钙蛋白酶对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及纤维化模型的影响

【目的】 研究钙蛋白酶在血管紧张素ＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）诱导的心肌纤维化中的作用及作用机制。【方法】 原代培养ＳＤ大鼠心肌成纤维细胞（ＣＦ）,取传代２－４代细胞,,预先给予不同浓度ｃａｌｐａｉｎ抑制剂ＰＤ１５０６１６,观察对Ａｎｇ ＩＩ诱导致纤维化模型的影响。实验分为空白对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ）、模型组（Ａｎｇ ＩＩ）、低浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿５ μｍｏｌ／Ｌ）、高浓度给药组（Ａｎｇ ＩＩ＋ ＰＤ１５０６１６＿１０ μｍｏｌ／Ｌ）。Ｅｄｕ检测ＣＦ增殖,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测纤维化因子纤连蛋白（ＦＮ）、结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）、α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）蛋白表达,同时检测ｃａｌｐａｉｎ激活的下游产物Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ以及胞浆中ｐ－ＩκＢ与细胞核内Ｐ６５、ＮＦＡＴ４的蛋白水平变化。【结果】 ＰＤ１５０６１６显著抑制由Ａｎｇ ＩＩ诱导的ＣＦ增殖及ＦＮ、ＣＴＧＦ、α－ＳＭＡ等纤维化因子表达上调。Ａｎｇ ＩＩ显著提高Ｃｌｅａｖｅｄ α－Ｆｏｄｒｉｎ的表达,ＰＤ１５０６１６可阻断Ａｎｇ ＩＩ的作用,提示ｃａｌｐａｉｎ受Ａｎｇ ＩＩ激活,是Ａｎｇ ＩＩ作用的下游因子。ＰＤ１５０６１６可抑制Ａｎｇ ＩＩ引起的胞内ＩκＢ磷酸化和胞核中ｐ６５、ＮＦＡＴ４的表达上调,提示ｃａｌｐａｉｎ的作用与ＮＦ－κＢ 、ＮＦＡＴ４转位入核的信号通路相关。【结论】 ｃａｌｐａｉｎ在Ａｎｇ ＩＩ刺激诱导心肌纤维化过程中发挥重要作用,其机制可能与ＮＦ－κＢ和ＮＦＡＴ信号通路的激活有关。     

无痛胃镜下食管静脉曲张套扎术的安全性分析

【目的】 比较常规胃镜与无痛胃镜下食管静脉曲张套扎术的安全性。 【方法】 研究纳入２０４例接受食管静脉曲张套扎术的肝硬化患者,其中无痛胃镜组１３５人,常规胃镜组６９人;分别观察两组术前、术中及术后的心率、血压、血氧饱和度变化,以及术中不良反应以及完成手术所用的时间;同时评估手术者对术中内镜视野及操作的满意度。【结果】 无痛胃镜组患者术中与术后的心率、血压、血氧饱和度分别与术前比较无统计学差异;同时分别与常规胃镜治疗组比较,术中心率、血压、血氧饱和度与术前比较也无统计学差异。无痛内镜组的术中不良反应（５．９％）显著低于常规内镜组（２６．１％,Ｐ ＜ ０．０１）。内镜操作时视野评估显示无痛胃镜组的满意度明显高于常规胃镜组（Ｐ ＜ ０．０１）。无痛胃镜组的手术时间为（２８．３ ± ８．６ ）ｍｉｎ,显著低于常规胃镜治疗组的（４１．５ ± １１．８） ｍｉｎ （Ｐ ＜ ０．０１）。【结论】 无痛胃镜下食管静脉套扎术是安全的,不良反应低,术中视野清晰便于操作,易于患者接受。     

