转基因细胞毒性T淋巴细胞的生物学特性及其对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

背景肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫受到抑制.增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)的活性是提高过继免疫治疗效果,促进肿瘤康复的有效途径之一.目的对转导肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的CTL的生物学特性及抗肿瘤活性进行研究,探讨细胞因子基因疗法和过继免疫治疗肿瘤的新途径.设计随机区组实验研究.地点和对象实验在广西医科大学医学实验中心完成.从人肝细胞癌组织中分离淋巴细胞,用BEL7407和IFN-r诱导得到CTL.BALB/c裸小鼠28只,雄性,4～6周龄,体质量18～20 g,购自北京医科大学实验动物科学部(SPF级,合格证书医动字第01-3048号)干预用重组反转录病毒载体介导对CTL进行TNF-α基因转导.于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射注射BEL7404,建立荷瘤裸鼠模型,28只裸鼠按体质量分为4组,每组7只.观察转基因CTL对肿瘤原位(右前肢腋窝)及异位(左前肢腋窝皮下)注射治疗效果,分别用生理盐水注射治疗作对照. 主要观察指标①检测TNF-α基因转导前后CTL的生长形态,增殖能力,TNF-α分泌量、细胞表型.②体外不同作用时间和效靶比浓度对BEL7404的杀伤效应.③各实验组的肿瘤生成时间,生长速度及肿瘤生成率.结果转基因CTL的生长形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似,但具有持续、高效表达TNF-α的能力,72 h表达量达410 ng/L.转基因CTL对BEL7404具有较高的体外杀伤作用,其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关.当效靶比达201时,杀伤活性接近100%.效靶比浓度为51和201时转基因CTL的杀伤活性高于CIL(q=7.965 8,4.189 7,P＜0.05).转基因CTL对荷瘤裸鼠肿瘤生长部位进行过继免疫后,移植瘤的生成延迟、生长减慢,成瘤率降低,与异位注射及生理盐水对照组相比差异有显著意义(P＜0.05).结论转基因CTL可持续表达的TNF-α,具有良好的抗肿瘤活性.转基因CTL构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞,对防治肿瘤转移和复发,促进肿瘤康复具有积极的意义.     

小儿坐骨神经注射性麻痹的肌电图观察

背景肌电图检测是确诊注射性坐骨神经损伤重要方法之一,但其早期异常表现,异常程度与病程的相关性及各项指标的差异比较尚缺乏深入研究.目的探讨注射性坐骨神经损伤的电生理特点.设计以诊断为依据临床观察分析.地点和对象104例南京医科大学附属脑科医院门诊确诊患儿,年龄4个月～14岁,病前均有明确臀部肌肉注射史,既往无其他神经肌肉疾病.干预应用丹迪Neuromatic 2000 M型肌电仪检测患儿的患肢肌电图.主要观察指标检测患儿的患肢腓总神经和胫神经/胫后神经的感觉传导速度(sensory conduction velocity,SCV)、运动传导速度(motor conduction velocity,MCV)、末端运动潜伏期(distal motor latency,dML)和末端复合肌肉动作电位波幅(distal compound muscle action potential amplitude,dCMAPA)、感觉神经动作电位波幅(sensory nerve action potential ampli-tude,SNAPA);同时检测坐骨神经支配肌的针极肌电图.结果肌注后2～7 d已可检出多项电生理异常.腓总神经支的神经传导速度(nerve conduction velocity,NCV)异常率(68.0%)明显高于胫神经支(43.5%)(x2=12.199,P＜0.005).腓总神经SCV,SNAPA和dML,dCMAPA异常程度与病程正相关(r=0.306 8,P＜0.005;r=0.296 3,P＜0.005;r=0.337 6,P＜0.001;r=0.215 7,P＜0.05).8个月以上病程患儿的SCV, SNAPA和dML异常程度明显增加(F=3.105,P＜0.05;F=4.095,P＜0.01;F=5.904,P＜0.01),较8个月内有显著差异.腓总神经NCV各项配对t检验发现运动纤维dML和dCMAPA异常程度重于感觉纤维SCV和SNAPA(t=2.070,P＜0.05;t=3.520,P＜0.001).结论化学药物对神经髓鞘传导功能有直接损伤.坐骨神经运动纤维的电生理异常早于且重于感觉纤维.腓总神经运动传导功能检测是本病早期诊断的重要依据.8个月以上病程的损伤神经恢复难度增加.     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白表达的影响

