Phosphorylation of hepatitis C virus core protein by protein kinase A and protein kinase C

Hepatitis C virus (HCV) core protein can form capsid-like particles and is believed to be the viral capsid protein. Besides its structural functions, this protein is also known to possess multiple regulatory functions. In this article, we have studied the possible phosphorylation of HCV core protein in two different human liver-derived cell lines Huh7 and HepG2. Our results indicated that the HCV core protein could be phosphorylated, albeit inefficiently, independent of its downstream E1 protein in these two cell lines. Two of the basal phosphorylation sites were identified to be serine-53 and serine-116. The phosphorylation of the core protein could be enhanced by the PKC activator phorbol 12-myristic 13-acetate (PMA), and the PKA activator forskolin, and these enhancements could be abolished by the respective inhibitors of PKC and PKA, indicating that the core protein is a substrate of these two kinases. While both serine-53 and serine-116 served as the PKC phosphorylation sites, serine-116 appeared to be the major PKA phosphorylation site. Further analyses using serine-to-alanine mutation to mimic dephosphorylation and serine-to-aspartic acid mutation to mimic phosphorylation revealed that the conversion of serine-116 to aspartic acid led to an enhanced nuclear localization of the core protein. This observation indicates that one function of phosphorylation may be to regulate the nuclear localization of the core protein.     

长链非编码RNA在类风湿性关节炎患者和健康人PBMCs中差异表达及其发病机制

目的 探究长链非编码RNA(IncRNA)在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)和健康人PBMCs中的差异表达,并对其分析以进一步阐明RA的发病机制.方法 选取2016年1-4月在该院风湿免疫科就诊的RA患者22例作为观察组,22例健康人作为对照组.采用Agilent Human IncRNA芯片测定5例RA患者和5例健康人的PBMCs中的In-cRNA和mRNA的差异表达;利用GO以及Pathway分析检测出差异表达的IncRNA的功能分布,构建起IncRNA-mRNA的共表达网络,采用Trans-与Cis-预测其中与RA发病相关的IncRNA.结果 IncRNA在RA患者的PBMCs和健康人的PBMCs中共存在1 623条差异表达,mRNA差异表达则有851条.GO、Pathway分析表明,差异表达的mRNA的主要功能是参与蛋白激酶、核苷酸、金属离子的结合和转录调节,还参与B细胞受体信号通路、TNF信号通路的调节.经过Cis-和Trans-分析预测和Re-al-time PCR验证后找到3个IncRNA可能与RA发病有关,分别为NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501.结论 IncRNA在RA患者PBMCs和健康人PBMCs中存在差异表达,NONHSAT 120696、uc.80+、NONHSAT 031501 3个IncRNA可能与RA的发病有关.     

广东省9个城市性病门诊男性就诊者生殖道沙眼衣原体感染危险因素分析

目的 了解性病门诊男性就诊者生殖道沙眼衣原体（genital Chlamydia trachomatis,GCT）感染现状及危险因素,加强该人群GCT监测,为针对该人群开展干预工作提供依据。方法 2015年4-6月结合HIV监测哨点开展研究,选取性病门诊男性就诊者为调查对象,开展匿名问卷调查及检测。结果 本次共纳入就诊者1 749例,平均年龄（39.53±14.36）岁,多数为已婚（73.87%,1 292/1 749）、广东籍（92.28%,1 614/1 749）、汉族（99.49%,1 740/1 749）;GCT阳性率、HIV阳性率、梅毒阳性率、HCV阳性率、淋球菌阳性率、尿常规白细胞阳性率分别为6.06%（106/1 749）、0.46%（8/1 749）、3.43%（60/1 749）、0.45%（7/1 550）、2.74%（48/1 749）、7.89%（138/1 749）。多因素logistic分析显示,GCT感染相关危险因素包括注射吸毒（OR=13.98,95% CI：3.35～58.38）、与男性发生过肛交（OR=3.11,95% CI：1.45～6.71）、淋球菌阳性（OR=9.64,95% CI：5.09～18.24）、尿常规白细胞阳性（OR=1.96,95% CI：1.08～3.55）。结论 广东省性病门诊男性就诊者GCT感染率较高,该人群为性病艾滋病防控的高危人群,应针对不同地区的人群特点,实施精准干预。     

血清网膜素-1 与糖尿病周围神经病变的相关性

目的 探讨血清网膜素-1 与糖尿病周围神经病变（DPN）的相关性。方法 选取2016 年6 月— 2017 年10 月海南省第三人民医院收治的100 例2 型糖尿病患者,根据是否合并周围神经病变,将其分为 DPN 和无DPN 组,各50 例。另选取同期该院健康体检者50 例作为对照组。测量各组的体重、身高、腰围、 臀围,计算体重指数（BMI）及腰臀比（WHR）;检测空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（Fins）、糖化血红蛋白 （HbA1C）、24 h 尿白蛋白排泄率（24 hUAER）、胱抑素C（Cys-C）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密 度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）及血清网膜素-1 水平,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR） 和胰岛β 细胞功能指数（HOMA-β）。结果 各组BMI、WHR、TG、Fins、FPG、HOMA-IR、HbAlc、 血清网膜素-1、HDL-C 及HOMA-β 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,DPN 组和无DPN 组患者血 清网膜素-1 水平均低于对照组（P <0.05）,DPN 组患者血清网膜素-1 水平均低于无DPN 组（P <0.05）。 血清网膜素-1 水平与HOMA-β 呈正相关（r =0.496,P =0.000）,与病程、WHR、TG、Cys-C、FPG、 HbA1c 及24 hUAER 呈负相关（r =-0.323、-0.127、-0.173、-0.326、-0.449、-0.328 和-0.331,P =0.009、 0.013、0.035、0.000、0.000、0.000 和0.023）。Logistic 回归分析结果表明血清网膜素-1 是影响DPN 发生的 危险因素[Ol ^ R=1.011（95%CI ：1.003,1.019）,P =0.013]。结论 DPN 的发生、发展可能与血清网膜素-1 水 平降低有关。     

