人巨细胞病毒UL143基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的 探讨人巨细胞病毒(human eytomegalovirus,HCMV)UL143序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法 对19株HCMV临床低传代分离株进行HCMV-UL143 PCR扩增分析及伞序列测定分析.结果 19株HCMV感染患儿临床分离株均因碱基插入造成移码突变,开放阅读框架(ORF)比Toledo株短.根据序列变异情况可将19个序列分为2组,第1组16个序列新增一个MYRISTYL位点;缺失2个PKC磷酸化位点.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论 HCMV-UL143较多存在于临床低传代分离株中,序列呈现一定多态性.     

1,2-二氯乙烷的神经毒性

近年的病例报道显示,1,2-二氯乙烷对工人神经系统的危害严重,但目前尚缺乏系统的研究资料。本文对1,2-二氯乙烷神经毒性作用机制方面的研究进展进行了总结。     

组胺H1 受体在新生大鼠离体延髓脑片呼吸神经元电活动中的作用

目的探讨组胺H1受体对新生大鼠延髓脑片吸气神经元放电的调制作用。方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,保留舌下神经根,使用改良Kreb's液(MKS)灌流延髓脑片。用吸附电极记录到舌下神经根呼吸相关节律性放电活动(RRDA)后,以细胞外记录方式在面神经后核内侧区同步记录吸气神经元放电活动。稳定记录吸气神经元放电20min后,用5μmol/L组胺灌流延髓脑片20min;使用空白MKS冲洗至RRDA和吸气神经元放电基本恢复后;再用含组胺H1受体特异拮抗剂10μmol/Lpyrilamine的MKS灌流脑片。观察组胺和pyrilamine对吸气神经元放电的呼吸周期(RC)、吸气时程(TI)、呼气时程(TE)、放电积分幅度(IA)和单位放电的峰频率(PF)等指标的作用。结果给予组胺后,吸气神经元放电的RC缩短25.86%、TE缩短27.03%,TI、IA和PF无变化;使用pyrilamine后RC延长21.46%、TE延长22.15%,TI,IA和PF无变化。结论组胺H1受体参与调节新生大鼠离体延髓脑片吸气神经元放电活动。激活H1受体对吸气神经元放电有兴奋作用。     

黄疸婴儿人巨细胞病毒的检测

目的: 探讨黄疸婴儿HCMV感染的诊断.方法:FQ-PCR检测248例黄疸婴儿和50例对照组患儿尿液中HCMV DNA, 化学发光免疫分析法(CLIA)检测黄疸婴儿血清HCMV IgM抗体, 在尿液HCMV DNA阳性黄疸婴儿中, 比较血清HCMV IgM抗体阳性与阴性组HCMV DNA拷贝数的差异.结果: 黄疸婴儿尿液HCMV DNA的阳性率为41.5%, 对照组患儿阳性率为2.0%, 两者有统计学意义(P<0.01). CLIA检测黄疸婴儿血清HCMV IgM抗体的阳性率为19.8%. 在尿液HCMV DNA检测阳性的黄疸患婴儿中, IgM抗体阳性组的尿液HCMV DNA拷贝数显著高于阴性组(t = 5.51, P<0.01).结论:FQ-PCR检测尿液HCMV DNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法.     

人巨细胞病毒UL149蛋白结合多肽的氨基酸序列分析

目的 初步确定与UL149蛋白具有较强结合能力的多肽,并对这些多肽氨基酸序列的特点进行分析.方法 应用随机多肽文库分别筛选与UL1493种不同基因型克隆表达的UL149蛋白结合的克隆,并测序,对相应的多肽氨基酸序列进行同源性比较,并与蛋白数据库中已知的蛋白序列进行比较.结果 与3种不同基因型的UL149蛋白结合的多肽序列之间具有较高的同源性,氨基酸序列中存在较为集中的区域,即W/A/F/V-D/E-D/E-G-W/F/I/L.与已知人类蛋白数据库进行比较,发现与人免疫球蛋白重链可变区关系密切,并与SH3、WD结构域、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、补体因子H、锌脂蛋白、MHC Ⅰ类分子、真核细胞转录起始因子、核因子NF等存在结合关系.结论 人巨细胞病毒UL149蛋白可能通过多条途径来干扰机体对人巨细胞病毒的免疫应答反应.     