背景肌苷参与机体多方面的代谢过程并对缺血性脑损伤有一定的保护作用,但其机制尚需做进一步研究.目的研究大鼠缺血性脑损伤后巢蛋白(Nestin)基因表达的变化规律,探讨肌苷治疗中枢神经缺血性损伤的作用机制.设计随机对照的基础研究.地点和材料实验地点青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成.实验材料成年健康雌性SD大鼠68只,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型.随机分为治疗组和对照组,每组再随机分为缺血1.5 h再灌注2,6,12,24 h,2,3,7,14 d组(n=4),另外4只作假手术组.干预所有治疗均由作者亲自操作.治疗组大鼠于缺血1.5 h再灌注前给予空腹注射肌苷注射液100 mg/kg,2次/d.对照组大鼠同步注射相同剂量的生理盐水.所有大鼠置于同样的空间笼养.主要观察指标应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织NestinmRNA的表达.结果对照组缺血侧NestinmRNA表达皮质除2h以外、纹状体除2,6 h以外、室旁区除2,6 h,14 d以外各时间点均明显高于假手术组.治疗组NesfinmRNA表达较对照组于2,6 h,7,14d在皮质,14 d在纹状体有所降低,3 d在皮质、纹状体及室旁区均显著升高,7 d仅在纹状体、室旁区显著升高.结论肌苷可以促进大鼠脑缺血再灌注后Nestin mRNA的表达,从而达到神经组织结构和功能恢复的目的.     

大鼠脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因快速反应的特点

背景:目前关于c-jun和c-fos基因表达的重要性已逐渐被人们认识,而关于脑挫伤后两种基因表达的特点报道较少。目的:探讨脑挫裂伤后c-jun和c-fos基因表达的特点。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:原张家口医学院实验中心电镜室,成年Wistar大鼠45只,体质量200～310g。干预:将45只大鼠随机分为模型组、假手术组及正常对照组,正常组不做任何处理,假手术组开颅窗不进行打击,模型组大鼠以自由落体法复制脑挫伤模型,伤后30min,1,2,4,8,24,72h杀死大鼠取脑组织,石蜡切片,用PV6000免疫组织化学染色。主要观察指标:c-jun和c-fos基因蛋白表达的异同点。结果:正常对照组和假手术组c-fos无阳性表达,而c-jun呈弱阳性。模型组c-fos阳性神经元分布在伤灶周围区皮质1.0～2.0mm和同侧海马;c-jun阳性神经元在伤侧皮质和海马广泛分布,相邻脑片c-jun阳性细胞着色深,尤其在海马中c-jun阳性细胞密集而核深,72hc-fos基本上已无表达,而c-jun仍有较明显的阳性神经元。结论:脑挫伤后,同侧脑组织c-jun基因表达较c-fos更强烈、更广泛和表达时间更长。     

干扰素-γ对脐血造血干/祖细胞细胞周期蛋白D各亚型表达的影响

体外观察干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)对脐血造血干／祖细胞细胞周期蛋白D(cyclinD)不同亚型表达的影响，以探讨IFN-γ造血抑制的机制。用免疫磁珠阳性分选的方法分离脐带血CD34^ 细胞，并进行体外扩增；用甲基纤维素半固体培养方法，观察IFN-γ对脐血造血干／祖细胞CFU-GM形成的影响；用半定量RT-PCR检测IFN-γ对脐血造血干／祖细胞cyclinD不同亚型表达的影响。结果显示IFN-γ可以显著抑制脐血CFU-GM的形成，并可以从mRNA水平抑制cyclinD2和CyclinD3亚型的表达。由此得出结论，IFN-γ可以显著抑制cyclinD的表达，这可能是IFN-γ介导造血抑制的一种机制。     

