Ad-DsRed2-NT3转染小鼠离体耳蜗基底膜预防庆大霉素耳毒性的实验研究

目的将含有目的基因NT3的重组腺病毒Ad-DsRed2-NT3转染新生小鼠的离体耳蜗基底膜培养组织,观察其在预防庆大霉素的耳毒性中的作用。方法取新生小鼠的耳蜗基底膜离体培养1d后,用含有目的基因NT3的重组腺病毒Ad-DsRed2-NT3转染新生小鼠的离体耳蜗基底膜培养组织,转染成功1d后用终浓度为3mM的庆大霉素对离体耳蜗基底膜造模,造模3d后,行离体耳蜗基底膜的神经微丝免疫荧光染色,观察各组耳蜗基底膜神经微丝的密度,以观测NT3对离体耳蜗基底膜上的螺旋神经的保护作用。结果新生小鼠的离体耳蜗基底膜生长良好,重组腺病毒Ad-DsRed2-NT3能对其有效转染,庆大霉素造模后3d各组耳蜗基底膜神经微丝的密度(每100μm距离内的螺旋神经微丝数)分别为(±s):造模组16.67±1.63、Ad-DsRed2组16.17±2.31、Ad-DsRed2-NT3组40.33±1.63、空白组为43.17±0.75,其中,造模组与空白组、Ad-DsRed2-NT3组与造模组、Ad-DsRed2-NT3组与Ad-DsRed2组之间具有显著性统计学差异(P<0.05)。结论终浓度为3mM的庆大霉素对小鼠离体耳蜗基底膜上的螺旋神经有明显的损害作用,而NT3基因的过表达对这种损害具有保护作用。     

携带神经营养因子-3基因的重组腺病毒的构建和鉴定

目的:构建含人神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的重组腺病毒载体,为初步研究NT-3的在体功能做准备。方法:酶切法从已构建好的真核表达载体NT-3-pIRES2-DsRed2质粒中切下含有NT-3和DsRed2(包括连接区域pIRES2)的目的片段,将其插入到腺病毒骨架质粒pAdShuttle-CMV的多克隆位点中,电穿孔法将腺病毒骨架载体pAdShuttle-CMV-NT-3-DsRed2和预转入人肠杆菌BJ5183的穿梭载体pAdEasy-1进行细菌内同源重组。PacⅠ酶切线性化鉴定正确的同源重组载体,脂质体法转染293T细胞,包装形成表达NT-3目的蛋白和红色荧光的腺病毒。通过293T细胞3轮扩增病毒,氯化铯密度梯度离心,获得高滴度的纯化腺病毒。Western blot方法检测蛋白表达情况。结果:同源重组质粒载体的DNA测序证实腺病毒载体中含有NT-3的目的片段,Western blot证实感染重组腺病毒的293T细胞中有相应的NT-3蛋白表达;病毒滴度为109PFU/ml。结论:利用细菌内同源重组的方法可以成功构建同时表达NT-3蛋白和红色荧光的重组腺病毒。     

高迁移率族蛋白B1在肿瘤研究中的进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一类普遍存在于真核细胞核内的重要非组蛋白。1999年Wang等[1]发现HMGB1可以被释放到胞外并介导炎症反应,是一种重要的炎症晚期介质。最近研究发现,HMGB1的过度表达与肿瘤细胞增殖、分化、浸润、转     

低温等离子治疗鼻内镜术后鼻腔粘连疗效评价

目的 探讨低温等离子治疗鼻内镜术后鼻腔粘连的临床疗效。方法选取本院2014年6月～2015年6月鼻内镜术后鼻腔粘连患者共68例,按照不同的手术方法将其分成对照组和观察组各34例,予以行鼻腔粘连分离术。对照组采用剪切后双极电凝法,观察组采用低温等离子法。比较两组患者术中出血量、手术时间及术后鼻腔粘连复发情况。结果对照组术中出血量2.77±0.94 mL显著高于观察组出血量0.72±0.32 mL(t=12.005,P=0.000)。对照组手术时间6.56±1.29 min显著高于观察组手术时间5.82±0.82 min(t=2.801,P=0.007)。对照组复发率23.5%显著高于观察组复发率5.9%(χ²=4.221 P=0.040)。结论低温等离子治疗鼻内镜术后鼻腔粘连疗效显著,具有手术出血少、治疗时间短、复发率低的特点。操作简单、安全可靠,值得推广。     