RNAi干扰Twist基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖与侵袭力及E-钙黏蛋白甲基化的影响

目的探讨RNAi干扰Twist基因对喉鳞状细胞癌Hep 2细胞株增殖、侵袭力及E 钙黏蛋白甲基化的影响。方法培养人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞株，分别转染siRNA Twist（siRNA Twist组）、阳性对照siRNA GAPDH（阳性对照组）和阴性对照错义链（阴性对照组），利用实时荧光定量PCR技术检测各转染组细胞中Twist和E cad基因表达，Western blot法检测各转染组细胞中Twist和E cad蛋白表达，MTT比色法检测各转染组细胞增殖情况，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）检测不同转染组细胞中E cad甲基化表达。结果siRNA Twist组细胞中Twist mRNA和Twist蛋白表达量均低于阳性对照组和阴性对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；siRNA Twist组细胞中E cad mRNA和E cad蛋白表达量均高于阳性对照组和阴性对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；与阳性对照组和阴性对照组相比，siRNA Twist组细胞转染48 h～96 h时细胞增殖能力明显减弱，差异均具有统计学意义（P<0.05）；siRNA Twist组细胞迁移细胞数和侵袭细胞数均低于阳性对照组和阴性对照组，差异均具有统计学意义（P<0.05）；MSP 检测结果显示，siRNA Twist组细胞中E cad甲基化扩增条带呈弱阳性，表达强度显著低于阳性对照组和阴性对照组，而非甲基化扩增条带呈阳性。结论特异性抑制Twist基因表达可能通过影响E cad甲基化而上调E cad表达，从而抑制细胞增殖及侵袭能力，有望为喉鳞状细胞癌基因治疗提供新的靶点。     

暴发性心肌炎并两次心跳呼吸骤停抢救成功一例

患儿 ,女 ,2 2个月 ,因呼吸急促伴发绀 8ｈ入院 ,既往健康。入院查体 :Ｔ 38 5℃ ,Ｐ 180次 /ｍｉｎ ,Ｒ 12 0次 /ｍｉｎ ,ＢＰ 8/ 6ｋＰａ ,ＳａＯ2 70 %,双肺听诊散在干鸣 ,右肺背部管状呼吸音 ,心音极低钝 ,律整 ,无杂音 ,肝肋下 5 0ｃｍ ,质Ⅱ度硬。辅助检查 :血气 :ｐＨ     

人巨细胞病毒UL138～142基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的　研究人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus ,HCMV)UL138～UL14 2基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染致病性之间的关系。方法　对经荧光定量PCR方法检测HCMV DNA为阳性的临床分离株进行UL138～UL14 2基因全序列PCR扩增 ,对扩增阳性的标本进行全序列的测序及结果分析。结果　HCMV临床分离株的UL138、UL14 2ORF(openreadingframe)高度保守 ;UL139ORF呈现高度多态性 ,可被明确划分为 3个基因型 ,且核苷酸及氨基酸的变异主要集中在序列的 5′端 ;所有临床分离株的UL14 0ORF在Toledo株第 174位核苷酸处插入 1个胞嘧啶核苷酸 ,其ORF较Toledo株增加了 2 31个核苷酸 ;所有临床分离株的UL14 1ORF在Toledo株第 2 2 7位核苷酸处缺失了 1个胸腺嘧啶核苷酸 ,故形成UL14 1a及UL14 1b 2个新的ORF。HCMV临床分离株的UL14 0蛋白较Toledo株新增了ScAMP磷酸化和酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点 ,其它基因编码蛋白的重要功能区域相对保守。结论　HCMV临床分离株UL139ORF的 5′端呈现高度多态性 ,而且被明确地分成 3个基因型 ,故其可能在HCMV先天感染的致病性差异方面起一定作用 ;尚未发现UL138～UL14 2中某个特定基因与HCMV先天感染致病性有本质联系     

人巨细胞病毒UL143基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的 探讨人巨细胞病毒(human eytomegalovirus,HCMV)UL143序列在临床患儿低传代分离株中的多态性及其与临床疾病的关系.方法 对19株HCMV临床低传代分离株进行HCMV-UL143 PCR扩增分析及伞序列测定分析.结果 19株HCMV感染患儿临床分离株均因碱基插入造成移码突变,开放阅读框架(ORF)比Toledo株短.根据序列变异情况可将19个序列分为2组,第1组16个序列新增一个MYRISTYL位点;缺失2个PKC磷酸化位点.未发现黄疸、小头畸形、先天性巨结肠等不同疾病类型的序列之间的差异.结论 HCMV-UL143较多存在于临床低传代分离株中,序列呈现一定多态性.