电针足三里对大鼠脑肠肽含量的影响及神经免疫调控作用

背景针刺对红细胞免疫和T细胞亚群均有正向调节作用,但其机制尚未完全阐明.目的探讨免疫系统在针刺治疗相关疾病中的调控作用及可能的机制.设计随机对照实验研究.地点和对象实验地点解放军第四军医大学唐都医院消化内科实验室.将SD大鼠40只随机分成正常对照组、非经非穴组、免疫抑制组、足三里组、足三里+免疫抑制组(n=8).干预应用放射免疫法测定脑垂体和外周血P物质放免活性(ir-SP)和血管活性肠肽放免活性(ir-VIP)含量的变化;应用流式细胞仪技术,通过微量全血直接免疫荧光染色法测定外周血T细胞亚群以反映细胞免疫功能;应用红细胞C3b受体-酵母菌花环试验和红细胞-IC花环试验检测红细胞免疫功能.主要观察指标各组大鼠的ir-SP和ir-VIP含量;T细胞亚群和红细胞免疫功能的变化.结果足三里组大鼠外周血和脑垂体中P物质(substance P,SP)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)含量[外周血SP(591.83±142.59)pg/L,VIP(92.05±22.11)pg/L;脑垂体SP(47.00±9.12)pg/L,VIP(308.36±34.16)pg/L、T4(CD4+)细胞百分率[(65.55±8.42)%]、C3b受体花环率(RBC-C3bRR)[(15.88±2.99)%]、红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)[(12.14±1.22)%]明显高于正常对照组[(569.36±8,04)pg/L,(20.45±6.74)pg/L,(27.86±7.67)pg/L,(236.71±22.83)pg/L,(43.06±3.14)%,(8.63±2.13)%,(6.75±2.32)%](P均＜0.01);且CD4+与外周血和脑垂体中P物质、血管活性肠肽含量的变化(r=0.744,P＜0.05;r=0.738,P＜0.05;r=0.822,P＜0.05r=0.848,P＜0.05)、CD4+与C3b受体花环率(RBC-C3bRR)呈显著正相关(r=0.719,P＜0.05).免疫抑制组外周血和脑垂体中SP,VIP含量均下降,与正常对照组相比有统计学差异(P＜0.01),T4(CD4+)细胞百分率[(34.50±2.52)%]、C3b受体花环率(RBC-C3bRR)[(5.25±1.17)%]明显低于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论针刺治疗可以提高机体免疫力,其机制可能与相应脑肠肽合成和释放增多有关,通过这些免疫递质对神经-内分泌-免疫调节网络发挥作用.     

竹红菌乙素对视网膜和脉络膜光动力学治疗系统生物学效应的评定作用

背景:光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)治疗老年性黄斑变性(senilemaculardegeneration,SMD)的光敏剂苯并卟啉衍生物单酸A环(benzoporphyrinderivativemonoacidAring,BPD-MA)价格昂贵,在国内不能普及。评定国产光敏剂竹红菌乙素(hypocrellinB,HB)对视网膜和脉络膜光动力学治疗系统生物学效应,以探讨是否有价值进一步研究HB治疗SMD的前景。目的:建立视网膜和脉络膜光动力治疗的照射系统、光敏剂体外光敏性检测方法和体内观察光敏剂PDT疗效的方法。设计:开放性实验。地点、材料和干预:实验地点为解放军总医院激光科。建立照射系统:在裂隙灯显微镜开创激光窗口,使用光纤连接激光器和裂隙灯显微镜,使激光和裂隙灯照明同光路到达眼底,作为照射系统;通过四甲偶氮唑盐法检测光敏剂体外光敏性,和BPD-MA相比,初步判断其光敏性。以青紫蓝兔为实验对象,用光敏剂HB进行PDT治疗,通过眼底观察、荧光眼底造影、光镜和电镜检查照光部位的生物学效应,检测建立的实验系统的实用性和可靠性。主要观察指标:裂隙灯显微镜和激光器的耦合效率,光敏剂体外光敏性以及照光部位的生物学效应。结果:照射系统输出稳定,由激光器发出的功率和裂隙灯显微镜的激光窗口末端的输出的功率的耦合率为60%。国产HB体外光敏性和BPD-MA相似,HB     

