弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础.方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus（DE3）-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达.超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化.通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性.结果GRA6以融合蛋白（GST-GRA6）的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达.对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达.在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别.结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别.     

半胱氨酸酶抑制剂A在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨半胱氨酸酶抑制剂A（CSTA）在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 通过免疫组织化学染色、Western 免疫印迹和实时定量PCR（qRT-PCR）检测CSTA的表达,通过Transwell迁移侵袭实验评估CSTA对口腔鳞癌细胞转移的促进作用。采用SPSS 25.0和GraphPad Prism 8.4.3软件进行数据分析。结果 CSTA在口腔鳞癌中的表达显著低于正常口腔黏膜上皮组织,其表达量与颈淋巴结转移（P=0.028）和肿瘤病理级别呈显著负相关（P=0.001）,CSTA低表达的细胞倾向分布于肿瘤侵袭前缘;CSTA低表达组患者总生存期显著短于CSTA高表达组,CSTA过表达可在体外抑制口腔鳞癌细胞迁移与侵袭。结论 CSTA在调控口腔鳞癌颈淋巴转移过程中发挥重要作用,有望成为口腔鳞癌颈淋巴转移的潜在预测和治疗靶标。     

中国药典气体灭菌法质量标准的分析与现状思考

目的 分析中国药典气体灭菌法质量标准与国外药典的差异以及对现状的思考,探索进一步提高和完善中国药典气体灭菌法标准的路径。方法 将美国药典、欧洲药典、日本药局方与中国药典收载的气体灭菌法质量标准进行比对,同时采取参阅其他文献和企业调研的方式展开研究。结果 中国药典与国外药典在气体灭菌法的质量控制上整体要求是一致的,但在一些方面还存在一定的差异性,如气体灭菌法的定义和范畴、生物指示剂的菌株种类和编码、物理化学指示剂的分类和异常说明、验证方法、灭菌剂残留的解析和检测等,需要通过充分的技术评估和可行性分析来逐步完善;此外我国大部分企业的硬件水平差距较为明显,如气体浓度探头的使用、灭菌柜循环系统的配备、热解析室的建立等,其根源很大程度上在于企业成本和发展观念的制约。结论 应根据我国实际情况,进一步完善我国气体灭菌法的国家标准,同时以提高技术标准为依托,推动我国气体灭菌企业转变思维模式和观念,不断优化工艺,提高整体行业水平。     

自交联透明质酸钠凝胶预防中重度宫腔粘连分离手术后再粘连的前瞻性、随机、阴性对照临床研究

目的 评价自交联透明质酸钠凝胶预防中重度宫腔粘连分离手术后再粘连的有效性和安全性.方法 前瞻性、多中心、随机、阴性对照临床研究;对2011年11月至2012年11月中南大学湘雅三医院等医院符合入组标准的宫腔粘连患者,根据美国生育学会(AFS)宫腔粘连评分分级标准进行宫腔镜下的术前诊断分级,中重度宫腔粘连患者纳入本研究.随机入组120例患者(试验组和对照组各60例),对试验组患者在宫腔镜粘连分离术后应用Foley球囊导尿管结合自交联透明质酸钠凝胶防止术后再粘连;对照组患者在宫腔镜粘连分离术后只用Foley球囊导尿管防止术后再粘连.在术后3个月时进行第2次宫腔镜检查,再次对宫腔粘连进行分级.主要评价指标:术后3个月时防止宫腔粘连的有效率.次要评价指标:对宫腔粘连累及范围、粘连类型、月经模式的得分进行手术前后和组间比较.结果 完成本研究的患者共111例,其中试验组55例、对照组56例.试验组自交联透明质酸钠凝胶防止术后宫腔粘连的有效率(76％,42/55)明显高于对照组(48％,27/56),两组比较,差异有统计学意义(P=0.000 9).试验组应用自交联透明质酸钠凝胶显著减少了AFS总分,试验组为(2.1±1.1)分,对照组为(3.7±2.5)分,两组比较,差异有统计学意义(P=0.000 8);并对宫腔粘连累及范围得分[试验组(1.3±0.5)分,对照组(1.7±0.8)分]和月经模式得分[试验组(0.8±1.1)分,对照组(1.4±1.1)分]均有明显改善(P=0.037 8、0.0004).试验组应用自交联透明质酸钠凝胶减少了术后再粘连(中度和重度)的发生率,试验组术后3个月时中重度宫腔粘连的发生率为13％(7/55),而对照组为38％(21/56),两组比较,差异有统计学意义(P=0.000 6).未发生与材料相关的不良事件和并发症.结论 自交联透明质酸钠凝胶能够有效减少中重度宫腔粘连分离手术后的再粘连发生率并降低粘连严重程度,有利于改善患者的月经情况.     

