NT4-p53（N37）-HA2-TAT融合基因的克隆和鉴定

目的 构建NT4-p53(N37)-HA2-TAT融合基因表达盒并进行序列分析. 方法 应用互补引物二次PCR技术及T载体克隆法克隆p53(N37)基因,筛选阳性克隆、酶切鉴定并测序.扩增阳性重组质粒后用限制性内切酶切取p53(N37)和HA2-TAT片段连入pUC19/NT4质粒. 结果 克隆了p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;重组质粒pUC19/NT4-p53(N37)-HA2-TAT经限制性内切酶及琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果显示酶切片段大小和理论值完全一致. 结论 通过基因克隆体外重组技术成功制备了含有NT4-p53(N37)-HA2-TAT表达盒的pUC/19质粒,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础.     

短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达

目的：探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-site APP cleaving enzyme，BACE）的短干扰RNA（short interfering RNAs，siRNA）是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达，为阿尔茨海默病（AD）的治疗提供新的手段。方法：采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白（EGFP）、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA（siBACE），随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN，通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE进行鉴定；制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株，用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果：成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论：成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN／EGFP-U6-siBACE，并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达，为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。     

先天性肛门闭锁伴结肠易位一例报告

<正> 先天性消化管畸形中最多见的是肛门闭锁。高位和中位肛门闭锁常伴有肠道泌尿生殖道瘘,其中少数病人同时伴有短结肠畸形和膀胱外翻,被称为“内脏外翻”或“先天性肛门闭锁伴发短结肠畸形”。先天性肛门闭锁伴发结肠易位未见报告,近来我们遇到一例,报告如下:病历摘要吕××,男,64岁,退休工人,因肝硬变,腹水于     

药品不良反应伤害分级的初步研究

目的 设计药品不良反应（ADR）伤害的量化分级标准和分级方法,为构建ADR补偿体系提供参考依据。方法 在借鉴我国其他伤害事故分级的基础上,选取上海市范围内的27位医药卫生专家,通过两轮专家咨询,对不同器官和不同层级的ADR伤害进行独立评分和序化分级。结果 ADR伤害由重到轻初步分为1～10级,1级为死亡,10级为最轻微伤害。结论 以ADR伤害的特点为基础的量化分级方法基本符合我国现有国情,可以作为ADR补偿救济制度鉴定标准的参考。     

miR-200a在妊娠期糖尿病中的表达及意义

目的 探讨miR-200a在妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血及胎盘中的表达及临床意义.方法 收集35例GDM患者及35例同期分娩的正常产妇的外周血及胎盘组织,qRT-PCR检测miR-200a在GDM患者外周血及胎盘中的表达,分析miR-200a表达与患者临床参数的关系及新生儿预后的关系.结果 miR-200a在35例GDM患者外周血及胎盘中的表达均高于同时期分娩的正常产妇(P<0.05),而miR-200a在GDM患者外周血及胎盘中的表达差异无统计学意义(P>0.05),并且miR-200a高表达与GDM产妇分娩的新生儿病理性黄疸发生密切相关.结论 miR-200a可能可作为GDM孕妇胎儿预后的血清学标记物.     

根管治疗术后磨牙行高嵌体或全冠对患牙的保护作用比较

目的比较根管治疗术后磨牙行高嵌体或者全冠对患牙的保护作用。方法将2016年1月～2018年1月间我院接收初次开展根管治疗且仅有一个患牙的磨牙患者共60例进行研究,根据数字表法随机分成两组,每组30例(30颗患牙),对照组开展全冠修复,观察组开展高嵌体修复,两组治疗后1周与1年分别进行随访,观察两组的牙周组织健康、美观及牙齿保存成功情况。结果治疗后1周,两组在牙周组织健康和美观方面差异不显著(P0.05)。治疗后1年,两组在美观和牙齿保存成功方面差异不显著(P0.05);观察组在牙周组织健康方面比对照组更优(P0.05)。结论在根管治疗后对磨牙开展高嵌体修复是有效安全的,能对牙体组织起到保护作用,给牙周组织带来的刺激更小。     

支气管哮喘患儿治疗前后血清hs-CRP和IL-10检测的临床意义

目的 探讨支气管哮喘患儿治疗前后血清hs-CRP和IL-10检测的临床意义.方法 选择2009年1月～2013年1月我院就诊的支气管哮喘患儿40例,另选择同期正常对照组健康儿童30例,比较正常对照组及支气管哮喘患儿治疗前后血清hs-CRP和IL-10水平的变化情况.结果 支气管哮喘患儿治疗前hs-CRP、IL-10水平明显高于正常对照组（t=3.126、7.835,P＜0.05）,经治疗3个月后,支气管哮喘患儿hs-CRP、IL-10水平均较治疗前明显降低,差异有统计学意义（t=3.327、6.937,P＜0.05）.且治疗后的支气管哮喘患儿hs-CRP、IL-10水平与正常对照组比较,差异无统计学意义（t=0.127、0.375,P＞ 0.05）.结论 通过检测支气管哮喘患儿血清hs-CRP和IL-10的变化,有利于了解哮喘患儿的病情变化、判断预后,值得推广和应用.     

靶向人端粒酶逆转录酶进行RNAi的逆转录病毒载体的构建

目的构建靶向性干扰人端粒酶逆转录酶表达的特异性小干扰RNA的真核表达载体。方法采用PCR法分别扩增增强型绿色荧光蛋白的DNA序列、U6启动子序列和靶向性干扰人端粒酶逆转录酶的特异性小干扰RNA对应的DNA序列,随后将与之相应的DNA序列片断依次克隆入真核表达载体pLXSN中,并通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体进行鉴定。以荧光显微镜和利用流式细胞仪分析重组病毒表达EGFP蛋白的情况。以MTT方法检测初步分析重组病毒对人Hela细胞的RNAi效果。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT。以磷酸钙共转染法制备的重组逆转录病毒滴定了病毒滴度后,重组病毒感染人Hela细胞24h时用流式细胞仪测得EGFP表达的阳性率为24.1%。重组逆转录病毒感染人Hela细胞48h时,MTT实验测得细胞死亡率为53.2%。结论成功构建了针对人端粒酶逆转录酶小干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siTERT,并制备了重组逆转录病毒,初步观察了效应,为进一步利用小干扰RNA技术研究肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d;模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d;黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达;③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.     

非功能性胰岛细胞瘤的诊断与治疗(附27例报告)

１９８１～１９９６年收治非功能性胰岛细胞瘤２７例。首发症状为腹部肿块１０例，腹部不适与肿块１１例，急性胰腺炎表现者３例，腹部不适与梗阻性黄疸者３例。行Ｂ超检查２７例中２０例（７４．１％）定位准确。行ＣＴ检查１５例均显示肿物，１３例（８６．７％）定位准确。行ＥＲＰ检查４例，于肿物存在部位主胰管受压、移位。２７例中肿瘤位于胰头部１５例，恶性４例中２例行胰头十二指肠切除术，２例行探查术；良性１１例中６例行肿瘤摘除，５例行胰头十二指肠切除术。肿瘤位于胰体尾部１２例均为良性，１０例行包括肿瘤在内的远侧胰腺及脾切除术，肿瘤摘除及保留脾脏的胰体尾切除术各１例。全组无手术死亡。随访：良性肿瘤２３例术后随访４个月至１５年均存活。恶性４例中２例行胰头十二指肠切除术后随访４～５年存活，行探查术２例于术后６及９个月死于癌转移。