红花注射液对原发性高血压患者血管内皮的保护作用

背景血管紧张素转换酶抑制剂和钙离子拮抗剂对原发性高血压内皮受损的保护作用的研究已很深入,传统祖国医药在这方面的研究愈发显示出其重要地位.目的观察红花注射液对原发性高血压血管内皮的保护作用.设计随机开放实验方法进行前瞻性病例对照/随访研究.地点、对象和干预在上海交通大学附属第六人民医院住院及门诊患者中,根据1999 WHO/ISH高血压指南和中国高血压防治指南的诊断标准,选取70例原发性高血压(2～3级,极高危)患者,随机分为红花注射液组24例,丹参注射液组23例,对照组23例.红花注射液组予红花注射液20 mL静脉滴注.丹参注射液组予丹参注射液20 mL静脉滴注.对照组只予常规降压药治疗.观察3组研究对象用药前后血管收缩因子、血管舒张因子的变化.主要观察指标3组患者用药2周前后血管收缩因子(内皮素、血栓素2)和血管舒张因子[一氧化氮、6-酮前列腺素-F1α(6-keton-prostaglandin F1α,6-Keto-PGF1α)]的变化.结果三组患者用药前血浆内皮素、一氧化氮、血栓素2、6-酮前列腺素-F1α(6-keton-prostaglandin F1α,6-Keto-PGF1α)的检测结果差异无显著性意义(P＞0.05).红花治疗组在治疗后内皮素明显下降,与对照组和丹参组有显著差别(P＜0.05);治疗后红花组与丹参组血栓素[(307.9±12.9),(275.5±10.9)ng/L]均比治疗前[(369.5±11.5),(344.9±9.9)ng/L]低(P＜0.05);治疗后红花组一氧化氮、6-Keto-PGF1α明显增加(P＜0.05).结论红花具有抑制血管内皮素和血栓素,提高血管内皮一氧化氮和前列环素作用,临床保护血管内皮功能疗效显著.     

电针对士的宁诱发大鼠脊髓背角c-fos基因表达的影响

背景大鼠皮下注射士的宁后电针解溪或昆仑穴,是否可诱发出脊髓跨节段的c-fos表达.目的通过电针对士的宁诱发大鼠脊髓背角c-fos基因表达情况,探讨针刺信息传递中脊髓兴奋性的作用.设计完全随机对照研究.单位南京中医药大学江苏省针灸学重点实验室.对象采用健康雄性Wistar大鼠,体质量200～230 g.随机分为空白对照组,假电针组,士的宁组,电针解溪组,士的宁解溪组,电针昆仑组和士的宁昆仑组等7组,每组8只.干预空白对照组不做任何处理;假电针组臀部皮下注射生理盐水(与士的宁等容量,下同)30 min后解溪穴插针不给电刺激;士的宁组臀部皮下注射士的宁(1.0 mg/kg,下同)30 min后解溪穴插针不给电刺激;电针解溪组注射生理盐水30 min后电针解溪穴;士的宁解溪组注射士的宁30 min后电针解溪穴;电针昆仑组注射生理盐水30 min后电针昆仑穴;士的宁昆仑组注射士的宁30 min后电针昆仑穴.主要观察指标各组大鼠不同脊髓节段背角的c-fos表达.结果皮下注射士的宁可在大鼠脊髓L5诱发中等量的c-fos表达,而皮下注射士的宁后电针解溪或昆仑穴,不仅可使脊髓L5的c-fos表达增强,同时在T12和C8节段也可诱发c-fos表达;其标记最密集的区域主要在背角的Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ层亦有少量分布.结论在脊髓兴奋性提高的条件下,针刺信息可能沿脊髓进行跨节段传递.提示脊髓兴奋性的改变可能是影响针刺信息传递的重要基础之一.     

放松疗法改善哮喘儿童的心身症状

背景放松疗法可减轻成人哮喘患者的不良情绪反应,降低哮喘发作次数,但缺乏对于哮喘儿童作用的评估数据.目的探讨放松疗法对学龄哮喘患儿的焦虑、抑郁和咳嗽、气喘等症状的影响.设计以诊断为依据,随机对照研究.单位中南大学湘雅二医院儿科和中南大学精神卫生研究所.对象2001-01/2004-01中山市博爱医院儿科就诊的1 438名哮喘患儿中筛选出符合标准578例,再随机抽取64例作为研究对象,随机分配到实验组31例,对照组33例.干预在两组药物治疗相同的基础上,实验组每晚睡前给予放松治疗,持续4周.治疗前后评估两组患儿的焦虑、抑郁症状,治疗期间评估哮喘症状、记录计算哮喘控制参数.主要观察指标焦虑和抑郁评分,日间和夜间哮喘症状记分、无哮喘症状的天数、哮喘发作与加重次数等指标.结果治疗前两组焦虑和抑郁症状评分无统计学差异(P＞0.05),两组患儿的焦虑和抑郁评分在治疗结束时均明显降低(P均＜0.01),但实验组较对照组下降更明显,差异具有统计学显著性(P均＜0.01).日间哮喘症状记分,夜间哮喘症状记分,无哮喘症状的天数比率,≥1次哮喘发作的比率,两组比较差异均有显著性意义(P＜0.05～0.01).结论放松疗法可以减轻学龄哮喘患儿的不良情绪反应,并改善多项哮喘控制参数,是一种较好的辅助治疗手段.