反义CD147分子对人胆管癌细胞株侵袭性影响的实验研究

目的探讨反义CD147分子对人胆管癌细胞株QBC939侵袭性的影响。方法构建含反义CD147分子片段的重组真核表达质粒,将人胆管癌细胞株QBC939分为三组:(1)反义CD147组,运用重组真核表达质粒as CD147-pc DNA3.1(-)转染QBC939细胞;(2)空质粒组,运用pc DNA3.1(-)空质粒转染QBC939细胞;(3)对照组,运用DMEM常规处理细胞。采用MTT法检测各组QBC939细胞的生长情况,RT-PCR和Western blotting法分别对三组QBC939细胞中的CD147、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的m RNA表达水平及其对应蛋白的表达水平进行检测。结果成功构建了携带反义CD147分子片段的重组真核表达质粒。MTT法检测显示:三组QBC939细胞的生长曲线及对数生长期情况无统计学差异(P0.05)。RT-PCR法检测显示:反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的m RNA表达均低于空质粒组和对照组(P0.05),且空质粒组与对照组相比无统计学差异(P0.05);反义CD147组QBC939细胞中MMP-9和TIMP-2分子的m RNA表达与空质粒组和对照组相比无统计学差异(P0.05)。Western blotting检测发现:与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的蛋白表达明显降低(P0.05),空质粒组与对照组相比无统计学差异(P0.05);与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞株中MMP-9和TIMP-2分子的蛋白表达无统计学差异(P0.05)。结论 (1)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939的生长无影响;(2)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939中MMP-9和TIMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达无影响;(3)反义CD147降低胆管癌细胞株QBC939中CD147和MMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达,可能会降低胆管癌细胞株的侵袭性。     

慢性病患者健康促进生活方式评价工具研究现状

对慢性病患者健康促进生活方式测量工具的研究现状进行综述,以期为研究者选择合适的慢性病患者健康促进生活方式测量工具提供参考。     

赶黄草木脂素及黄酮类成分抑制肝癌细胞增殖的作用

目的:研究赶黄草中木脂素类及黄酮类成分体外抑制肝癌细胞增殖的作用。方法:采用MTT法评价赶黄草中8个木脂素(1~8)和5个黄酮(9~13)体外抗人肝癌细胞SMMC-7721和Hep G2增殖的活性以及对正常肝细胞LO_2活力的影响。运用Image-i T DEAD Green/Hoechst 33342荧光双染和高内涵成像分析化合物1对SMMC-7721细胞的影响。结果:化合物1、6、8~11可抑制SMMC-7721的增殖,6、9、11、13可抑制Hep G2的增殖。除化合物11以外,以上化合物对正常肝细胞LO_2均无明显细胞毒作用,且化合物3、4、5、13还可促进LO_2增殖。结论:赶黄草中部分木脂素及黄酮类成分不仅具有抑制肝癌细胞增殖的作用,而且对正常肝细胞无毒作用,甚至可保护正常肝细胞,表现出较好的选择性。     

纤维粘连蛋白EDA片段抑制P53核转位调控肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨P53在纤维粘连蛋白EDA片段(fibronectin extra domain A,FN-EDA)调控结肠癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 基因集富集分析法分析结直肠癌基因芯片EDA高表达组(EDA_high)与EDA低表达组(EDA_low)基因富集情况;干扰结肠癌SW480细胞FN-EDA表达,流式细胞术检测各组凋亡,RT-PCR检测各组凋亡相关基因RNA水平,Western blot检测各组凋亡相关蛋白表达及P53蛋白磷酸化修饰,免疫荧光检测P53亚细胞分布,蛋白质免疫共沉淀检测P53与FN-EDA相互作用.结果 结肠癌FN-EDA低表达组凋亡相关基因(KEGG_APOPTOSIS)富集上调(P＜0.05);与对照组相比,FN-EDA敲低组凋亡率增加(P＜0.05),P53、BAX、P21、Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,P53蛋白Ser15、Ser37、Ser392磷酸化水平上调,核内转位增加.FN-EDA敲低组细胞转染FN-EDA过表达慢病毒后,凋亡率降低(P＜0.05),P53蛋白Ser15、Ser37磷酸化水平下调,核内转位减少;蛋白质免疫共沉淀检测发现P53与FN-EDA具有相互作用.结论 纤维粘连蛋白EDA片段通过与P53相互作用抑制P53磷酸化和核转位,调控P53-BAX通路抑制结肠癌SW480细胞凋亡.