补铁对生长发育期铅接触大鼠血脑屏障通透性的影响

目的: 探讨补铁对生长发育期慢性铅接触大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性及内皮细胞紧密连接蛋白的影响.方法: 选择 21 d龄的雄性SD大鼠38只,随机分为对照组(n=10)、染铅组(n=14)和补铁且染铅组(n=14).除对照组外,其他两组均自由饮用含400 mg/L的Pb(AC)2水溶液;补铁且染铅组以20 mg/kg浓度的FeSO4水溶液隔日进行ig,其他两组以相同的方法隔日用去离子水ig.饲养6 wk后,检测大鼠的血红蛋白和血铅含量,用硝酸镧示踪法观察血脑屏障的通透性,并测定脑组织内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达.结果: 补铁且染铅组与染铅组相比,大鼠的血红蛋白含量显著增高(P<0.05),血铅含量显著降低(P<0.05);电镜下观察可见,染铅组大鼠毛细血管内的镧盐颗粒穿过血脑屏障进入到脑组织内,而补铁且染铅组与对照组均未见镧盐颗粒渗透过血脑屏障.同时,补铁且染铅组内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达水平与染铅组相比明显增加.结论: 生长发育期铅接触可使血脑屏障通透性增加,脑毛细血管内皮细胞紧密连接蛋白occludin表达降低可能是血脑屏障通透性改变的主要分子机制之一;铅接触的同时适量补充铁元素,可保护由慢性铅接触所造成的血脑屏障紧密连接的损伤.     

水中脊髓灰质炎病毒细胞感染模型中病毒株与细胞株的筛选

目的：根据5种细胞系对脊髓灰质炎病毒1型（PV1）5个毒株的敏感性筛选适用于病毒消毒实验的病毒株和细胞系．方法：比较各毒株在不同细胞系中增殖3d～7d后的细胞病变作用（CPE）、半数组织培养感染里（TCⅡ）50）、蚀斑计数（PFU）及免疫印迹（DIBA）试验结果．结果：CPE与TCID）检测表明，同一细胞系Hep2和Hela中病毒感染细胞作用强弱为Henan，Hebei＞Brunhide，Mahony＞Sabin株；不同细胞系对同一病毒株的敏感性为Hep－2＞BGM＞Hela,Vero＞RD细胞．DBA检测提示，Henan株较Brun－hide更易检出．结论：Henan株及Hep－2细胞可作为PV消毒实验所用的病毒和细胞．     

全长hlrp分子在多种细胞系中的表达及其分析

目的克隆分析全长hlrp基因,观察分析hlrp蛋白在不同细胞的表达情况并进行相对定量。方法以LPS刺激HEK293细胞,利用RT-PCR方法,克隆得到全长hlrp分子。用生物信息学进行hlrp分子染色体定位和蛋白功能位点分析。采用免疫荧光细胞化学染色,在激光扫描共聚焦显微镜下观察hlrp蛋白在不同培养组织系HepG2、HeLa、PDC和HEK293中的表达情况。利用实时定量RT-PCR方法,量化比较hlrp基因在不同细胞系中的表达。结果克隆得到全长为2045bp的hlrp分子。该分子染色体定位在Xp22.2。蛋白功能位点分析表明该分子包含2个相互重叠的亮氨酸拉链结构。运用激光扫描共聚焦显微镜可以观察到hlrp蛋白在所用细胞系中均有表达。实时定量RT-PCR结果表明,hlrp分子在HEK293细胞株和PDC细胞株中高表达,并且在PDC细胞株表达高于HEK293细胞株。在HepG2细胞株和HeLa细胞株未见表达。结论克隆分析全长hlrp分子,并研究该分子在不同细胞株的表达情况,为进一步研究该基因的生物学功能奠定基础。     

铜银离子协同氯化消毒对脊灰病毒核酸的破坏作用

目的 探讨铜银离子协同氯化消毒对病毒核酸的破坏作用。方法 铜银离子协同氯化消毒（40μg.L^-1银离子,400μg.L^-1铜离子和0．3mg.L^-1游离氯）前后用逆转录PCR的方法检测协同消毒前后脊灰病毒的核酸,并用免疫印记法（DIBA）检测脊灰病毒的抗原性（蛋白质）;用核酸修复实验测定噬菌体f2的核酸修复率,并用血清方法检测噬菌体f2的抗原性。结果 RT－PCR检测显示铜银离子协同氯化消毒前脊髓灰质炎病毒I型（PVI）的特异条带为阳性,协同消毒后的为阴性;DIBA检测显示协同消毒前后的结果均为阳性,铜银离子协同氯化消毒灭活作用后,大肠杆菌噬菌体f2的核酸修复离随作用时间延长而降低;噬菌体的抗原性与正常无明显差别。结论 结果提示铜银离子协同氯化消毒灭活水中病毒的作用位点可能在病毒的核酸。     

