LC-QQQ-MS/MS分析苯磺酸氨氯地平中痕量苯磺酸酯类基因毒性杂质

摘要：目的 建立LC-QQQ-MS/MS分析测定苯磺酸氨氯地平中痕量苯磺酸酯类基因毒性杂质苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯的检测方法。方法 采用Agilent Zorbax SB-C18（3.0mm×100mm,1.8μm）色谱柱,以水（含 5mMol?L-1甲酸铵和0.1%甲酸）和甲醇（含5mMol?L-1甲酸铵和0.1%甲酸）为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL?min-1,电喷雾离子化（ESI）,正离子模式下MRM采集。结果 苯磺酸甲酯定量限为20 ng?mL-1,苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯定量限为1 ng·mL-1;方法精密度良好,保留时间和峰面积RSD%均小于5%（n=10）;苯磺酸甲酯在20~1000ng·mL-1,苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯在1~1000ng?mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系,r≥0.998;方法准确度良好,平均加标回收率（n=10）分别为99.77%、100.19%、94.21%和92.43%。5个不同厂家生产的苯磺酸氨氯地平中苯磺酸甲酯的含量均小于LOQ（8μg?g-1）,苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯的含量均小于LOQ（0.4μg?g-1）。结论 该方法可用于苯磺酸氨氯地平中痕量基因毒性杂质苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯和苯磺酸异丙酯含量的检测分析。     

奥氮平所致药物不良反应的发生率及相关影响因素研究

目的：调查奥氮平所致药物不良反应的发生情况,并探讨其影响因素,为预防和减少ADRs的发生提供科学依据。方法：选取厦门市精神卫生中心接受治疗的1691例精神障碍患者,监测治疗过程中奥氮平不良反应的发生情况,采取单因素和多因素分析方法,研究奥氮平不良反应发生的相关影响因素。结果：奥氮平不良反应发生率较高,为33.83%。多因素非条件 Logistic 回归分析发现有肝病史、服用高剂量药物 (＞10mg)是奥氮平所致ADRs发生的危险因素,OR值分别为1.837(95% CI:1.162~2.905)和4.841(95% CI:3.874~6.049)。结论：有肝病史及服用高剂量药物 (＞10mg)的精神疾病患者是奥氮平ADRs发生的高危人群。     

山奈酚对白假丝酵母生物被膜抑制作用的研究

目的 研究山奈酚抗白假丝酵母生物被膜的作用及其可能机制。方法 测定山奈酚对白假丝酵母处于形成过程中的生物被膜和成熟生物被膜代谢活性的影响;测定山奈酚对生物被膜基质产生水平的影响;显微镜下观察山奈酚对菌丝形成的抑制作用;水-烃两相分离法测定山奈酚对白假丝酵母细胞表面疏水性的影响;实时定量RT-PCR法测定山奈酚对生物被膜形成相关基因表达的影响。结果 山奈酚抑制白假丝酵母生物被膜形成,且呈剂量依赖性,同时具有抗成熟生物被膜作用,显著降低生物被膜基质含量;与对照组相比,山奈酚明显抑制白假丝酵母菌丝形成并降低其细胞表面疏水性;经山奈酚处理的白假丝酵母生物被膜形成相关基因BCR1、NRG1和TUP1的表达升高,同时HWP1、EFG1、CPH1、ALS1、ALS3和CSH1的表达下降。结论 山奈酚具有抗白假丝酵母生物被膜活性,其机制与抑制菌丝形成及降低其细胞表面疏水性相关。     

川芎嗪联合顺铂对老年肺癌病人基质细胞衍生因子?1、凋亡抑制蛋白因子与基质金属蛋白酶表达的影响

目的探究川芎嗪联合顺铂对老年病人(SDF?1)、凋亡抑制蛋白因子(Livin)、基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法选取 2016年 6月至 2018年 6月攀钢集团总医院密地院区收治的老年肺癌病人 140例,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组各 70例。对照组采用 NP化疗方案,观察组在对照组基础上联合使用川芎嗪。比较两组治疗效果、生活质量、 SDF? 1、Livin α、Livin β、MMP?2、MMP?9水平。结果两组治疗有效率比较,差异无统计学意义［32(45.7%)比 43(61.4%),χ2＝3.475,P＝0.062］;观察组生活质量评分高于对照组［(23.46±4.21)分比(14.19±3.32)分, t＝14.466,P＝0.000］;观察组 SDF?1、 Livinα、Livin β、MMP?2、MMP?9等均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组不良反应发生率低于对照组［40(57.1%)比 51(72.9%),χ2＝4.272,P＝0.039］。结论川芎嗪联合顺铂治疗老年肺癌病人能够降低肿瘤组织 SDF?1、Livin、 MMPs表达,提高临床疗效,有助于提高病人生活质量,降低不良反应的发生。     