声带良性病变切除方法的演变

声带良性病变是临床常见的致声嘶疾病,发病率呈逐年上升趋势[1]。这与环境污染、人们社会活动增多及对自身疾病、生活品质愈来愈重视有关。声带良性病变保守治疗效果一般不佳,多以手术治疗为主。临床上手术方法有直接喉镜、间接喉镜、硬管内镜、纤维(电子)喉镜、动态喉镜和支撑喉镜加显微镜手术。由于手术方法较多,优缺点不一,     

环上部分喉切除在声门型喉癌治疗中的疗效观察

目的：探讨环上部分喉切除对声门型喉癌患者治疗以及功能保全意义。方法回顾分析我科2008年～2013年接受环上部分喉切除的14例声门型喉癌患者的治疗结果。其中9例接受环舌会厌吻合,5例接受环舌吻合。结果随访1～5年,无失访,无死亡病例,局部控制率100%。术后拔管率100%。结论环上部分喉切除术是对声门型喉癌喉功能保全有积极意义治疗。     

术前使用布地奈德对声带息肉手术疗效的影响

目的 研究术前使用布地奈德雾化吸入治疗对手术疗效的影响。方法 按病程将3个月以内和1年以上患者随机分为两组,一组术前给予布地奈德雾化治疗,一组没有,术后两周复诊。分别于初诊、手术前和复诊时使用嗓音测试仪对病人进行测试并记录参数。结果 病程3个月以内患者术前给予雾化治疗后,其术后声学参数明显改善。结论 病程3个月以内患者术前给予雾化治疗能缩短术后恢复时间。     

内淋巴囊低度恶性腺癌1例并文献复习

内淋巴囊肿瘤（endolymphatic sac tumor,ELST）是来自内淋巴囊和内淋巴管上皮的肿瘤,又称内淋巴囊低度恶性腺癌。因其发病率低、发展慢,症状缺乏特异性,肿瘤又位于侧颅底、位置深在、周围解剖复杂且瘤体血供丰富,因此该病术前诊断困难,术中切除难度大,术后并发症多且重。为促进对该病的认识并给以恰当的治疗,我们结合近来收治的1例ELST,并复习相关的文献,报道如下。     

正常豚鼠耳蜗Corti器钙调素的分布

正常豚鼠耳蜗Ｃｏｒｔｉ器钙调素的分布高下，王锦玲，刘乾初钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ）是一种多功能耐热小分子酸性钙结合蛋白，进化上十分保守，抗原性较弱，广泛存在于多种真核细胞中，并以Ｃａ￣（２＋）受体形式参与细胞中多种酶和许多钙依赖性生理过程...     

高迁移率族蛋白B1和基质金属蛋白酶-2、9在喉癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:探讨喉癌组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:应用免疫组织化学EnVision二步法检测61例喉癌组织中HMGB1和MMP-2、MMP-9蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测30例喉癌组织中HMGB1和MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果:HMGB1和MMP-2、MMP-9蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(χ2值分别为44.934和49.923、36.054,均P<0.01);HMGB1和MMP-2、MMP-9mRNA在喉癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁正常组织(t值分别为5.940和7.005、7.664,均P<0.01);HMGB1和MMP-2、MMP-9蛋白表达均与喉癌T分期、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05或<0.01);HMGB1和MMP-9蛋白在喉癌组织中的表达呈正相关(r=0.381,P<0.01),HMGB1和MMP-2蛋白在喉癌组织中的表达无相关性(r=0.094,P>0.05);Kap-lan-Meier生存分析结果显示,HMGB1和MMP-9表达阳性患者的生存率低于表达阴性患者(χ2值分别为4.974、6.418,均P<0.05);COX回归分析显示,HMGB1是危险因子,其表达越高,患者预后越差(P<0.05)。结论:HMGB1和MMP-2、MMP-9与喉癌的浸润、转移有关;HMGB1和MMP-9的表达有协同促进作用;HMGB1可能是影响预后的独立危险因素。