环介导等温扩增(LAMP)技术检测奇异变形杆菌方法的建立

[目的]建立一种检测奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法. [方法]针对奇异变形杆菌脲酶调节子编码基因(ureR)特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃孵育约60min,完成对奇异变形杆菌的扩增,扩增产物经电泳和酶切鉴定.利用LAMP和普通PCR方法同时检测1株奇异变形杆菌和13株非奇异变形杆菌来验证LAMP方法的特异性;将奇异变形杆菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法同时进行检测来比较两者敏感性. [结果]1株奇异变形杆菌扩增出LAMP特征性梯状条带,13株非奇异变形杆菌没有出现LAMP扩增,酶切也证实了LAMP产物的特异性;LAMP检测奇异变形杆菌的特异性与普通PCR相同,但其敏感性比普通PCR高10倍:LAMP检测奇异变形杆菌的检测下限为5 cfu/ml,PCR检测下限为50 cfu/ml.LAMP检测速度相比PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应.[结论]建立了一种特异、敏感、快速且不需要特殊设备的奇异变形杆菌LAMP检测方法,有望用于奇异变形杆菌的快速检测.     

HCV 感染男性吸毒者血浆CCL19 及CCL21 浓度变化分析

目的:分析丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染男性吸毒者血浆CCL19 及CCL21 浓度变化。方法:采用定量ELISA 法检测血浆CCL19 和CCL21 浓度,ELISA 法检测血浆抗HCV,Real-time RT-PCR 法检测HCV RNA,以国家哨点监测HCV 感染的391 名男性吸毒者为研究对象,60 名健康男性为对照,分析不同抗HCV/ HCV RNA 状况男性吸毒者血浆CCL19 和CCL21 浓度变化。结果:391 名男性吸毒者中,180 名感染HCV,感染率为46.04%。未感染HCV 男性吸毒组血浆CCL19 及CCL21 浓度较健康男性组升高(P<0.001)。吸毒抗HCV(-) / HCV RNA(+)组血浆CCL19 和CCL21 浓度最低,与其他组差异明显(P<0.05);吸毒抗HCV(+) / HCV RNA(-)组的最高,与健康男性组差异显著(P<0.05)。结论:吸毒可使男性血浆CCL19 和CCL21 浓度升高。血浆CCL19 和CCL21 浓度升高可能有助于HCV 自发清除;血浆CCL19 和CCL21 浓度降低可能预示着病程持续转归较差。     

阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子水平与免疫防卫能力的研究

目的 了解阿米巴肝脓肿患者抗体的免疫防卫能力。方法 ＥＬＩＳＡ、比色法及流式细胞仪等检测了４０例阿米巴肝脓肿患者血清细胞因子ＴＮＦ－α,ＩＬ－６,ＩＬ－８,ｓＩＬ－２Ｒ,弓形虫感染率,ＮＯ,血液ＣＤ４／ＣＤ８Ｔ细胞,红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ－Ｃ３ｂＲＲ）及免疫复合物花环率（ＲＢＣ－ＩＣＲ）。结果 ＴＮＦα,ＩＬ－,ＩＬ－８,ｓＩＬ－２Ｒ,ＮＯ,ＲＢＣ－ＴＣＲ显著高于正常对照组,ＲＢＣ－Ｃ３ｂ     

DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究

目的 通过检测绿色荧光蛋白基因在小鼠体内的表达,研究质粒pEGFP-N3在组织分布及应用安全性。方法 带有增强绿色荧光蛋白（Enhance Green Fluorescent Protein,EGFP）基因的质粒pEGFP-N3的转化、扩增、大量提取及纯化,左大腿肌注BALB／c小鼠,注射后不同时间部杀,取注射部位肌肉、心、脑、肝、脾、肾作冰冻切片,荧光显微镜下镜检。结果 质粒pEGFP-N3在小鼠注射部位肌肉及心内膜细胞内表达EGFP,荧光48h内最强,1w明显减弱,2w消失。其它组织及对照无黄绿色荧光。结论 外源性EGFP基因能在小鼠细胞内表达,它可作为基因表达的检测标签,而质粒pEGFP-N3不与机体染色体重组,应用安全,可作为DNA疫苗的理想载体。     

