Fv及其衍生物重组基因的构建

利用蛋白酶解法从完整抗体制备Ｆｖ片段是个费时费力的繁琐过程，且对于多种ＭｃＡｂ的Ｆｖ片段制备是不成功的。利用ＰＣＲ方法，从抗体产生细胞中获得可变区基因，并利用基因工程技术，构建不同的目的基因：重链可变区和轻链可变区相连构成Ｆｖ，ＶＨ和ＶＶ连入一基因编码的连接肽构成ｓｃＦｖ，两个ｓｃＦｖ相连的构成双价ｓｃＦｖ，两种功能ｓｃＦｖ相连构成双功能ｓｃＦｖ等。     

杭州市使用社交网络大学生MSM人群规模评估研究

了解杭州市三大高教园大学生使用同性社交软件情况并估计使用社交网络学生男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)规模,为开展针对MSM大学生的艾滋病防控工作提供依据.方法 2017年4月15日,选取杭州市滨江、下沙、小和山三大高教园区合适的地点,分3组开展调研,并对登陆同性社交软件的男同性恋大学生开展计数,7d以后重复此过程,通过对比个人信息,确定2次计数均被计入的调查对象,采用捕获—再捕获法计算使用社交网络学生MSM人群规模.结果 杭州市使用社交网络学生MSM人群规模约为2 636人(95%CI=2 522~2 750),平均年龄为(20.75±2.00)岁,平均体重为(63.58±11.82) kg,平均身高为(175.86±8.89) cm.在性角色分类中,插入和被插入均可的有400人(21.11%),被插入方405人(21.39%),插入方280人(14.78%),保密或未填809人(42.72%).结论 同性社交软件为应用捕获—再捕获方法估计男同性恋学生人群基数提供了新手段,也为高校开展对男同性恋青年学生的宣教工作提供了载体.新媒体技术在高校艾滋病防控工作中的作用值得深入研究.     

千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬降解的影响

目的 探讨千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的影响及其机制.方法 激光共聚焦显微镜观察千金藤素对转染了EGFP-LC3、tfLC3(mRFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62以及Beclin1的表达水平.激光共聚焦显微镜观察千金藤素、Bafilomycin A1、Rapamycin分别对转染了EGFP-LC3、tfLC3(mRFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2的表达.结果 千金藤素处理后细胞中的自噬体(EGFP-LC3荧光团)数量明显多于对照组[(30.40 ±6.42)vs(5.00±2.12),P＜0.01],自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达也呈量效和时效增多.转染ffLC3质粒后,千金藤素组和Bafilomycin A1组红绿荧光重叠呈现较多的黄色荧光团,而Rapamycin组出现较多的红色荧光团.千金藤素联用Bafilomycin A1并未进一步升高p62和LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,但联用Rapamycin明显升高了LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,同时,逆转了Rapamycin导致的p62蛋白表达水平减少.千金藤素既不影响对溶酶体的染色,也不减少LAMP1、LAMP2蛋白的表达水平,但影响了mRFP-LC3和mGFP-LAMP1的共定位.结论 千金藤素通过阻断自噬体与溶酶体的融合抑制MDA-MB-231细胞自噬体降解.     

熊果酸衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性评价

目的 通过合成系列熊果酸衍生物,测试其抑制肿瘤细胞增殖活性,探讨熊果酸衍生物抑制肿瘤细胞增殖的构效关系,获得抗肿瘤活性更好的熊果酸衍生物.方法 通过乙酰化反应对熊果酸的3-位羟基进行保护后,再将其28-位羧基制备成酰氯并与氨基酸酯反应,最后再在碱性条件下水解制备得28-位羧基被修饰的熊果酸衍生物.所有熊果酸衍生物的结构通过核磁共振氢谱(1HNMR)、核磁共振碳谱(13CNMR)和高分辨质谱(HRMS)进行确认.采用MTT法测试熊果酸衍生物抑制U937、HL-60、Jurkat、K562、DU145、EC109、MDA231和SMMC7721肿瘤细胞的增殖活性.结果 仪器分析结果表明所制备的熊果酸衍生物均为设计的目标化合物.对抑制U937肿瘤细胞增殖结果表明熊果酸28-位羧基被对4-氨甲基苯甲酸、7-氨基己酸和8-氨基辛酸修饰后,在给药浓度为5.0×10-6 mol/L时对U937细胞增殖的抑制率分别达到(18.84 ±2.58)％、(43.17±4.52)％和(68.38±7.95)％,明显优于母体熊果酸母体(10.06 ±2.35)％ (P ＜0.05).对Jurkat细胞增殖的抑制率则分别达到(68.42±8.19)％、(58.36±7.99)％和(61.08±5.77)％,远高于熊果酸的(6.89±2.31)％(P＜0.05).结论 对熊果酸28-位羧基进行延长修饰,有利于提高熊果酸的抗肿瘤活性,当延长7～8个碳原子,抗肿瘤效果最好.     