核苷（酸）类似物治疗慢性ＨＢＶ感染者至ＨＢＶ ＤＮＡ阴转后ＡＬＴ异常的因素分析

【目的】 探明慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者接受核苷（酸）类似物（ＮＡ）治疗至ＨＢＶ ＤＮＡ降至不可检测水平后,丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）仍然异常的高危因素。【方法】２００６年１月至２０１４年２月期间,回顾加前瞻性随访核苷（酸）类似物初始治疗至ＨＢＶ ＤＮＡ阴转（＜２０ ＩＵ／ｍＬ）后的慢性ＨＢＶ感染者（ｎ ＝ ３８８）,对比ＡＬＴ复常者（ｎ＝ ２９８）及异常者［ｎ ＝ ９０;定义为在每１ ～ ３个月的随访间隔中,连续２次以上ＡＬＴ ＞ ４０ Ｕ／Ｌ（男）或 ＞ ３５ Ｕ／Ｌ（女）］的临床特征,使用ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素回归分析ＡＬＴ异常的高危因素。【结果】总随访中位数为４２．０月。两组在人口学和病史数据（性别、年龄、乙肝／肝硬化／肝癌家族史、既往嗜酒史等）,基线特征（ＨＢｅＡｇ阳性率、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＨＢＶ ＤＮＡ水平等）,核苷（酸）类似物治疗方案构成比,治疗后的病毒学突破和优化治疗率、治疗中的肝癌发生率等,均无显著差异。但ＡＬＴ异常组体质指数［（２４．１ ± ３．５） ｖｓ． （２２．５ ± ３．２）ｋｇ／ｍ２, ｔ ＝ ４．１６５, Ｐ ＜ ０．００１］、基线肝硬化比例（４５．６％ ｖｓ． ２７．２％,Ｐ ＝０．００１）和ＨＢｅＡｇ转换率［５８．１％（２５／４３） ｖｓ． ３９．２％（４９／１２５）,Ｐ ＝ ０．０１６］高于ＡＬＴ复常组。Ｌｏｇｔｉｓｔｉｃ多因素回归分析发现：抗病毒基线时即诊断肝硬化（ＯＲ＝ ２．４７２,９５％ ＣＩ ＝ １．４２４－４．２９２,Ｐ ＝０．００１）、高体质量指数（ＯＲ ＝ １．１７０,９５％ ＣＩ ＝ １．０７７－１．２７１,Ｐ＜ ０．００１）和治疗１年时ＨＢＶ ＤＮＡ水平（ＯＲ ＝ １．７２７,９５％ ＣＩ ＝ １．０１７－２．９３３,Ｐ ＝ ０．０４３）是ＮＡ治疗至ＨＢＶ ＤＮＡ不可测后ＡＬＴ仍然异常的独立危险因素。【结论】治疗前有肝硬化,更高的体质指数和治疗１年时ＨＢＶ ＤＮＡ的对数水平是慢性ＨＢＶ感染者核苷（酸）类似物治疗至ＨＢＶ ＤＮＡ ＜ ２０ Ｕ／ｍＬ后,ＡＬＴ持续异常的独立危险因素。     

１１４ 例骨髓增生异常综合征的染色体核型与预后分析

摘 要： 【目的】 研究骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者的细胞遗传学之间的关系和临床意义。【方法】 采用直接法、短期培养法和ＲＨＧ显带技术制备染色体, 进行核型分析。【结果】 １１４例ＭＤＳ中４９例检出异常染色体核型,占４２．９８％,其中难治性贫血伴原始细胞增生异常（ＲＡＥＢ）－Ⅰ、Ⅱ型染色体核型异常所占比例较高。单纯数目异常核型改变＋８检出频率最高,随访６８例中有１４例转白血病,转化率为２０．５９％,核型异常者及ＩＰＳＳ评分高危组向白血病转化几率明显高于核型正常者及ＩＰＳＳ积分低危组（Ｐ ＜ ０．０５）。 【结论】 骨髓增生异常综合征的染色体核型异常,各亚型之间有较大的差异,细胞遗传学在ＭＤＳ 的诊断、病情发展和预后判断中有着至关重要的作用。     

ＮＡＮＯＧ基因在侧群表型干细胞样肝癌细胞中的表达及意义

摘要：【目的】基于侧群（ＳＰ）细胞分选方法,从肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞,观察干细胞标记物ＮＡＮＯＧ基因在该ＳＰ表型肝癌细胞中的表达。【方法】采用流式细胞术检测和分选肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中的ＳＰ细胞和非侧群（ＮＳＰ）细胞,细胞生长曲线法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的增殖能力,Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞的侵袭能力,ＭＴＴ法检测ＳＰ和ＮＳＰ细胞对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）和阿霉素（ＤＯＸ）的药物敏感性;Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ和ＷＢ检测ＳＰ与ＮＳＰ细胞中ＮＡＮＯＧ基因的表达。【结果】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞比例分别为（５．３±０．８）％和（１３．４９±１．０）％。生长曲线表明Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞的增殖速度快于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,体外侵袭实验结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ的ＳＰ细胞体外侵袭能力高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）,ＭＴＴ结果显示Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞对５－ＦＵ和ＤＯＸ有耐药性,高于ＮＳＰ细胞（Ｐ＜０．０５）。Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３ＢＳＰ细胞ＮＡＮＯＧｍＲＮＡ平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的４．１７和５．５１倍（Ｐ＜０．０５）,ＮＡＮＯＧ蛋白平均表达水平分别是ＮＳＰ细胞的３．７８和５．０１倍（Ｐ＜０．０５）。【结论】肝癌细胞Ｈｕｈ７和Ｈｅｐ３Ｂ中分选的ＳＰ细胞符合肿瘤干细胞的部分生物学特征,ＮＡＮＯＧ基因在ＳＰ表型干细胞样肝癌细胞中高表达。