人心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及鉴定研究

目的 :探究一种简便易行的人心肌肌钙蛋白T(cTnT)的提纯方法并进行鉴定。　方法 :采用匀浆、离心、70℃加热、冰浴、饱和硫酸铵盐析、透析、DEAE 纤维素层析等方法提纯cTnT ,并进行鉴定和免疫活性检测。　结果 :1 0 0g心肌组织中获得cTnT 2 1 .35 6mg ,纯度最高达 91 .7%。　结论 :建立的方法能成功提取纯度较高 ,且具有免疫活性的人心肌cTnT ,为建立适用于临床的cTnT检测方法奠定基础     

肾综合征出血热特异性抗体的检测与中西医结合治疗的研究

目的探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)抗体的检测方法及更为有效的中西医结合治疗手段.方法559例HFRS患者血清同时采用免疫滴金法(colloidal gold immuno-dot assay,CGIDA)与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM),间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG).101例HFRS患者分组进行中西医结合治疗,治疗组50例用苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液,对照组51例用利巴韦林注射液联合甘利欣注射液,针对老年患者的临床特点,及早采用综合性防治措施.结果559例HFRS患者血清,以CGIDA法检测抗HFRS-IgM,阳性396例(70.8%);以CGIDA法检测抗HFRS-IgG,阳性489例(87.5%).治疗组与对照组用药后退热天数、主要症状和体征缓解天数相似(P＞0.05);肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.01);在越期方面,治疗组越休克期数明显高于对照组(P<0.01). 结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HFRS-IgM,CGIDA法敏感性差于ELISA法,但是无假阳性;检测抗HFRS-IgG,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法.苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液与利巴韦林注射液联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能.     

非小细胞肺癌转移预测指标的研究

目的 :研究非小细胞肺癌 (NSCLC)淋巴结和远处转移的预测指标 ,并建立Logistic回归模型。　 方法 :通过免疫组化、ELISA、酶谱电泳等方法 ,对NSCLC肿瘤病理标本、血清、尿液和骨髓等进行检查 ,并通过Logistic回归分析建立预测概率模型。　结果 :免疫组化指标肿瘤组织内微血管密度 (IMVD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)、白细胞分化抗原变异型 (CD4 4v6 )、基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )与NSCLC淋巴结转移危险有关 (P <0 .0 5 ) ,组织金属蛋白酶抑制物 (TIMP 2 )、上皮型钙粘素 (E cad)与NSCLC淋巴结转移危险下降有关 (P <0 .0 5 )。血清MMP 2、MMP 9,尿液MMP 2、MMP 9及骨髓上皮膜抗原 (EMA)阳性细胞与NSCLC远处转移危险有关 (P <0 .0 5 )。其中免疫组化指标CD4 4v6、IMVD、E cad及尿液MMP 2、骨髓EMA阳性细胞对NSCLC转移有显著回归效果而分别被选入概率模型 1和 2 ,其预测准确率分别为 81.1%和 72 .7%。　结论 :组织标本中CD4 4v6、IMVD、E cad以及尿液中MMP 2及骨髓EMA阳性细胞检查 ,可预测绝大多数NSCLC的淋巴结转移和远处转移状况 ,为NSCLC转移的早期诊断提供重要信息 ,有助于NSCLC的个体化治疗和改善预后     

基于多模态超声的颈动脉斑块致前循环卒中的风险分层研究

目的 探讨颈动脉斑块患者发生前循环缺血性卒中的临床及多模态超声(multimodal ultrasound, MMU)影响因素,构建基于超微血流成像技术(superb microvascular imaging, SMI)的风险分层预测模型。方法 回顾性分析颈动脉斑块患者683例,根据临床表现和多层螺旋电子计算机断层扫描(computed tomography, CT)/核磁共振扫描(magnetic resonance imaging, MRI),分为前循环卒中组(n=301)和非前循环卒中组(n=382)。收集患者颈动脉斑块的MMU特征、临床和实验室检查数据,采用多因素二元Logistic回归分析筛选出前循环缺血性卒中的影响因素。构建列线图风险预测模型,进行模型验证与风险分层。结果 前循环卒中组和非前循环卒中组年龄、体重指数(body mass index, BMI)、饮酒史、吸烟史、脑梗死既往史、高血压、糖尿病、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)、同型半胱氨酸(hom...     

毛细胞PMCA2在小鼠内耳Ca2+调节和听觉平衡中的作用

目的： 研究小鼠内耳毛细胞细胞膜Ca²⁺-ATP酶2型蛋白（PMCA2）在听觉平衡生理中的作用及意义。 方法：利用不同基因型小鼠PMCA2^-/-(突变纯合子)、PMCA2^+/-(杂合子)和PMCA2^+/+(野生型)为实验对象，采用听觉脑干反应(ABR)、畸变产物耳声发射(DPOAE)和耳蜗内电位(EP)检测等方法，分别检测不同基因型小鼠的内耳生理功能。结果：PMCA2^+/+野生型鼠的听力正常，ABR的短声(click)阈值为(13.75±11.08)dB SPL；EP均值为(91.3±11.0)mV。PMCA2^+/-杂合子小鼠听力低于同窝PMCA2^+/+野生型鼠，ABR的短声阈值为(63.89±12.90)dB SPL，与PMCA2^+/+小鼠比较差异显著(P<0.01)；PMCA2^+/-小鼠没有检测出DPOAE的高频区辐值，其EP均值为(80.7±9.0)mV。PMCA2^-/-小鼠的ABR在100 dB SPL无反应，表现出全聋和平衡功能失调，其EP均值为(56.6±13.0)mV；PMCA2^-/-小鼠没有检测出DPOAEs。结论：PMCA2是内耳毛细胞纤毛丛上的重要Ca²⁺转运通道，对维持内耳的Ca²⁺代谢和听觉平衡功能有重要作用。     

