应用差异凝胶电泳及质谱技术筛选肺癌患者血浆差异蛋白

目的 建立健康者、肺部炎症患者和肺癌患者的血浆蛋白表达谱,寻找与肺癌早期发生相关的差异蛋白.方法 应用差异凝胶电泳（DIGE）和基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对健康者、肺部炎症患者和I期肺癌患者血浆进行蛋白质组学比较研究,寻找肺癌相关差异蛋白.结果 应用DIGE进行分离后,成功获得了蛋白质组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱;Decyder 6.5软件分析获得差异大于2倍的蛋白质点共有72个;质谱鉴定去冗余后确定了12种蛋白质,其中7种与肿瘤相关,分别为酰基辅酶A合成酶家族成员3、抗血小板膜糖蛋白I b特异性抗体、γ-纤维蛋白原、4型血清淀粉样蛋白A、补体因子H、钙结合微丝蛋白、载脂蛋白I.结论 应用DIGE及MALDI-TOF-MS分离并初步鉴定了12种蛋白质,筛选出7种在肺癌患者血浆中高表达的肿瘤相关蛋白.     

中国某县既往有偿供血者HIV感染追踪监测

目的了解某县单采血浆供血者艾滋病病毒(HIV)感染状况。方法 (1)对某县全部人口进行逐户调查有偿供血者,采集血标本分离血清检测HIV抗体。(2)利用监测系统,开展动态监测,发现漏筛HIV感染者和AIDS病人;(3)采用快速蛋白印迹方法 (RWB)或酶联免疫吸附试验方法 (ELISA)初筛,阳性者用Western-blot确认。用套式聚合酶链反应(Nest-PCR)扩增产物并进行序列分析,对HIV型别和亚型进行鉴定。结果 1995-2009年,全县共发现有偿供血者HIV/AIDS病人226例,其中1995年3月有偿供血者中普查到HIV感染者111例,感染率为5.53%(111/2008),单采血浆供血者感染率为15.05%(79/525),既供全血又供血浆者感染率为8.06%(32/397),供全血者无感染者发现(0/1086)。1996-2009年追踪监测发现115例HIV感染者,发现的方式包括血液中心的HIV抗体筛查、VCT、医院就诊、孕妇筛查和术前检查等。结论在爆发初期,由于恐惧和歧视等原因,人们隐瞒了有偿供血史而被漏筛,经过15年的追踪监测,显现出了这起有偿供血者HIV/AIDS爆发的全貌。     

维生素E的研究进展

许多微量元素在体内主要是作为辅酶和底物发生作用,保护机体内生理活动的安全运行.维生素E是体内重要的抗氧化剂,它通过抗氧化作用保护DNA,同时还具有多种功能,现在就维生素E的功能研究综述如下.     

癌症靶向治疗的新趋势

靶向性是癌症治疗的关键所在,新的治疗方案必须在特异性作用于肿瘤的同时降低对正常细胞的损伤,目前已取得了许多成果:1)肿瘤的靶向基因-病毒治疗结合了基因治疗和病毒治疗的各自优势。所用的病毒载体具有特异性靶向肿瘤的作用并在肿瘤细胞中大量复制和高效表达抗癌基因,如果用2个特异性启动子严格控制病毒只在肿瘤中表达,并加上2个有协同效应的抗癌基因即可达到极好的抗癌效果。2)在抗体治疗方面,运用第1代腺病毒高效表达Her-ceptin或是Rituxan抗体基因已取得成功,它可以大大地降低目前昂贵的抗体治疗费用。3)RNA干扰技术可以沉默致病基因,选用质粒或是病毒做载体可以达到长期及高效的基因沉默效果。4)具有自我更新能力的肿瘤干细胞是肿瘤复发的关键。5)人们也逐渐意识到肿瘤的形成过程是癌细胞与基质细胞相互作用的结果,以肿瘤基质为靶标的药物也显示出了良好的效果。6)针对蛋白酪氨酸激酶或是抗凋亡蛋白而研制的小分子靶向药物也在肿瘤分子治疗上取得了成功。7)纳米技术正以其独特性而引起广泛关注。总之,在众多新型治疗方案研发的同时,我们必须认识到仅仅靠一种方法是难以成功根治肿瘤的,各种靶向治疗方案之间的相互结合将成为肿瘤治疗的主攻方向。     

糖肾1号方对气阴两虚型糖尿病肾病Ⅲ期患者影响的临床观察

目的观察糖肾1号方结合西医常规疗法治疗气阴两虚型Ⅲ期糖尿病肾病的临床疗效。方法将60例气阴两虚型Ⅲ期糖尿病肾病患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。两组均予西医常规疗法,治疗组在此基础上加服糖肾1号方。两组疗程均为3个月,观察临床疗效,比较中医证候积分及尿白蛋白排泄率(UAE)、血肌酐(Scr)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、纤维蛋白原降解产物(FDP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)等生化指标的变化情况。结果 (1)治疗组、对照组临床总有效率分别为86.67%、60.00%;组间临床疗效比较,治疗组明显优于对照组(P0.05)。(2)组间治疗前后中医证候积分差值比较,差异有统计学意义,治疗组中医证候积分改善程度比对照组更加显著(P0.05)。(3)组间治疗后比较,UAE、TG及FDP水平差异有统计学意义(P0.05)。结论糖肾1号方可改善气阴两虚型糖尿病肾病Ⅲ期患者的临床症状、降低尿微量白蛋白,其机制可能与调节脂质代谢、改善肾脏血流动力学有关。     

