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目的 观察特应性皮炎（AD）患者外周血T淋巴细胞中Rho激酶活化情况,分析其临床意义。方法 收集60例AD患者和60例健康儿童外周肝素抗凝血8 ml,分离提取T细胞和血清。分别用AD血清和健康对照血清培养AD患者T细胞或健康对照T细胞,分为患者T细胞 + 自身血清组、患者T细胞 + 健康对照血清组、健康对照T细胞 + 自身血清组、健康对照T细胞 + AD血清组。此外,分别用Rho激酶特异性抑制剂Y27632（Y27632组）、CD3/CD28单抗（CD3/CD28单抗组）、Y27632 + CD3/CD28单抗（Y27632 + CD3/CD28单抗组）处理AD患者T细胞,自身血清培养AD患者T细胞为患者T细胞组。采用Western印迹法检测各组Rho激酶活性,四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测T细胞增殖活性,ELISA检测白细胞介素（IL）6、IL-10水平。 结果 新鲜分离的AD患者外周血T细胞Rho激酶活性（2.47% ± 0.89%）显著高于健康对照组（0.65% ± 0.35%,t = 2.729,P < 0.05）。AD患者T细胞在体外经10%胎牛血清培养24 h后Rho激酶活性（0.70% ± 0.38%）较培养前显著降低（t = 2.658,P < 0.05）,但与培养24 h后健康对照T细胞（0.63% ± 0.32%）相比,差异无统计学意义（t = 1.010,P > 0.05）。与健康对照血清培养T细胞相比,AD血清培养T细胞会增加Rho激酶活性（F = 8.22,P < 0.001）,患者T细胞 + 自身血清培养24 h后Rho激酶活性（2.41% ± 0.87%）明显高于患者T细胞 + 健康对照血清组（0.76% ± 0.41%）,健康对照T细胞 + AD血清组（2.17% ± 0.85%）显著高于健康对照T细胞 + 自身血清组（0.64% ± 0.33%）,差异均有统计学意义（P < 0.05）。Y27632可显著抑制AD患者T细胞的增殖和IL-6的分泌（F = 18.68、22.95,P < 0.001）,Y27632组T细胞增殖率、IL-6的表达均显著低于患者T细胞组（均P < 0.05）,且Y27632 + CD3/CD28单抗组也显著低于CD3/CD28单抗组（均P < 0.05）,而Y27632对AD患者T细胞IL-10分泌无显著影响。 结论 AD患者T淋巴细胞存在Rho激酶信号活化异常,提示Rho激酶信号异常在AD发病过程中可能发挥着一定的作用。 相似文献
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目的 研究miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,探讨miRNA-146a在寻常性银屑病发病中的作用。 方法 收集寻常性银屑病患者和健康对照各30例。采用实时定量PCR检测外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a表达水平,ELISA检测血浆干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-4表达水平。免疫磁珠法分选外周血CD4+ T淋巴细胞,将分离的细胞分为对照组、miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组,分别转染阴性对照miRNA、miRNA-146a模拟物和miRNA-146a抑制物后进行细胞培养,流式细胞仪检测Th1和Th2细胞数量,蛋白免疫印迹法和实时定量PCR分别检测IFN-γ受体α（IFN-γRα）、T细胞表达T盒（T-bet）、GATA-3蛋白和mRNA的表达,ELISA检测细胞培养液上清液IFN-γ、IL-4水平。 结果 寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a［（243.81 ± 94.32）％］与血浆IFN-γ水平［（27.69 ± 7.64） ng/L］较健康对照组［分别为（105.74 ± 22.93）％和（9.75 ± 2.81） ng/L］升高,差异均有统计学意义（t值分别为6.653和4.237,均P < 0.01）,且miRNA-146a的表达与血清IFN-γ呈正相关（r = 0.837,P < 0.01）。体外CD4+ T淋巴细胞培养结果显示,与对照组比较,miRNA-146a组Th1数量、T-bet蛋白和mRNA表达、培养上清液IFN-γ水平均显著增加,IFN-γRα蛋白表达降低,差异均有统计学意义（均P < 0.01）;但是,与对照组比较,miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组Th2细胞数量、GATA-3蛋白、GATA-3 mRNA表达以及上清液中IL-4水平差异无统计学意义（均P > 0.05）。结论 miRNA-146a可能通过影响Th1细胞的分化和功能参与对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,在银屑病发病过程中发挥一定的作用。 相似文献