白芍总苷胶囊联合注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白治疗幼年特发性关节炎 23例及对 T淋巴细胞免疫、Th1/Th2漂移及红细胞沉降率的影响

目的分析白芍总苷胶囊联合注射用重组人 Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白( rhTNFR:Fc,益赛普)治疗幼年特发性关节炎( JIA)病儿的临床效果及对 T淋巴细胞免疫、 Th1/Th2漂移及红细胞沉降率( ESR)水平的影响。方法选取 2015年 1月至 2018年 6月郑州儿童医院收治的 JIA病儿 46例,采用随机数字表法分为对照组与观察组每组 23例,对照组单用益赛普治疗,观察组加用白芍总苷胶囊治疗,比较两组疗效,采用幼年关节炎疾病活动性评分表( JADAS27)评定病儿临床症状及体征的改善,并测定病儿治疗前后外周血 T淋巴细胞免疫( CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、免疫球蛋白( IgA、IgG、IgM)、 Th1、Th2细胞比例、 Th1/Th2比值及红细胞沉降率、肿瘤坏死因子 ?α(TNF?α)水平的变化,统计治疗不良反应发生率。结果观察组总有效率 86.96%和对照组总有效率 65.22%比较,差异无统计学意义( P＞0.05);治疗前,两组 JADAS27各维度评分比较差异无统计学意义( P＞0.05),治疗后,观察组各维度评分降低幅度均高于对照组, JADAS27总分( 11.17±0.95)分低于对照组( 15.87±1.03)分(P＜0.05);治疗前,两组 T淋巴细胞免疫及实验室各指标比较差异无统计学意义( P＞0.05)治疗后,观察组 CD4+、CD8+、 CD4+/CD8+、Th2细胞比例高于对照组, IgA、IgG、IgM、Th1细胞比例、 Th1/Th2比值及红细胞沉降率、T,NF?α均低于对照组( P＜ 0.05);两组治疗期间均无严重不良反应发生( P＞0.05)。结论白芍总苷胶囊联合益赛普治疗 JIA疗效肯定,可改善病儿临床症状及体征,调节机体免疫,改善 Th1/Th2漂移,下调外周红细胞沉降率、 TNF?α水平。     

逆萎康含药血清调控AKT/GSK-3β/β-catenin通路抑制MC细胞的上皮间质转化

目的：逆萎康（NWK）含药血清对MC细胞（MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞系（GES-1）恶性转化）上皮间质转化（EMT）的影响及可能机制。方法：用不同浓度含药血清作用于MC细胞,采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、p-AKT Ser⁴⁷³、β-catenin、α-SMA、GSK-3β、p-GSK-3β Ser⁹、AKT蛋白的表达影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测C-myc基因的表达影响。结果：与空白组比较,蛋白质印迹实验表明,逆萎康含药血清、AKT抑制剂GSK690693（10 μmol·L^-1）使得β-catenin、p-AKT Ser⁴⁷³、E-cadherin和p-GSK-3β Ser⁹在蛋白水平的表达下调（P<0.05）,而α-SMA、N-cadherin和vimentin在蛋白水平上的表达上调（P<0.05）,但GSK-3β和AKT这两种蛋白的表达差异不显著;qRT-PCR结果证实逆萎康含药血清可以抑制C-myc mRNA（P<0.05）的表达,并且加入抑制剂后抑制作用增强,差异具有显著性。结论：逆萎康通过抑制AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的活化,抑制MC细胞的EMT过程。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中富马酸单甲酯药物浓度及应用

目的： 建立液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中富马酸单甲酯的方法,并应用于检测中国健康受试者血浆中富马酸单甲酯的浓度。方法： 血浆样品用醋酸铵稀释后经过96孔固相萃取板前处理,以含0.5%甲酸的水溶液和甲醇作为流动相,采用梯度洗脱方式在ACE Excel 3 C₁₈-AR（2.1 mm×50 mm）色谱柱上进行分离,每个样品分析时间为4 min。在电喷雾负电离模式下,多反应监测检测离子对m/z 129.0→m/z 85.0（富马酸单甲酯）和m/z 134.0→m/z 90.0（内标,富马酸单甲酯-d₅）。结果： 富马酸单甲酯线性范围为4~1 200 ng·mL^-1（r²>0.99）,定量下限为4 ng·mL^-1,日内和日间精密度RSD ≤ 9.7%,准确度相对偏差均在±4.2%以内,平均回收率RSD ≤ 6.6%,基质效应在98.3%~100.9%之间。稳定性实验中,各种储存条件不影响对药品浓度的准确测定。结论： 本方法运行时间短,灵敏度高,重复性好,适用于富马酸单甲酯血浆浓度定量检测。     

虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。