枝化状聚乙二醇交联改善猪去细胞主动脉瓣的力学性能比较

Objective Branched polyethylene glycols (PEG) with different molecular weight were cross-linked to the porcine decellularized aortic valve (DAV) and the effects of PEG cross-linking on the mechanical properties were investigated. Methods A total of 25 porcine DAVs were randomly assigned into 5 groups: PEG3400, PEG8000, PEG12000, PEG20000 and control. The reactive time was 4 h at room temperature. The efficiency of crosslinking was calculated by measuring the residual thiol group. The mechanical properties were obtained by static tensile test. Results The efficiency of crosslinking was 92. 40% , 89. 88% , 87. 87% and 87. 46% in PEG3400, PEG8000, PEG12000, PEG20000 groups, respectively. As compared with other groups, the PEG3400 group had significantly greater increase in the crosslinking degree (P ＜ 0. 05). Tensile test showed the tensile strength of PEG12000 and PEG20000 groups was (3. 22 ±0.41) and (3. 19 ±0. 15) MPa, respectively, and significantly different from that in control group (P ＜ 0. 05). The tensile strength and young' s modulus had a positive correlation with the molecular weight of PEG. Conclusion Branched PEG with the molecular weight of 12 000 Da and 20 000 Dacan effectively crosslink to the porcine decellularized aortic valves and improve their mechanical behaviors, and has the potential to be used as the material of fabricating new hybrid scaffold of tissue engineering heart valves.     

不同nPCL/HA电纺纤维薄膜对人骨髓间充质干细胞黏附率的影响

目的：观察nPCL/HA电纺纤维取向薄膜材料对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）的黏附生长的影响,评价其作为组织工程支架材料的应用前景。方法：将体外诱导培养的人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）,经传代培养第5代的人骨髓间充质干细胞,以2×105的密度与不同nPCL/HA电纺纤维取向薄膜支架在培养板内共培养,同时以nPCL电纺纤维非取向薄膜材料作为对照,初步观察不同nPCL/HA支架材料与hBMSCs的复合培养情况,计算各材料的细胞黏附率。结果：hBMSCs与4种电纺薄膜支架材料均有良好的细胞相容性,细胞能在不同材料表面黏附生长。但是nPCL/80℃HA电纺纤维取向薄膜材料黏附率（45.6±3.2）%,明显高于nPCL/180℃HA电纺纤维取向薄膜材料黏附率（36.5±3.0）%。结论：80℃条件下合成的nPCL/HA电纺取向薄膜材料细胞黏附率较高,较适合作为支架材料应用于hBMSCs为种子细胞的组织工程构建。     

血红素加氧酶-1诱导性高表达保护异种移植胰岛功能的研究

目的 探讨通过钴原卟啉(cobalt protoporphyrin,CoPP)诱导供体胰岛血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)高表达对异种胰岛移植物的保护作用.方法 采用大鼠对小鼠胰岛移植模型,分为对照组、体内诱导组、体外诱导组、体内阻断组及体外阻断组5组,改良Gotoh法提取胰岛,移植于糖尿病模型小鼠的肾包膜下.比较各组受体移植后血糖维持正常时间,糖刺激试验检测胰岛功能,PCR和ELISA法分别检测移植物内和血清IL-10、TNF-α、IL-1β及INF-γ及其mRNA表达.分别以PCR和Western印迹法检测胰岛组织内HO-1mRNA及蛋白表达.病理学检查移植物淋巴细胞浸润情况.结果 对照组小鼠血糖维持正常时间为(9.33±1.37)d,与体内诱导组的(16.33±1.51)d及体外诱导组的(14.33±1.51)d相比差异有统计学意义(P<0.05),体内诱导组优于体外诱导组(P<0.05).受体阻断的两组血糖控制时间则与对照组相近,分别为:体内阻断组(9.67±1.03)d,体外阻断组(9.17±1.47)d.体内、外诱导组及对照组胰岛于低糖刺激下胰岛素分泌量差异无统计学意义(P>0.05),而高糖刺激下,体内诱导、体外诱导及对照组分别为:(187.68±19.93)、(137.22±11.73)及(91.25±12.64)μIU·ml~(-1)·10islets~(-1)·45 min~(-1),差异有统计学意义(P<0.05).移植后,接受经诱导处理的胰岛的两组小鼠血清IL-10含量[体内诱导(72.97±9.74)pg/ml、体外诱导(70.84±3.56)pg/ml]明显高于未处理组[(30.57±3.93)pg/ml]及阻断两组[体内阻断:(39.78±3.00)pg/ml、体外阻断:(35.42±4.30)pg/ml].两诱导组胰岛移植物的IL-10 mRNA表达强于对照及阻断两组.IFN-γ、TNF-α及IL-1β在各组间差异无统计学意义.体内、体外诱导两组HO-1mRNA、蛋白表达高于对照组,其中体内诱导组HO-1mRNA高于体外组,但两组HO-1蛋白表达相当.体内、外阻断组HO-1mRNA、蛋白表达与对照组相当.病理学检查示两诱导组移植物内淋巴细胞浸润少于对照及阻断两组. 结论 CoPP体内、外诱导He-1高表达可促进胰岛功能,延长移植物生存时间,体内诱导对异种移植胰岛保护效应强于体外诱导.     

