脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.

Abstract：

Objective To explore lipoxinA4 (LXA4) expression in maternal serum of pregnant women and the protective effect and mechanism of LXA4 on trophoblastic cells from oxidative injury. Methods Trophoblastic cells were randomized into six groups: Control group; Lipopolysaccharides (LPS) group, cells were stimulated by 10 μg/ml LPS for 24 h; Intervention group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; LXA4 group, cells were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; Antagonistic group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 plus 100 μmol/L N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine (BOC-2) for 24 h; BOC-2 group, trophoblastic cells stimulated by LPS were treated with 100 μmol/L BOC-2 for 24 h. The serum concentration of LXA4 in normal group and preeclampsia group was detected by ELISA. The intracellular formation of reactive oxygen species (ROS) was detected by 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. SOD mRNA was analyzed by RT-PCR. SOD and Nrf2 protein expressions were analyzed by Western blot. The levels of SOD in trophoblastic cells were detected by using detection kit. Results (1) The serum concentration of LXA4 was significantly lower in preeclampsia group (165.53±18.89) pg/L than in the control [(545.67±30.91) pg/L, P<0.01]. (2) Compared with control group, the levels of ROS in LPS group were significantly higher, DCF density of trophoblastic cells increased from 53.00±3.08 to 77.00±5.83 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA and protein in LPS group were obviously decreased (P<0.01). The levels of SOD in LPS group were also significantly lower (P<0.01). (3) Compared with LPS group, the levels of ROS in intervention group were significantly lower, DCF density of trophoblastic cells decreased from 77.00±5.83 to 62.00±3.39 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA in intervention group were obviously increased (P<0.01), so did the SOD protein expression (P<0.05). The levels of SOD were significantly increased from (4.77±0.34) U/ml to (8.93±0.53) U/ml (P<0.01). (4) The levels of SOD in antagonistic group were lower than in intervention group, but still higher than LPS group. [(6.23±0.41) U/ml vs (8.93±0.53) U/ml (P<0.01) or (4.77±0.34) U/ml (P<0.01)]. No significant difference was found in the levels of SOD between BOC-2 and LPS group (P>0.05). Conclusions LXA4 can significantly reduce the oxidative stress of placental trophoblastic cells stimulated by LPS. LXA4 can bind to lipoxin receptors and activate Nrf2-ARE signaling pathway playing a protective effect. So LXA4 in pregnant women can affect the oxidative stress of placenta.     

妊娠高血压综合征患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1的表达

目的 观察正常晚孕妇女（NTP）及妊娠高血压综合征（PIH）患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1（HO-1）的表达.方法 取15例NTP和PIH患者剖宫产术的胎盘绒毛小叶进行培养,应用免疫印迹法（Western Blot）检测胎盘组织中HO-1的蛋白含量.取正常早孕妇女胎盘绒毛小叶进行细胞培养,然后分别加入NTP血清（NTP组）及中重度PIH患者血清（PIH组）,进行分组培养.应用Western Blot检测HO-1的蛋白含量.结果 PIH组胎盘组织中HO-1的蛋白含量与NTP组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;PIH患者血清培养的滋养细胞中HO-1的蛋白含量低于正常组.结论 PIH患者胎盘滋养细胞中HO-1的蛋白表达明显减少.     

艾森曼格综合征患者妊娠4例并文献复习

目的观察艾森曼格综合征患者妊娠结局,探讨围产期处理方法。方法回顾性分析4例艾森曼格综合征患者妊娠的临床资料。结果第1例患者因发现孕5月,胎盘早剥、胎死宫内行硬外麻剖宫取胎术,产后2周平安出院;第2例患者孕35周合并重度子痫前期、HELLP综合征、临产入院,全麻剖宫产后数小时死亡;第3例因孕36周＋5d、临产入院,剖宫产,产后2周平安出院;第4例因孕30周,胸闷气促加重伴咯血1d入院,剖宫产后3周平安出院。结论艾森曼格综合征患者不宜妊娠,一旦妊娠应尽早终止,妊娠中、晚期应与相关科室密切合作,加强动态观察及对症支持治疗,适时终止妊娠。     

不同分娩方式对脐血中性粒细胞凋亡率及TLR4表达的影响

目的 探讨不同分娩方式对脐血中性粒细胞凋亡率、TLR4表达的影响.方法 选择足月阴道分娩及择期剖宫产产妇各20例,抽取新生儿脐静脉血,采用流式细胞术检测中性粒细胞凋亡率、TLR4表达水平.结果 阴道分娩组脐血中性粒细胞凋亡率(13.46%±2.34%)明显低于剖宫产组(23.69%±3.04%),阴道分娩组TLR4表达水平(3.19±0.32)明显高于剖宫产组(1.79±0.28).结论 阴道分娩提高脐血中性粒细胞存活率及TLR4表达,可能对新生儿中性粒细胞免疫功能有增强作用.     

