤区微血管系统重建的角度,探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法:实验于2006-03/10在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成。实验材料:补阳还五汤全方(黄芪,当归,赤芍,红花,川芎,地龙,桃仁按20∶3∶3∶3∶2∶3∶3的比例);补阳还五汤益气成分(黄芪按上述比例);补阳还五汤活血成分(当归,赤芍,地龙,川芎,桃仁,红花按3∶3∶3∶2∶3∶3的比例)。用蒸馏水两次水煎,分别浓缩为1.54,0.81和0.73g/mL。实验分组:155只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组、活血组。正常对照组5只大鼠,其余每组30只,再随机分为术后灌胃2,4,7,14,21,28d6个观察时间点,各个时间点5只大鼠。实验干预:造模:采用立体定位技术将胶原酶Ⅶ注入大鼠大脑右苍白球制成脑出血大鼠模型。假手术组大鼠仅注入2μL生理盐水,其余手术过程相同。给药:正常对照组:普通饲养,自由饮水;假手术组和模型组术后予蒸馏水灌胃2次/d,2mL/次;益气活血组、益气组、活血组分别给予补阳还五汤全方、补阳还五汤益气成分、补阳还五汤活血成分30.80,16.20,14.60g/(kg·d)(按体表面积计算为临床70kg成人剂量的3倍)灌胃,2次/d,2mL/次。各组大鼠分别于灌胃2,4,7,14,21,28d麻醉下取脑,制备切片;正常组动物于28d处死。实验评估:免疫组织化学染色方法检测各组灌胃不同时间脑组织基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9和膜型基质金属蛋白酶的阳性微血管数。结果:155只大鼠均进入结果分析。①正常组、假手术组皮质偶见膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达。②模型组膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2呈双峰表达,4d为最高峰,至14～21d再有小高峰出现。③益气活血组给药4d时,膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2为表达低谷,低于模型组(P<0.01)、益气组和活血组(P<0.05);在中后期,益气活血组膜型基质金属蛋白酶表达高峰为7～14d,较模型组提前出现,21d后与模型组比,各治疗组膜型基质金属蛋白酶已表达极少(P<0.01);益气活血组基质金属蛋白酶2在7d后一直呈高水平维持,高于其他各组(P<0.05),28d后开始逐渐下降。④模型组基质金属蛋白酶9在造模后4d达最高峰(P<0.01),两周后几乎无表达。益气活血组基质金属蛋白酶9高峰推迟至7d出现(P<0.05),之后逐渐下降。结论:益气活血中药可通过调节脑出血后膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达,改善出血后脑组织的微环境,有利于微血管系统重建,促进组织修复。     

超声微泡造影影像学及治疗作用的研究进展

包裹型气体微泡已经发展为临床应用的超声造影剂.微泡造影剂不仅已广泛用于血池和组织灌注显像,其治疗作用也日渐突显,例如溶栓和作为药物或基因的载体.造影剂微泡的平均直径小于红细胞直径,因而能够自由运行于微循环.微泡能将生物活性物质(例如药物或基因)结合在其内或其外膜表面,并将此物质转运于体内特定组织,例如将抗肿瘤药物转运并结合于特定肿瘤组织.靶向性微泡能将肽段等特定性配体结合于其微泡表面,这种特定性配体可特异性地与血管壁表达的受体相结合,微泡因而在靶组织区域积聚[1].     