黄芪甲苷预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨黄芪甲苷( astragalosideⅣ)预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将60只雄性C57BL/6小鼠分为4组,15只/组,A组:假手术对照组,B组:假手术黄芪甲苷组,C组:实验对照组,D组:黄芪甲苷实验组.黄芪甲苷组每只腹腔注射黄芪甲苷24 mg·kg-1·d-1,对照组每天腹腔注射等体积无菌生理盐水,共1周.建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型,复流24h后采集标本,测定血清中转氨酶ALT和AST水平,光镜下观察H＆E染色肝组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1β,IL-6,TNF-α的含量,采用Western blot 技术检测小鼠肝脏组织中核因子-κB (NF-κB)的表达.结果 黄芪甲苷实验组ALT及AST较实验对照组明显降低[AST:C组(4290±292) U/L vs.D组(2373±416) U/L,t=0.844;ALT:C组(4146 ±500) U/L vs.D组(2318 ±289) U/L,t =7.08,均P＜0.05],组织学损伤也明显减轻;ELISA 结果显示,黄芪甲苷预处理能明显降低外周IL-1β,IL-6,TNF-α的含量(IL-1 β:t 10.04;IL-6:t6.281;TNF-α:t =6.817;均P＜0.05).黄芪甲苷实验组肝脏组织中NF-κB表达量明显低于实验对照组.结论 黄芪甲苷预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用.     

经不同手术径路治疗胸中下段食管鳞癌的比较研究

目的比较经左胸与右胸手术径路治疗胸中下段食管鳞癌的疗效,探讨合理的胸中下段食管鳞癌手术径路。方法回顾性分析2004年1月到2007年12月间上海交通大学附属胸科医院行手术治疗的120例食管中下段鳞癌患者的临床资料．其中左胸径路和右胸径路各60例．比较两组患者手术切除率、淋巴结清扫情况、术后并发症发生率、复发情况以及生存率。结果左胸径路组和右胸径路组患者手术切除率分别为91．7％（55／60）和95．0％（57／60）,差异无统计学意义（P〉0.05）。左胸径路组平均每例淋巴结清扫数和转移淋巴结数分别为4．60枚和0．57枚,显著低于右胸径路组的8．32枚和1．33枚（均P〈0.01）。两组术后并发症发生率分别为26．7％（16／60）和31．7％（19／60）,差异无统计学意义（P〉0.05）。两组术后局部复发率分别为43．3％（26／60）和23．3％（14／60）．差异有统计学意义（P〈0.05）：但远处转移率的差异无统计学意义[68.3％（41／60）比56．7％（34／60）,P〉0.05]。左胸径路组术后5年生存率为21．7％,明显低于右胸径路组（36．7％,P〈0.05）。结论右胸径路与左胸径路对胸中下段食管鳞癌的手术切除率相似．但右胸径路更易于进行系统性的纵隔淋巴结清扫．有助于减少局部复发、提高长期生存。     

洁肤灵洗剂的质量控制及初步临床应用

目的:观察洁肤灵洗剂治疗妇女阴道炎的疗效.方法:437例病人被随机分成治疗组和对照组.238例为洁肤灵治疗组;199例为洁尔阴洗液对照组;两组进行用药比较.结果:治疗组总有效率为94.54%,对照组总有效率为94.47%.结论:治疗组疗效与对照组疗效无显著性差异(P＞0.05),两组疗效相当.     