生姜中姜酚类活性成分的抗肿瘤作用及其机制

目的 从生姜中提取、分离和鉴定姜酚类物质,初步研究其抗肿瘤作用的分子机制.方法 采用CO2超临界流体对生姜原料进行提取,通过硅胶、RP-C18、Sephadex LH-20和HPLC等色谱方法进行分离和纯化,进而借助MS和NMR等光谱方法鉴定化合物结构,然后采用MTT法检测化合物对不同肿瘤细胞活性的抑制作用,采用流式细胞术及Western blot检测其抑制肿瘤细胞活性的变化.结果 从生姜中提取分离得到5个姜酚类化合物,分别为4,6,8,10-姜酚和5’-羟基-6-姜酚.其中8-姜酚和10-姜酚对多种肿瘤细胞的活性均有较好的抑制作用,尤以10-姜酚作用最强,给药72 h后其对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的IC50分别为(25.80±1.39)、(35.29±2.70) μmol/L.流式细胞术检测发现8-姜酚和10-姜酚可导致乳腺癌细胞的G1期阻滞,其中10-姜酚作用于MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h后G1期细胞的百分比分别为(66.73±2.93)％、(66.59±2.49)％,相对于对照组的(47.39±1.97)％和(49.17±3.52)％,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测结果显示,8-姜酚和10-姜酚可下调MDA-MB-231和MCF-7细胞中G1期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达;并可降低MAPK信号通路中ERK的磷酸化水平,增强P38的磷酸化水平.结论 从生姜中提取出的8-姜酚和10-姜酚具有明显的抑制肿瘤细胞活性的作用,其机制可能与其影响MAPK通路中ERK、P38磷酸化水平,导致细胞G1期阻滞有关.     

金瓷桥桥基牙预备及暂时桥对龈沟菌丛的影响

目的：探讨Ni—Cr合金金瓷桥桥基牙预备及暂时桥的戴入对龈沟菌丛的影响。方法：采用经典细菌培养鉴定及菌落形成单位计数(CFU／ml)的检测方法观测临床病例。结果：牙体预备后基牙龈沟内细菌的数量及种类显减少；牙体预备后1周，菌群基本上恢复到备牙前(基线)的水平；牙体预备后2周与备牙前比较，仅消化链球菌、二氧化碳嗜纤维菌有显性差异。结论：牙体预备会破坏口腔内菌丛的平衡，但基牙龈沟菌丛菌量在1周内基本能恢复平衡。暂时桥的戴入对龈沟细菌影响小。     

病毒性脑炎与鼻窦炎鉴别诊断及相关性研究

目的：探讨鼻窦炎误诊为病毒性脑炎的原因及相关性。方法选取2004年1月至2014年1月门诊按“病毒性脑炎”收治的231例病例,总结临床症状,脑电图,脑脊液,鼻窦片的特点,分析治疗效果,查找诊疗过程中应注意的问题,并结合相关文献进行回顾性分析。结果231例病例中,临床确诊的单纯病毒性脑炎患者137例,病毒性脑炎合并鼻窦炎患者48例;单纯鼻窦炎误诊为病毒性脑炎患者31例,其他15例。结论病毒性脑炎和鼻窦炎早期症状相似,如不认真检查易出现误诊、漏诊,许多病毒性脑炎患者往往合并鼻窦炎,有的以病毒性脑炎就诊的患者最后确诊为鼻窦炎。疾病的早期诊断,早期治疗对治疗效果有直接影响。鼻窦炎与病毒性脑炎的发生关系密切,及时治疗鼻窦炎症,可能会降低病毒性脑炎的发病率。     

介绍一种大鼠脑中γ-氨基丁酸受体的检测方法

目的：介绍一种大鼠脑中γ－ 氨基丁酸受体的快速简便的检测方法。方法：用３Ｈ－ ＧＡＢＡ 为配体来检测大鼠脑神经末梢微囊中的ＧＡＢＡ受体。检测ＧＡＢＡ受体的合适条件是１．０ ×１０－３ｍｏｌ／Ｌ的脑膜蛋白在３７℃下反应３０ ｍｉｎ。结果：大鼠脑中存在ＧＡＢＡ受体,Ｋｄ＝ （９７．３±５．８） ×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,Ｂｍａｘ ＝０．１０６１ ×１０－９ｍｏｌ／ｇ 蛋白±０．０１０３×１０ －９ｍｏｌ／ｇ 蛋白,属低亲和力受体。结论：用３Ｈ－ ＧＡＢＡ可以检测大鼠脑中的ＧＡＢＡ受体。     

奥湿克的临床应用及不良反应

奥湿克是治疗类风和骨关节炎的新药。其中的双氯芬酸钠为苯乙酸类衍生物,非甾体灰抗炎药,具有抗炎、镇痛、退热作用。其中的米索前列醇可防治由双氯酚酸钠诱发的胃及十二指肠溃疡。但随着应用的日益广泛,其不良瓜在临床中逐渐体现出来。本药可减少低血小板集聚,延长出血时间,可引起女性月经的胃肠系反应也会发生。奥湿克常见的不良反应还有肾及及肝脏损害,故其不衣反应不容忽视。其发生原因也与口服剂量大,个体差异等因素有关     

有机磷酸酯类化合物对大鼠GABA受体影响的体内研究

目的 :探索有机磷酸酯类化合物急性中毒的 -氨基丁酸能系统机理 ,为有机磷酸酯类化合物急性中毒的治疗提供理论依据。方法 :采用大鼠脑神经末梢微囊GABA受体为模型 ,大鼠体内染毒 ,观察动物抽搐发作和不发作时GABA受体的变化。结果 :大鼠皮下注射梭曼 99μg·kg 1或二嗪农灌胃 1.0 95g·kg 1,发现3 H GABA的结合值在抽搐发作时显著降低 ;或大鼠腹腔注射丙氟磷 6mg·kg 1,3 H GABA的结合值显著降低。结论 :有机磷酸酯类化合物在一定浓度下能显著降低大鼠脑GABA受体的结合 ,GABA受体参与了某些有机磷酸酯类化合物的急性中毒过程。