RNA干扰对过表达Hlrg的Hep G2细胞的影响

为观察RNA干扰对过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的影响,构建了封闭Hlrg基因表达的shRNA表达载体pAVU6+27-Hlrg,将pAVU6+27-Hlrg稳定转染到过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞中;分别用相差倒置显微镜、FCM、SABC-FITC、RT-PCR、Western blot等观察细胞改变。测序结果表明pAVU6+27-Hlrg构建成功;针对Hlrg的RNA干扰已完成;相差倒置显微镜发现细胞突起增加;FCM显示干扰组G1期明显缩短。针对Hlrg的RNA干扰能促进过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的生长。     

锰对PC12细胞生长增殖及对ERK信号转导通路的影响

目的:研究不同浓度的锰对PC12细胞生长增殖及细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)信号转导通路的影响. 方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100～900 μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量,平板克隆形成实验观察MnCl2对细胞的抑制作用. Western blot检测ERK1/2及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2 (p-ERK1/2)表达情况. 结果:MTT、平板克隆形成实验结果显示100～900 μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有不同程度的抑制作用(P<0.05). Western blot结果显示随着染锰浓度的增高,PC12细胞p-ERK1/2表达量与对照组相比有显著性差异(P<0.05). 结论:一定浓度的MnCl2对PC12细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过下调胞内p-ERK1/2表达实现的.     

锰对PC12细胞毒性作用的研究

目的研究不同剂量的锰(Mn)对PC12细胞生长增殖的影响。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,以100~900μmol/L MnCl2染毒后进行四唑盐比色实验(MTT)观察MnCl2对细胞的抑制作用,TUNEL法观察细胞凋亡,Western blot检测α-共核蛋白(-αSYN)表达情况。结果MTT结果显示100~900μmol/L MnCl2对细胞的生长增殖有显著的抑制作用(P<0.01)。TUNEL染色结果显示MnCl2处理组TUNEL阳性细胞增多(P<0.05)。Western blot结果显示与对照组相比,100、300、500μmol/L MnCl2组-αSYN表达水平分别升高1.8、4.5、7.3倍(P<0.05)。结论一定剂量的MnCl2对PCl2细胞的生长增殖有明显的抑制作用,这一作用可能是通过诱导胞内-αSYN表达增高实现的。提示预防、阻止α-SYN在细胞中的聚集可能会降低Mn对多巴胺能神经细胞的损伤。     

p27~(Kip1)诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨过表达的p27Kip1对肝癌细胞的抑制作用。方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1基因导入HHCC细胞中,用Westernblot检测p27Kip1是否导入到肝癌细胞中;用流式细胞仪检测过表达的p27Kip1对肝癌细胞HHCC的抑制作用;电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1抑制肝癌细胞生长的可能机制。结果:Westernblot检测表明,转染p27Kip1的HHCC细胞大部分有p27Kip1蛋白的表达;而转染空载体或未转染的HHCC细胞,均未见p27Kip1蛋白表达。经连续3次克隆化后,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1的HHCC细胞100%表达p27Kip1蛋白。过表达的p27Kip1对HHCC细胞有明显的抑制作用,其抑制率为49.09%～56%;过表达的p27Kip1可以封闭G1期的进程和诱导肝癌细胞发生凋亡,其凋亡百分比为12.3%。结论:过表达的p27Kip1可以通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长。     

侧脑室注射甲基叔丁基醚对大鼠学习记忆的影响

目的探讨甲基叔丁基醚(MTBE)对大鼠学习记忆能力的影响。方法28只雄性SD大鼠,随机分为4组,正常对照组(M c)仅手术不给予任何溶液,阴性对照组(M0)、低剂量组(M1)、高剂量组(M2)分别给予生理盐水、50%MTBE、100%MTBE 2μl双侧侧脑室注射。利用Morris水迷宫于术后第3,5,7,14天分别进行定位航行实验,第15天进行空间搜索实验评价其学习记忆能力。结果术后第3,5,7天,M2组大鼠逃避潜伏期[(29.95±18.63)s,(37.19±28.88)s,(26.76±20.99)s]较对照组[(20.37±17.62)s,(16.97±16.71)s;(20.19±14.36)s,(16.98±17.83)s;(11.69±9.23)s,(8.73±7.15)s]均明显延长(P<0.01);术后第7,14天M2组大鼠目的象限路程占总路程百分比[(26.3±5.8)%,(35.4±5.9)%]显著低于M c组[(38.7±7.5)%,(49.4±7.2)%](P<0.01);4组大鼠穿越平台的次数总和(21,14,12,6)差异有显著性(P<0.05),穿越有效区次数差异无显著性(P>0.05);各组大鼠在原平台区停留时间[(0.91±0.11)s,(0.66±0.13)s,(0.61±0.23)s,(0.21±0.07)s]差异有显著性(P<0.05),距离差异无显著性(P>0.05);各组大鼠有效区停留时间及距离差异无显著性(P>0.05);注射MTBE组大鼠朝向角[(19.28±6.80)o,(41.76±12.16)o]较对照组[(4.19±2.23)o,(9.59±4.95)o]显著增大(P<0.05)。结论侧脑室注射MTBE对大鼠学习记忆能力有一定的损害作用。     

锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究

为探讨锰 (Mn)抑制神经细胞增殖的机制 ,体外培养神经细胞株PC12 ,培养基分别含有 10 0、2 0 0及5 0 0mmol LMnCl2 ,作用 2 4、48、72h后 ,用四唑盐比色实验 (MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛 (MDA)的含量 ;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果显示 ,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10 0～ 5 0 0mmol L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。GSH Px活性降低 ;MDA的活性升高。DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡。提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡     

特发性多发性肌炎外周血淋巴细胞共刺激分子表达的研究

目的观察特发性多发性肌炎患者外周血淋巴细胞共刺激分子CD28、CD152、CD80、CD86表达,进一步分析共刺激分子与疾病的关系。方法研究分三组,即健康对照者（HC,n=5）、特发性多发性肌炎组（IPM,n=8）和肌营养不良组（MD,n=8）,后两组患者均经肌肉活检酶组织化学确诊。三组患者均通过流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD4、CD8、CD4＋CD28＋、CD8＋CD28＋、CD152、CD80、CD86表达,并计算出CD4＋CD28-、CD8＋CD28-表达。结果与HC组比较,IPM组CD4＋CD28＋表达降低（31.9±6.6 vs 39.5±6.9,P〈0.05）,其所占CD4＋T细胞的百分率亦明显下降（92.2%±6.2% vs 98.1%±0.7%,P〈0.05）,与之相反的是CD4＋CD28-表达明显升高（2.0±1.8 vs 0.6±0.2,P〈0.05）。IPM组CD4、CD8表达及CD8＋CD28＋/CD8百分比与HC组无明显差异,CD8＋CD28-表达则呈上升趋势。IPM组CD152较HC组明显升高（18.5±13.8 vs 7.1±1.2,P〈0.05）,各组间CD80表达无明显差异,CD86以IPM组最高（6.8±1.9 vs 4.6±1.7,P〈0.05）。结论IPM患者外周血CD4阳性的T细胞表面的CD28表达下降,但CD152和CD86表达升高。     

慢性寒冷应激诱导大鼠肝脏损伤及其机制

目的：研究寒冷应激对大鼠肝脏损伤的诱导作用及其分子机制.方法：将雄性SD大鼠置于（-15±1）℃自动控温低温实验舱内每日进行冷暴露6h,按照寒冷应激暴露时间的不同分为1,3,5,7,10,14d组.取各组大鼠肝脏组织石蜡切片,采用HE染色观察不同寒冷暴露时间下对大鼠肝脏的损伤程度.采用Western Blot方法检测大鼠肝脏组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）信号分子的表达及磷酸化水平.结果：寒冷应激对大鼠肝脏可产生明显的损伤作用,冷应激7d时肝脏损伤有暂时性恢复,但随后再次加重.寒冷应激后肝组织JNK1/2（p-JNK1/2）磷酸化水平显著增高,而且这种增高与肝组织细胞损伤程度存在显著的相关性,但ERK1/2的表达及磷酸化水平没有明显的改变.结论：寒冷应激可以引起大鼠肝脏的损伤,肝脏组织JNK1/2的磷酸化水平的增高可能是其重要分子机制之一.     

心理弹性对高原驻训官兵睡眠质量与情绪的影响

目的 探讨高原驻训官兵主观睡眠质量状况，心理弹性对睡眠质量与情绪的影响，为改善驻训官兵心理健康水平提供依据。方法 使用匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index, PSQI)和心理弹性问卷(Connor-Davidson resilience scale, CD-RISC)、广泛性焦虑量表(7-items generalized anxiety disorder scale, GAD-7)、健康问卷抑郁症状群量表(Patient health questionnaire-9, PHQ-9)对1550名高原驻训官兵进行问卷调查。结果 (1) 23.54%高原驻训官兵存在睡眠障碍，10.72%有焦虑症状，13.68%有抑郁症状。PSQI中入睡时间、睡眠质量、睡眠效率三个因子得分≥2分的官兵数量分别为645(42.41%)、314(20.64%)、262(17.23%)名；(2)睡眠障碍的发生与性别、年龄、婚姻状况、受教育程度、吸烟、驻训前是否在高原长期生活等因素有关；(3)重度、中度、轻度睡眠障碍组GAD-7总分、PHQ-9总分均显著高于睡眠质量正常组...     

1,25-(OH)2D3抑制人肝癌细胞增殖的研究

目的：探讨1，25－（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的机制。方法：体外培养肝癌细胞株SMMC－7721，培养基因10、50及100（nmol/L)1，25－（OH）2D3作用2d,4d,6d后，用四唑盐比色试验（MTT）和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长；台盼蓝拒染法绘制生长曲线；DNA凝胶电泳检测肝癌细胞凋亡。结果：MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10－100nmol/L的1，25－（OH）2D3均对SMMC－7721细胞株有显的抑制作用，且呈剂量－效应关系。DNA凝胶电泳结果显示，1，25－（OH）2D3能够诱导SMMC－7721细胞凋亡。结论：1，25－（OH）2D3对于人肝癌细胞株SMMC－7721的增殖有显的抑制，其机理可能是通过干扰肝癌细胞的DNA代谢和诱导肝癌细胞凋亡。