骨纤维结构不良的诊断和治疗进展

目的:对长期以来关于骨纤维结构不良大量相关研究及文献进行回顾,综述骨纤维结构不良的诊断和治疗的最新进展。资料来源:通过计算机互联网检索OVID数据库1966-01/2006-10关于骨纤维结构不良的文献,检索词:Osteofibrous dysplasia,限定语言种类为English。同时检索1994-01/2006-10中国全文期刊数据库有关骨纤维结构不良的文献,检索词为:骨纤维结构不良,限定语言种类为中文。资料选择:选择与骨纤维结构不良相关的观察对比研究、经验总结、个案报道、最新研究进展等文献,力求资料全面,排除重复研究。资料提炼:共收集相关国内外文献41篇,排除重复性研究11篇,采用30篇,包括关于骨纤维结构不良定义、发病机制、病理、诊断及治疗等。资料综合:①骨纤维结构不良是一种起源于纤维组织的良性骨肿瘤。发病率低、误诊率高。目前具体发病机制不明,现认为与常染色体显性遗传有关。②骨纤维结构不良好发于胫骨,症状为局部肿块。特征性影像学表现为胫骨中段前侧皮质膨胀性密度减低。确诊方法为病理检查。重点与骨纤维异常增殖症、造釉细胞瘤相鉴别,现有大量研究证明该病与造釉细胞瘤有联系。③治疗上过去认为10岁以前应保守治疗,10岁后选择手术治疗,目前倾向于早期骨膜外切除手术治疗。结论:骨纤维结构不良发病率低,对该病认识较少,误诊率较高,重点需与骨纤维异常增殖症、造釉细胞瘤相鉴别,应提高对该病的认识与重视程度,对可疑者行病理检查,确诊者行骨膜外切除,切除范围较大的病例行重建手术。     

白藜芦醇对动物离体心房收缩力和心率作用的种属差异性比较

目的:观察白藜芦醇对豚鼠、小鼠和家兔离体心肌收缩力和心率的影响。方法:实验于2005-08/2006-12在河北医科大学西校区实验中心完成。①实验分组:离体豚鼠、小鼠和家兔心肌各分为9组:空白对照组、溶剂对照组、递增累积浓度白藜芦醇组(浓度为10-6,3×10-6,10-5,3×10-5,10-4,3×10-4mol/L),白藜芦醇对照组(5×10-5mol/L),ATP敏感性钾通道阻断剂格列苯脲(5×10-5mol/L)预孵育 白藜芦醇组,钙激活钾通道阻断剂四乙胺(10-3mol/L)预孵育 白藜芦醇组,电压依赖性钾通道阻断剂4-氨基吡啶(10-3mol/L)预孵育 白藜芦醇组,内向整流钾通道阻断剂氯化钡(10-4mol/L)预孵育 白藜芦醇组,乙酰胆碱调节钾通道阻断剂阿托品(10-5mol/L)预孵育 白藜芦醇组。②实验方法:不同类型的钾通道阻断剂均预孵育15min后,分别加入白藜芦醇(终浓度为5×10-5mol/L),连续记录30min,与相应动物白藜芦醇对照组相比较。③评估指标:分析不同阻断剂与白藜芦醇联用对心房收缩力下降率及心率抑制率的影响。结果:①白藜芦醇可降低豚鼠和小鼠离体心肌收缩力和心率(P<0.05),并被ATP敏感性钾通道阻断剂格列苯脲和钙激活钾通道阻断剂四乙胺部分阻断。②白藜芦醇可降低家兔离体心肌心率,格列苯脲可阻断白藜芦醇的负性变时作用。③电压依赖性钾通道阻断剂4-氨基吡啶、内向整流钾通道阻断剂氯化钡、乙酰胆碱调节钾通道阻断剂阿托品均不能阻断白藜芦醇对3种不同动物离体心房收缩力和心率的作用(P>0.05)。结论:白藜芦醇可呈剂量依赖性减慢豚鼠、小鼠和家兔的心率,白藜芦醇可减弱豚鼠心肌收缩力,其作用是与开放ATP敏感性钾通道有关,而与电压依赖性钾通道、内向整流钾通道和乙酰胆碱调节钾通道无关。同时,钙激活钾通道也参与了白藜芦醇对豚鼠和小鼠离体心房收缩力和/或心率的抑制作用。白藜芦醇对离体心肌收缩力和心率的作用有种属差异性。     