HBV感染人胎盘滋养层细胞机制的初步探讨

目的 采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化.方法 HBV体外感染人胎盘滋养层细胞.ELISA检测培养上清中HBsAg,PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBV DNA.HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA量(拷贝/ml).透射电镜观察滋养层细胞的超微结构.结果 感染组滋养层细胞培养上清中HBsAg在PBS清洗后12 h时A值为0.942,96 h时上升为1.264.PCR检测感染组细胞培养上清和感染组细胞HBV DNA均为阳性.PBS彻底清洗后0、12、36、60、84 h感染组细胞培养上清的HBV DNA分别为:＜103,3×104,6×105,5×105,3×105拷贝/ml.透射电镜观察到感染组滋养层细胞膜附近存在包涵素(Clathrin)形式的内吞小体形成,并且发现内吞小体内存在病毒颗粒样结构.在感染组细胞粗面内质网内发现HBsAg特异性的纤维丝状结构.结论 HBV可能经包涵素依赖的细胞内吞形式进入滋养层细胞,进而实现感染细胞或通过胞释作用将病毒排至细胞的对侧而实现穿越滋养层细胞屏障.     

建立不同民族永生细胞株质量控制方法的探讨

目的以建立普米族、独龙族和怒族永生细胞为基础,探讨EB病毒转化细胞、细胞培养、冻存、复苏以及支原体检测等建立永生细胞株的技术要点及质量检测方法.方法采用EB病毒转化技术建立3个民族永生细胞株;培养法和PCR法对细胞株进行支原体污染检测;染色体G显带及核型分析细胞株的遗传稳定性.结果成功建立了3个民族B淋巴细胞永生细胞株,转化率分别为98%、86%和76%.对已建株保存的3个民族的永生细胞进行复苏培养,复苏成活率为100%.支原体污染检测均为阴性.染色体计数和G带分析显示,细胞株经早期传代培养后,仍然保持二倍体特征,未发现染色体结构畸变.结论本研究中传代培养、细胞冻存、细胞复苏和支原体污染防范等一整套技术过程是满足建库要求的.同时为大规模永生细胞库的建立和进行相应的质量监测提供了科学的依据.另外,本研究还对一些影响转化的因素和可能的机理进行了探讨.     

内洋地黄素拮抗剂上调缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞膜钠泵亚基的表达

目的： 观察内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清对心肌缺血再灌注（MIR）损伤大鼠心肌组织内洋地黄素水平、钠泵活性、线粒体总钙浓度以及钠泵各亚基基因表达的影响，探讨内洋地黄素在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法: 将56只雄性SD大鼠随机分成7组，每组8只。假手术对照组（sham）：丝线穿过左冠状动脉前降支，但不结扎；缺血再灌注组（MIR）：结扎左冠状动脉前降支30 min，再灌注45 min；生理盐水组（NS）、维拉帕米组（Ver）、小剂量、中剂量、大剂量地高辛抗血清组（ADA）：于再灌注前5 min经股静脉分别注射生理盐水、维拉帕米5 mg·kg^-1、地高辛抗血清8.6 mg·kg^-1、 17.3 mg·kg^-1、34.5 mg·kg^-1，容积均为5 mL·kg^-1，5 min内注射完毕，其余同MIR模型组。再灌注结束后，立即取缺血区左室心肌检测心肌匀浆内洋地黄素水平、心肌细胞膜Na+ K+_ATP酶和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性、线粒体总钙浓度；分别采用RT-PCR及Western blotting方法和免疫组化方法检测心肌钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果: 心肌缺血再灌注损伤时，心肌组织内洋地黄素水平明显升高，心肌细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性显著下降，线粒体总钙浓度升高，钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基在mRNA及蛋白水平基因表达均明显下降；维拉帕米除具有降低线粒体总钙浓度外，对其它各项指标无明显影响。地高辛抗血清呈剂量依赖性地显著降低心肌组织内洋地黄素水平，恢复细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，降低线粒体总钙浓度，上调钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平的基因表达。结论: 心肌缺血再灌注促进机体内洋地黄素分泌增加，后者通过下调心肌细胞膜上的钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基基因表达抑制钠泵活性，进而抑制Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，导致线粒体内钙超载，介导心肌缺血再灌注损伤。内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清通过阻断内洋地黄素的生物学作用，上调钠泵各亚基的基因表达，发挥其抗心肌缺血再灌注损伤的作用。