l-Caldesmon腺病毒的构建及其在ECV304细胞中的表达

目的 构建含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒表达载体.方法 以含有l-Caldesmon全长编码序列的pCGN-CaD为模板,PCR扩增l-Caldesmon, T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,得到含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.将收集的病毒液感染ECV304细胞,Western blot检测l-Caldesmon蛋白的表达.结果 成功构建了含有l-Caldesmon基因的重组腺病毒载体,病毒滴度可达1×10 9U /ml.重组病毒感染后可使ECV304细胞l-Caldesmon表达较对照组增加5倍.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究l-Caldesmon蛋白在内皮细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.     

黄芪甲苷通过促进小胶质细胞/巨噬细胞M2型极化抑制大鼠脑缺血后炎症反应

目的: 研究黄芪甲苷对大鼠脑缺血后小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化及炎症反应的影响。方法: 将48只大鼠随机分为手术对照组、模型对照组和黄芪甲苷组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型。黄芪甲苷组造模后即刻腹腔注射黄芪甲苷（40 mg/kg）,随后1次/d,连续给药3 d。各组术后第1、3天采用改良的神经损伤严重程度评分（mNSS）和角试验进行神经功能评价;术后第3天采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染料（TTC）染色检测脑梗死体积;实时逆转录PCR检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达,以及M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD206、精氨酸酶1（Arg-1）、类几丁质酶3样分子1/2（YM1/2）及抗炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达;免疫荧光双标记法检测脑缺血周边区CD16/32/Iba1和CD206/Iba1的表达。结果: 与模型对照组比较,黄芪甲苷组mNSS分值降低、右转次数减少（P < 0.05或P < 0.01）,脑梗死体积减小（P < 0.01）,M1型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD86、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达下调（均P < 0.01）,M2型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD206、Arg-1、YM1/2、IL-10和TGF-β的mRNA表达上调（均P < 0.01）,脑缺血区CD16/32⁺/Iba1⁺细胞数量减少（P < 0.05）,CD206⁺/Iba1⁺细胞数量增加（P < 0.01）。结论: 黄芪甲苷对大鼠脑缺血损伤有保护作用,可能与促进小胶质细胞/巨噬细胞从M1型向M2型转化、抑制炎症反应有关。     

通脉注射液抗缺血性脑血管疾病的实验研究

目的 研究通脉注射液治疗缺血性脑血管疾病的药理学基础.方法 采用去甲肾上腺素所致的脑血管阻力增加的麻醉猫及沙土鼠脑缺血再灌注损伤模型,了解其抗脑缺血的作用.结果 通脉注射液能明显促进再灌期EEG、电位幅度的恢复,并降低缺血区皮层细胞内钠、钙、水及脂质过氧化物的代谢物MDA的含量,对麻醉猫正常血压无影响,但可增加其脑血流量,同时降低脑血流阻力.延长小鼠常压缺氧的死亡时间和显著延缓注射异丙肾上腺素提高心肌耗氧量后小鼠缺氧的死亡时间.结论 通脉注射液有良好的抗脑缺血再灌注损伤所致的脑细胞内钠、钙潴留及抗脑水肿的药理作用.     

冠状动脉钙化积分相关临床因素分析

目的 评价冠状动脉(冠脉)钙化积分(CACS)的相关因素.方法 入选疑诊冠心病的患者141例,3个月内完成多层螺旋CT、脉搏波传导速度(PWV)、超声心动图及血生化检查,MDRD方程计算患者入院时估算肾小球滤过率(eGFR).根据冠脉钙化程度将病例分为3组:A组(CACS=0～10),B组(CACS=11～400),C组(CACS>400).结果 3组比较年龄、高血压病史、糖尿病史、二尖瓣钙化、主动脉瓣钙化、两侧臂踝指数低值、臂到踝的PWV高值、臂及踝平均动脉压高值、波形上升支时间高值差异均有统计学意义(P值均<0.05).多因素logistic回归分析显示:主动脉瓣钙化(P=0.000)、二尖瓣钙化(P=0.002)、波形上升支时间高值(P=0.009)和糖尿病(P=0.032)是严重冠脉钙化的独立相关因素.结论 疑诊冠心病的患者行多层螺旋CT检查前可行PWV和超声心动图检查,结合病史评估患者冠脉钙化的可能性及严重程度.     

缺血后处理对再灌注早期肝组织μ-calpain活性的影响

目的 探讨缺血后处理(IpostC)对缺血-再灌注(I/R)早期大鼠肝组织μ-calpain活性的影响. 方法实验分3组假手术组、I/R组和IpostC组.全自动生化分析仪测定血清ALT和AST活性;Western blot检测肝组织μ-calpain和talin蛋白表达; Annexin-V/PI双染流式细胞术检测肝细胞存活率. 结果与I/R组相比, IpostC组大鼠血清ALT和AST活性明显降低(P＜0.05),肝细胞存活率增加,早期凋亡细胞减少,μ-calpain表达降低而talin表达增高. 结论IpostC能够减轻I/R肝损伤,抑制再灌注早期肝细胞凋亡发生,其作用机制与抑制μ-calpain活性有关.