超声和微泡造影剂介导细胞基因转染的实验研究

目的 探讨低频超声对细胞基因转染的作用。方法 超声治疗仪频率1MHz，脉冲重复频率100Hz，占空系数20％。质粒DNA为含编码绿荧光蛋白的pEGFP。应用荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞基因转染率，台盼蓝染色计算细胞成活率。选用C2C12、3T3-MDEI和CHO3种细胞系为研究对象，加入DNA后辐照不同声强、时间或加入超声造影剂，观察各条件下的细胞基因转染率和成活率。结果 ①超声介导的基因转染与声强和辐射时间有关，最佳剂量为1w／cm^2 20s；②同样超声剂量，较高的声强较早达到最大基因转染率；③较低剂量时，微泡造影剂可使超声介导的基因转染提高2～3倍并可显著提高最高基因转染率。结论 低频超声可介导细胞基因转染，基因转染率不但与超声辐射剂量有关，而且同样剂量时，高声强较早达到最大基因转染率，最佳剂量是1w／cm^2 20s。同时，微泡造影剂可提高超声介导基因转染的最高转染率。     

无牙颌颞下颌关节紊乱病患者总义齿修复前后咬合垂直距离改变与髁状突在关节凹内位置的关系

目的:观察咬合垂直距离改变对无牙颌颞下颌关节紊乱病患者两侧颞颌关节髁状突位置的影响。方法:于1994-01/1997-12选择本院口腔修复门诊收治的无牙颌患者中符合颞下颌关节紊乱病诊断标准,同时垂直距离减低的患者48例。实验方案经医院伦理委员会审批,患者均知情同意。将48例无牙颌颞下颌关节紊乱病患者根据垂直距离减低程度的不同分为3组:减低1.8～6.0mm组18例,减低6.1～10.0mm组20例,减低10.1￣14.0mm组10例。通过重新制作一副全口义齿的方法治疗,咬合垂直距离恢复在合适的范围内,3组全口义齿的咬合垂直距离恢复前分别平均为63.4,60.6,54.2mm,恢复后咬合垂直距离分别平均为67.8,68.4,66.4mm,平均抬高4.4,7.8,12.2mm。通过拍摄正中颌位时颞下颌关节薛氏位X射线片测量各组前、后、上关节间隙。结果:垂直距离恢复前,减低1.8～6.0mm组关节后间隙,减低6.1～10.0mm组关节前、后间隙、减低10.1￣14.0mm组关节上、后间隙左右侧相比较,差异有显著性意义(P<0.05)。垂直距离恢复后,3组关节间隙左右侧差异无显著性意义。结论:无牙颌咬合垂直距离减低后可以导致两侧髁状突位置发生不对称改变。     

Participation of CD45, NKR-P1A and ANK61 antigen in rat hepatic NK cell (pit cell)mediated target cell cytotoxicity

AIM Several triggering receptors have been described to be involved in natural killer (NK) cellmediated target cytotoxicity. In these studies, NK cells derived from blood or spleen were used. Pit cells are liver-specific NK cells that possess a higher level of natural cytotoxicity and a different morphology when compared to blood NK cells. The aim of this study was to characterize the role of the NK-triggering molecules NKR-P1A, ANK61 antigen, and CD45 in pit cell-mediated killing of target cells. METHODS 51 Cr-release and DNA fragmentation were used to quantify target cell lysis and apoptosis, respectively. RESULTS Flow cytometric analysis showed that pit cells expressed CD45, NKR-P1A, and ANK61 antigen. Treatment of pit cells with monoclonal antibody ( mAb ) to CD45 ( ANK74 ) not only inhibited CC531s or YAC-1 target lysis but also apoptosis induced by pit cells. The mAbs to NKRP1A (3.2.3) and ANK61 antigen (ANK61) had no effect on pit cell-mediated CC531s or YAC-1 target cytolysis or apoptosis, while they did increase the Fcγ receptor positive (FcγR+) P815 cytolysis and apoptosis. This enhanced cytotoxicity could he inhibited by 3,4-dichloroisocoumarin, an inhibitor of granzymes. CONCLUSION These results indicate that CD45 participates in pit cell-mediated CC531s and YAC-1 target cytolysis and apoptosis. NKR-P1A and ANK61 antigen on pit cells function as activation structures against FcγR+ P815 cells, which was mediated by the perforin/granzyme pathway.