利用IGF-1基因敲除鼠乳腺癌模型研究IGF-1对血管生成的影响

目的探讨在低血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平与正常IGF-1水平的小鼠乳腺癌模型中应用血管生长抑制剂——人参皂甙（GS）Rg3后，IGF-1对血管生成的影响。方法应用7，12-二甲基苯蒽（DMBA）诱导肝脏特异性IGF-1基因敲除鼠（IAD鼠）及对照鼠建立原发乳腺癌模型，应用GSRg3进行干预治疗，利用免疫组化法检测乳腺癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）和Ⅷ因子相关抗原（F8-RAg）表达水平，同时利用基因芯片技术检测小鼠乳腺癌及正常乳腺组织中相关基因的表达情况。结果LID鼠乳腺癌的发生率低于对照鼠（P〈0．05）；LID鼠乳腺癌组织中VEGF表达水平与微血管密度均低于对照组（P〈0．05）。LID鼠乳腺癌组织中IGF-1、成纤维细胞生长因子（FGF）1、肝细胞生长因子（HGF）和转化生长因子（TGF）-β1基因较对照组上调，成纤维细胞生长因子受体（FGFR）-2、血小板源性生长因子（PDGF）-A和PDGF-B基因较对照组下调；应用GSRg3后，LID鼠乳腺癌组织中VEGFa、表皮生长因子（EGF）、表皮生长因子受体（EGFR）、PDGF—A和FGFR-2基因较对照组上调，而IGF1和TGF-β1基因较对照组下调。结论IGF1促进小鼠乳腺癌的发生、发展，且与血管生长密切相关。血管生长抑制剂可能通过IGF-1及TGF-β1发挥抗肿瘤作用。     

膀胱肿瘤中EphA2 mRNA的表达及其生物学行为关系研究

目的研究受体酪氨酸激酶EphA2在膀胱肿瘤中的mRNA表达,并对其致癌机制加以初步探讨。方法应用实时荧光定量RT—PCR技术检测49例膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）、19例膀胱内翻性乳头状瘤（inverted papilloma of blader,IPB）和10例正常膀胱组织标本中EphA2mRNA的表达,并通过2△△CT方法分析相对基因表达的差异。结果相对于正常膀胱组织,EphA2mRNA在IPB和BUc中的表达量明显增加,分别平均上调约2．06（2．06&#177;0．84）倍和2．57（2．57&#177;0．97）倍;在IPB与BUC组间的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。EphA2tuRNA的表达与膀胱肿瘤临床分期（r=0．471,P=0．001）及病理分级（r=0．286,P=0．047）呈正相关,与BUC其它各临床病理特征之间没有相关性（P〉0．05）。结论EphA2过表达可能促成了IPB的癌性转化以及膀胱肿瘤的恶性进展,其核酸调控机制可能发生在膀胱肿瘤早期,甚或更有可能是在癌前病变进展期中起重要作用。     