卵巢上皮性癌组织及外周血中septin-9的表达情况

目的 探讨卵巢上皮性癌组织及外周血中septin-9蛋白水平检测的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附分析法分别测定137例卵巢上皮性癌患者、12例卵巢交界性肿瘤患者、10例卵巢良性肿瘤患者、41例盆腔良性疾患病人和58例健康人外周血血浆中septin-9蛋白水平.采用免疫组织化学染色方法分别测定54例卵巢上皮性癌患者、8例卵巢交界性囊腺瘤患者和8例卵巢囊腺瘤患者肿瘤组织中septin-9蛋白表达水平.结果 卵巢上皮性癌患者和盆腔良性疾患患者血浆中的septin-9蛋白水平(OD450=0.35±0.09;0.36±0.09)显著高于健康对照组(OD450=0.31±0.12) (P=0.002,P=0.007).卵巢上皮性癌患者外周血中septin-9水平,有肿瘤家族史组高于否认肿瘤家族史组(P=0.040),发生远处转移组高于未发生远处转移组(P=0.025).血浆中的septin-9蛋白水平与不同临床病理分期、分化、淋巴转移差异无统计学意义.组织中septin-9阳性表达率,卵巢上皮性癌组织为59.3％(32/54),卵巢交界性肿瘤组织为50％(4/8),卵巢良性肿瘤组织为0(0/8),各组间比较差异有统计学意义(P=0.007).结论 卵巢上皮性癌患者外周血中septin-9蛋白水平显著高于健康人群,盆腔良性疾病组患者外周血中septin-9蛋白水平显著高于健康人群.Septin-9与卵巢上皮性癌远处转移密切相关.卵巢上皮性癌组织、卵巢交界性肿瘤组织中septin-9阳性表达率显著高于卵巢良性肿瘤组织.     

CXCL12/CXCR4在小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

目的研究小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者外周血中CXCL12及其受体CXCR4的表达情况,探讨CXCL12/CXCR4与SCLC发生和发展之间的关系。方法采用ELISA、real-time PCR和Westernblot方法,检测CXCL12与CXCR4在30例局限期(Limited stage disease,LD)SCLC患者、32例扩散期(Expensive stage disease,ED)SCLC患者和10例良性肺部肿瘤患者(对照组,Control)中的转录水平和表达水平,分析CXCL12、CXCR4与SCLC患者临床病理等指标之间的关系。结果 CXCL12、CXCR4在SCLC患者组织中均高表达,其中扩散期患者CXCL12、CXCR4表达平略高于局限期患者组。扩散期患者外周血中CXCL12表达高于其在局限期患者中的水平,二者均高于对照组。血清中CXCL12水平与患者的性别和年龄无关(P0.05),而与肿瘤的大小及淋巴结转移明显相关(P0.01)。结论 CXCL12/CXCR4可能直接或间接参与对SCLC发生和发展的调控。     

补益肺肾汤对变应性哮喘大鼠模型Th1/Th2的影响

目的 观察补益肺肾汤对变应性哮喘大鼠模型辅助性T淋巴细胞（helper T cell,Th）1/Th2的影响,探讨其治疗变应性哮喘的作用机制。方法 选取60只雄性SD大鼠,将其随机分成正常对照组、模型组、生理盐水组、补益肺肾组,每组15只,采用0.5%磷酸组胺溶液超声雾化法复制变应性哮喘大鼠模型,最后一次激发后处死大鼠,收集血清和支气管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid,BALF）,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清免疫球蛋白E（immunoglobin E,IgE）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）和干扰素γ（interferon-gamma, IFN-γ）水平,用流式细胞仪检测脾Th1、Th2细胞比例。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠血清IgE和IL-4水平均显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,补益肺肾组血清IgE和IL-4水平均显著降低（P＜0.05）;补益肺肾组大鼠血清IgE和IL-4水平显著低于生理盐水组（P＜0.05）。与模型组比较,生理盐水组和补益肺肾组大鼠BALF中IL-4水平明显降低（P＜0.05）,IFN-γ水平明显上升（P＜0.05）;补肾益肺组大鼠BALF中IFN-γ水平显著高于生理盐水组（P＜0.05）。与模型组比较,生理盐水组和补益肺肾组大鼠脾中Th1/Th2明显上升（P＜0.05）;补肾益肺组大鼠脾中Th1/Th2显著高于生理盐水组（P＜0.05）。结论 补益肺肾汤可能通过下调IL-4水平和提高IFN-γ水平,调节变应性哮喘大鼠体内Th1/Th2失衡。     

基于技能模块导师负责制的住院医师规范化培训教学研究

目的　探讨基于技能模块导师负责制在住院医师规范化培训中的应用及效果。方法　通过遴选、聘用的技能模块导师负责对湖南省儿童医院2016级45名儿科住院医师进行培训,并对其前后的专业理论知识、技能操作能力、综合能力进行比较分析;另外通过问卷星的调查方式让住院医师对技能导师进行教学反馈,对儿科基地2017年、2018年、2019年结业技能考试通过率进行分析比较。应用SPSS 17.0行t检验和卡方检验。结果　技能模块导师负责制培训后住院医师专业理论知识[（86.45±7.59）分]、技能操作成绩[（89.78±6.04）分]以及综合能力[（84.09±8.43）分]均高于培训前（P<0.05）。2019年首次住院医师规范化培训结业技能考试通过率为93.33%,明显高于2017年的57.14%,两组比较差异具有统计学意义（?字2=28.45,P<0.01）;与2018年80.00%比较差异也有统计学意义（?字2=6.365,P<0.05）。结论　技能模块导师负责制培训方法,不仅有助于迅速提高住院医师的专业技能,提高其住院医师岗位胜任力,也有助于师资成长及综合素质的提高,值得住院医师规范化培训的推广应用。