β-胡萝卜素抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的研究

为了探讨 β 胡萝卜素抑制肝癌细胞增殖的机制 ,在体外培养肝癌细胞株SMMC 772 1,培养基添加2 0、40及 80 μmol Lβ 胡萝卜素作用 12、2 4和 48h后 ,用四唑盐比色试验 (MTT)检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡。MTT检测结果显示 2 0～ 80 μmol L的 β 胡萝卜素均对SMMC 772 1细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。DNA凝胶电泳结果显示 β 胡萝卜素能够诱导SMMC 772 1细胞凋亡。结论认为 β 胡萝卜素对人肝癌细胞株SMMC 772 1的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡     

案例教学法在医学院校环境卫生学课程中的应用

案例教学法是基于情境学习理论和弹性认知理论，以学生为主体的教学方法，具有启发性、实践性的特点，能够有效提高学生决策能力和综合素质。《环境卫生学》课程的特点则体现在边缘性、综合性与实践性上，二者的结合具有很强的适应性。通过案例教学中教师和学生的对话与思考，能够协助学生建立跨学科的知识结构，强化学生主动参与学习的行为。该文结合具体的教学实践活动，探讨了医学院校《环境卫生学》本科教学中如何有效实施案例教学方法的问题。     

稳定表达p27蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定

目的 探讨细胞周期抑制蛋白p27在肝癌细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制，建立稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株。方法 提取含有人p27基因的真核细胞表达载体pcDNA3-p27，用限制性内切酶Eco RI和NotI酶切后，经琼脂糖凝胶电泳鉴定。用脂质体介导的基因转染法，分别将真核细胞表达载体pcDNA3-p27和pcDNA3导入不表达p27蛋白的人肝癌细胞系HHCC细胞中，通过G418筛选获得转入目的的基因的阳性细胞克隆。用免疫组织化学染色法和Western blot检测p27蛋白的表达，经多次用有限稀释法连续克隆化，直至获得100％稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株。结果 琼脂糖凝胶电泳表明，可见597bp的p27基因片段。免疫细胞化学染色和Western blot检测表明，转染pcDNA3-p27的HHCC细胞大部分有p27蛋白的表达，而转染空载体pcDNA3或未转染的HHCC细胞，均未见p27蛋白表达。经连续3次克隆化后，转染pcDNA3-p27的HHCC细胞100％表达p27蛋白。结论 成功地获得了稳定表达p27蛋白的肝癌细胞株，命名为HCC－p27。     

肝癌细胞凋亡相关基因分析

目的 克隆肝癌细胞凋亡相关基因。分析已知基因同源的cDNA序列，探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡的分子机制。方法 用As2O3诱导人肝癌HCC-9204细胞凋亡，应用抑制性消减杂效技术克隆凋亡细胞中的差异表达cDNA，测序并与Genebank中的已知基因序列进行同源性比较。结果 克隆到18个与已知基因高度同源的cDNA序列，包括与抗氧化损伤，线粒体跨膜运输，细胞骨架系统相关的基因，细胞凋亡相关核蛋白PHLDA1基因，核糖体蛋白L37基因，溶酶体ATP酶基因以及与Ibd1,SMT3,DKFZP434J154pro-tein等基因高度同源的序列。结论 As2O3诱导的肝癌细胞凋亡后，大量基因表达上调，这些基因大多与As2O3处理肝癌细胞后的应激反应和细胞凋亡有关，提示细胞凋亡是一个有多基因参与调控的复杂过程。     

正交试验法优选凌寒片的醇提取工艺

目的通过正交试验法优选凌寒片的最佳醇提取工艺。方法以淫羊藿苷含量、干膏率为评价指标,选择乙醇浓度、乙醇用量、提取时间及提取次数为考察因素,利用L_9（3^4）正交试验确定凌寒片的醇提取工艺。结果凌寒片最佳醇提取工艺为加90％乙醇16倍量,回流提取1次,提取时间1h。结论优选出的醇提取工艺简单、可行,可作为该制剂合理开发的依据。