华支睾吸虫CsSP16.4基因的克隆、序列分析和功能预测

目的通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因;克隆并构建重组表达载体,为进一步研究其功能及其应用价值奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过Blastn程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifscan,NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析及进化树分析。结果筛选得到的序列长725bp,应用VecterNTI分析,理论分子量为16.4kDa,理论等电点(pI)为6.44,疏水氨基酸(AILFWV)占36%,带电荷氨基酸(RKHY-CDE)占29%,极性氨基酸(NCQSTY)占28.8%,酸性氨基酸(DE)占8.65%和碱性氨基酸(KR)占9.21%。应用NCBI站点的ORFFinding分析发现其含4个可能的ORF,其中最长的ORF,从第42到第494bp,起始密码为ATG、终止密码为TAG,完整阅读框含450bp,编码150aa。发现该基因有潜在的2个糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点和1个蛋白激酶C磷酸化位点。结论确定该基因为华支睾吸虫分泌蛋白基因,为作为诊断候选抗原提供了依据。     

环介导等温扩增（LAMP）技术检测沙门菌属方法的建立

建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白（invA）基因序列的六个区域设计四条LAMP引物，65℃保温约60min，完成对沙门菌属的扩增，扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌（对照组）来验证LAMP方法的特异性；将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带，9株非沙门菌没有出现LAMP扩增，LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实；LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同，但其敏感性比普通PCR高10倍，LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu／ml，PCR检测下限为100cfu／ml。LAMP检测速度相比PCR更快速，在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。     

抗菌肽的原核表达及应用前景

抗菌肽是具有抗菌活性的一类短肽,广泛存在于生物界,是先天免疫的重要防御成分,其杀细胞机制为在靶细胞膜上穿孔,靶细胞因渗透压改变而死亡。抗菌肽具有广谱抗菌活性,并有抗病毒、抗真菌、抗寄生虫及抗肿瘤等生物活性,有良好的应用前景,使其走向临床的最大挑战是如何用基因工程技术低成本大量生产抗菌肽产品。该文综述了抗菌肽的原核表达研究进展及其应用前景。     

恶性肿瘤患者血清一氧化氮水平与弓形虫感染率的研究

一氧化氮(NO)是一种重要的免疫介质,在抗肿瘤及抗寄生虫感染的免疫中发挥着重要作用。自80年代内源性NO被发观以来,其生物学活性日益引起人们重视。弓形虫是一种细胞内寄生的机会致病性原虫,其感染率的高低及感染后是否发病与机体的免疫状况密切相关。当机体免疫机能下降时(如AIDS、恶性肿瘤),其感染率和发病率随之上升,甚至直接导致死亡。为了解恶性肿瘤患者血清NO水平与弓形虫感染的关系,我们检测了恶性肿瘤患者血清NO水平及弓形虫的感染率。现报告如下。     

脑囊虫病患者血清NO和TNFα水平

目的 :观察脑囊虫病患者血清一氧化氮 ( NO)和 TNFα的水平并探讨其临床意义。方法 :用比色法和双抗夹心 ELISA检测了 3 0例脑囊虫病患者血清的一氧化氮 ( NO)和肿瘤坏死因子α( TNFα)水平。结果 :患者血清 TNFα含量为 ( 0 .66± 0 .1 2 )× 1 0 - 3ng/ L,与正常对照组的 ( 0 .1 1 8± 0 .0 51 )× 1 0 - 3ng/ L比较有极显著性差异 ( P<0 .0 1 ) ;血清 NO水平为 ( 2 7.77± 3 .77) μmol/ L,明显低于正常对照组的 ( 50 .0 4± 6.2 3 ) μmol/ L( P<0 .0 1 )。结论 :脑囊虫病患者机体免疫功能受抑制 ,免疫功能低下     

基于适配分子的Dot-ELISA快速检测抗生素残留

目的本研究旨在建立一种快速、灵敏、特异的抗生素残留检测方法。方法通过选取两种分别能与氯霉素、卡那霉素特异性结合的适配分子,把含有不同浓度氯霉素、卡那霉素的模拟样品结合于硝酸纤维膜上,通过条件的优化,建立基于适配分子的Dot-ELISA快速检测氯霉素、卡那霉素残留的方法。结果该方法可以快速检测牛奶等食品中的氯霉素、卡那霉素残留,检测灵敏度达10-7g/L。结论与现有的氯霉素、卡那霉素残留检测方法相比,基于适配分子的Dot-ELISA方法可快速检测氯霉素、卡那霉素残留,且具有灵敏性高、特异性强等特点,可根据这两种抗生素的检测方法与条件为基础,延伸到其他抗生素残留的检测,可作为抗生素残留筛查的较好选择,有广阔的应用前景。