雷帕霉素抑制大鼠移植肝胆管上皮细胞增殖作用的研究

目的探讨雷帕霉素对大鼠移植肝胆管上皮细胞增殖及其周围成纤维细胞活化的抑制作用。方法“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型,并随机分为供肝冷保存1h组、12h组、雷帕霉素组（冷保存12h组术后给予雷帕霉素）、对照组。分别于术后1、3、7、14d检测血清ALT、TB、ALP,免疫组化法检测各组胆管上皮细胞增殖率及肌纤维母细胞分布,并统计各组生存率。结果冷保存12h组术后生存率明显低于冷保存1h组（P=0.0174）,血清ALT〉200IU/L、ALP〉160IU/L、TB〉3.6μmol/L,持续高于冷保存1h组（ALT〈160IU/L、ALP〈200IU/L、TB〈3.6μmol/L）,各时相点胆管上皮细胞增殖率（7%,27.8%,23.1%,17.8%）显著高于冷保存1h组（2%,6%,2.6%,2.3%）和对照组（1.3%）。冷保存12h组术后7、14d可见胆管周围较多肌纤维母细胞聚集;雷帕霉素组术后2周生存率与冷保存12h组接近（P=0.89）,胆管上皮细胞增殖率（5.9%,15.8%,13.6%,11.4%）明显降低,胆管周围肌纤维母细胞分布较少。结论冷保存-再灌注直接损伤肝脏,诱导胆管上皮细胞增殖及肌纤维母细胞聚集,雷帕霉素明显抑制胆管上皮细胞增殖及肌纤维母细胞活化并对移植肝具有保护作用。     

9-硝基喜树碱及其脂质体对HepG2、L02细胞周期和凋亡作用的研究

目的 研究9-硝基喜树碱及其脂质体对人肝癌细胞株HepG2和人正常肝细胞L02细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 HepG2、L02细胞用含不同浓度9-硝基喜树碱及其脂质体的培养液孵育后,利用MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,WesternBlot验证周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达变化.结果 9-硝基喜树碱及其脂质体对两种细胞生长呈时间和剂量依赖性抑制.药物处理后S期和G2/M期细胞明显增多,浓度大于0.1 μmol/L时24 h后HepG2细胞完全阻滞于S期;0.1 μmol/L孵育72 h后,超过95%HepG2细胞阻滞于G2/M期.药物对细胞凋亡的诱导作用也呈明显的剂量和时间依赖关系.Western Blot显示:Bax、Caspase3表达增高,Cyclin A、Cdk2、Cyclin E、Bcl-2表达减低.与L02相比,HepG2细胞对药物更加敏感.结论 9-硝基喜树碱及其脂质体可以通过调控细胞周期和诱导凋亡有效抑制细胞生长,其对肿瘤细胞的抑制作用强于正常肝细胞.9-硝基喜树碱脂质体体外抗肿瘤效果略强于9-硝基喜树碱单体.

Abstract：

Objective To investigate the modulating effects and explore their mechanism of 9-nitrocamptothecin and its liposomes to induce apoptosis and inhibit cell cycle in HepG2 and L02 cell lines. Methods Cells were incubated with 9-nitrocamptothecin(9NC) or with 9-nitrocamptothecin liposomes for 24 h, 48 h and 72 h, then, the cell viability was measured via MTT assay; cell cycle and apoptosis was evaluated by flow cytometry after stained by PI and Annexin V-PE/7AAD. Additional, Western Blot was used to evaluate the expression of cell cycle and apoptosis related protein. Results Both cells viability were apparently inhibited by the 9-nitrocamptothecin and 9-nitrocamptothecin liposomes, the inhibitory effect showed a time-dependent and dose-dependent manner. Both S and G2/M phases arrest were observed after incubated with drugs. HepG2 cell was completely arrested in S phase when 9NC concentration over than 0. 1 μmol/L after incubation for 24 h, while more than 95% cells arrested in G2/M phase when 9NC concentration is 0. 1 μmol/L after incubation for 72 h. Apoptosis induction effect also showed a time-dependent and dose-dependent manner. Western Blot results showed the expression of Bax and Caspase-3 were upregulated while Cyclin A, Cdk2, Cyclin E and Bcl-2 were downregulated. More importantly, the compounds were more cytotoxic to the cancer cell lines than to the normal liver cell. Conclusions 9-nitrocamptothecin and 9-nitrocamptothecin liposomes can potently inhibit cell growth via regulation of cell cycle and induction of apoptosis, and this effect was preferentially in cancer cell. Inhibitory of 9-nitrocamptothecin liposomes was slightly better than the 9-nitrocamptothecin.