妊娠合并艾森曼格综合征围产结局分析

目的探讨妊娠合并艾森曼格综合征的诊断、妊娠结局与处理。方法回顾分析3例妊娠合并艾森曼格综合征患者的临床资料。结果 3个病人均因出现相应临床表现急诊入院,均选择剖宫产终止妊娠,产妇恢复良好,足月新生儿1人,早产儿2人中,死亡1人。结论妊娠合并艾森曼格综合征母儿的结局不良,不宜妊娠,一旦妊娠应尽早行人流术终止妊娠。如果患者坚决要求继续妊娠,应加强产前保健尽早住院监护,加强多科室合作,全面、正确、有效的处理有助于使患者平稳渡过围生期,改善母儿的预后。     

肾移植术后妊娠二例报道及文献复习

近年来由于器官移植技术的发展和免疫抑制剂的应用,不仅延长了肾移植患者的生存期,而且改善了器官移植后的生活质量,使年轻妇女肾移植术后妊娠的机会明显增加[1],并能与正常妇女一样正常分娩。我院自1997年1月至2004年6月共接受肾移植患者434例,年龄<40岁的女性79例,其中2例女性患者成功妊娠并自然分娩。现报告如下。一、临床资料例1　患者35岁,肾移植术后2 年,于 1999 年 12 月 31日因G2P1 孕35周,阴道流液2 h入院。既往患者因反复蛋白尿,浮肿9年,肾功能逐渐恶化致尿毒症,血液透析治疗一年后,于1997年1月28 日行同种异体移植手术,术后…     

妊娠合并嗜铬细胞瘤危象2例诊治

1 病例报告 例1,患者,33岁,G4P1.因妊娠30+3周,反复头痛、头晕、心慌半年,突发抽搐2次,胎动消失1天入院.追问病史患者曾在1+月前晕厥1次.11天前发生第1次抽搐后就诊当地医院,诊断为重度子痫前期,给予硫酸镁、硝苯地平治疗,再次抽搐并且胎动消失.     

11例妊娠合并抗磷脂综合征孕妇的52次妊娠结局分析

目的:分析妊娠合并抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)与各妊娠并发症及新生儿出生体重、Ap-gar评分和抗体滴度与妊娠结局的关系。方法:回顾性分析温州医学院附属第一医院2005年6月～2011年3月的11例妊娠合并抗磷脂综合征妇女的52次妊娠过程,并与随机抽取的26例非抗磷脂抗体综合征妇女的妊娠情况进行对比。结果:抗体滴度高的APS妇女的早产率明显高于抗体滴度低的APS妇女。APS组孕妇的流产率明显高于非APS组,妊娠并发症如妊娠期高血压疾病、前置胎盘、妊娠合并肝内胆汁淤积等的发病率没有显著高于非APS组,但是胎膜早破的发生率明显增高。APS组孕妇分娩的新生儿出生体重明显低于非APS组。结论:APS易导致孕妇早产及新生儿出生体重降低,危害母儿健康,故及时、合理地诊断与治疗非常重要,尤其是在抗体滴度高的APS孕妇。     

百里醌抑制卵巢癌生长及其机制研究

目的研究百里醌对卵巢癌生长的影响及其作用机制。方法百里醌作用卵巢癌细胞株SKOV3后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blotting检测胞核蛋白Nrf2、胞浆蛋白Keap1、Akt、p-Akt、NQO1、GCLC的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中NQO1和GCLC mRNA水平。制备裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察百里醌对肿瘤生长的影响;免疫组化检测肿瘤组织Nrf2、NQO1和GCLC的阳性表达。结果与对照组比较,百里醌明显抑制SKOV3细胞生长(P0.05、0.01),并诱导细胞凋亡(P0.01);升高细胞内ROS水平(P0.05);下调胞核Nrf2蛋白及胞浆p-Akt蛋白表达(P0.05),上调Keap1蛋白表达(P0.001);下调NQO1、GCLC的mRNA和蛋白表达(P0.05、0.01)。百里醌抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的生长(P0.01),降低肿瘤组织中Nrf2、NQO1、GCLC的阳性表达(P0.05、0.01)。结论百里醌抑制卵巢癌生长,其机制可能是抑制胞核Nrt2蛋白表达,促进癌细胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡。     

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。