谷氨酸信号通路对黑素细胞树突形态的调节作用

[目的]探讨谷氨酸信号通路在黑素细胞中的作用机制.[方法]培养人原代黑素细胞.采用多巴染色法及透射电镜鉴定细胞;以Western Blot方法测定人原代黑素细胞内NMDAR2A的表达.采用扫描电镜观察谷氨酸受体激动剂N-Methyl-D-aspartic acid(NMDA),Quisqualate(Q-LA)和非竞争性拮抗剂MK-801作用下黑素细胞树突形态的变化.[结果]Western Blot实验发现人原代黑素细胞内有NMDAR2A蛋白的表达.扫描电镜观察发现谷氨酸受体激动剂NMDA及Q-LA作用后细胞树突长度明显变短,树突末端明显变宽,二、三级树突增加;谷氨酸受体拮抗剂MK801作用后细胞树突末端明显变窄,二、三级树突减少.[结论]除神经系统外,黑素细胞内存在谷氨酸信号通路,且该信号通路与细胞形态有关.     

微波辐射快速制备电镜标本的实验研究

用常规方法制备电镜标本时 ,标本制备周期过长一直是影响临床应用电镜及时诊断的一个突出问题。近年来 ,一些学者相继利用微波辐射协助电镜标本进行固定、脱水、浸透及聚合 ,明显缩短了标本制备的时间 ,并且不影响组织细胞超微结构[1] 。微波制样技术的原理、方法和步骤与常规制样有较大区别。微波辐射功率、加热时间、标本大小及其在微波炉中的位置等因素 ,对不同的组织标本均有较大影响 ,而且不同厂家及型号的微波炉 ,其功率大小和火力段的功率分配亦不相同。因此 ,目前尚无统一的微波辐射制样方法。我们根据现有实验室条件 ,对微波辐射快速制备电镜标本的方法进行了探讨 ,现报告如下。1　材料与方法1 1　材料小鼠肝、肾及大鼠心肌、骨骼肌组织 ,切成0 5ｍｍ3～ 1ｍｍ3 小块 ,放入 2 5%戊二醛 ( 0 1ｍｏｌ/Ｌ磷酸缓冲液 ,ｐＨ7 4 )中固定。1 2　微波辐射准备采用国产格兰仕ＷＰ - 750型微波炉 ,其输出功率在 12 7 5Ｗ、 2 77 5Ｗ、 30 0Ｗ、 4 95Ｗ、 637 5Ｗ、 750Ｗ之间可调。辐射时在微波炉内放一个盛有 30 0ｍｌ水的烧杯 ,使炉内加热物总量基本一致 ,保持温度基本恒定。...     

透射电子显微镜胶片的干燥度对电镜真空系统的影响

[目的]测定透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)胶片的干燥度和数量对TEM达到工作要求规定的真空度水平所用时间的影响规律.[方法]将不同数量的胶片预先干燥不同时间后,装入TEM中,测定TEM达到工作真空度水平所用的时间.[结果]①TEM达到工作要求规定的真空度水平所用时间与胶片数量成正比;与胶片预先被干燥的时间成反比.②一定数量的胶片在预先被干燥一定时间后,对TEM的真空度水平没有影响.[结论]TEM胶片在用干燥器预先被干燥7 h后,对TEM达到工作要求规定的真空度水平所用时间没有影响.     

冷冻保存Epon812包埋剂在电镜样品制备中的应用

[目的]探讨冷冻保存Epon812包埋剂及其再利用的方法。[方法]将电镜样品制备中剩余包埋剂在特定条件下冷冻保存,需要时解冻,进行常规浸透包埋。比较包埋剂冷冻前后超薄切片的切割性能。[结果]用冷冻后复温的包埋剂制备的包埋块,超薄切片时切割性能良好,两种包埋剂制备的样品各项观察指标无明显差异。[结论]冷冻保存Epon812包埋剂及其再利用的方法是可行的。     

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。     

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯（β-elemene）对多药耐药细胞株K562／阿霉素（ADM）的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS（10．0 production pacility）软件包对实验结果进行统计学处理。结果1．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P〈0．01）,逆转倍数为2．18倍;2．P-gp在耐药细胞株K562／ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论β-elemene能够明显逆转K562／ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。     

悬浮细胞扫描电镜快速制样方法

电镜用于某些疾病的病理检查已为广大医务工作者熟知.但电镜样品常规制备的方法时间长,约需要2d,影响及时诊断.我们参考有关文献[1,2],在实践工作中,经过多次实验,总结出电镜诊断的快速制样方法.     

20(R)人参皂甙Rg3逆转K562/ADM细胞MDR及诱导其凋亡的研究

目的　观察抗癌新药 2 0 (R) 人参皂甙Rg3(2 0 (R) ginsenoside ,Rg3)对K5 6 2 /ADM多耐药细胞株逆转MDR机制。方法　应用MTT法确定ADM和Rg3的细胞毒 ;用荧光分光光度仪测定K5 6 2 /ADM细胞内阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的浓度 ;流式细胞仪检测细胞凋亡率和表达P 170糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)的K5 6 2 /ADM的细胞含量。 结果　 (1)K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的抗性比K5 6 2细胞高 11倍 ,但两者对Rg3的IC50 分别为 11 76± 0 33μg/ml、10 4 9± 0 30 μg/ml,无显著性差异 (P >0 0 5 )。(2 )无毒剂量和低毒剂量的Rg3能显著提高K5 6 2 /ADM细胞内ADM的浓度 ,使该细胞对ADM的敏感性明显提高。 (3)Rg3对K5 6 2 /ADM细胞有较强的抑制生长和诱导凋亡作用 ,并有时间和浓度依赖性。(4)Rg3对表达P 170糖蛋白的K5 6 2 /ADM细胞的百分含量无显著性影响。结论　 2 0 (R) 人参皂甙Rg3不仅是抑制肿瘤生长和转移的抗瘤剂 ,也是一种有效的MDR逆转剂和细胞凋亡诱导剂     

外源性Aβ活化星形胶质细胞的超微结构表现和SVHRP的抑制作用

目的观察淀粉样β蛋白(Aβ1-40)诱导星形胶质细胞活化的超微结构改变和蝎毒耐热蛋白(SVHRP)在超微结构水平对胶质活化的抑制作用。方法应用Aβ1-40进行大鼠海马内定位注射,同时腹腔给予SVHRP进行干预。通过免疫组化染色和透射电镜观察星形胶质细胞的变化。结果 Aβ注射16天后,注射点周围GFAP免疫阳性细胞较对照组增多、肥大;电镜下星形胶质细胞核异染色质减少,核周体明显,胶质丝增生,线粒体、粗面内质网等细胞器丰富,胞内见吞噬物。SVHRP干预后,GFAP免疫反应水平下降与对照组相近,电镜下仍然可见核周体明显的星形胶质细胞,但胶质丝较少。结论外源性Aβ引起星形胶质细胞出现明显的超微结构改变,SVHRP抑制这一反应。