蛋白折叠遗传筛选模型的建立

蛋白折叠即氨基酸序列究竟如何决定蛋白质的高级结构及其功能 ,是现代分子生物学的一个重要问题。蛋白折叠规律的揭示 ,对于蛋白质的结构预测、从头设计、结构与功能性基因组的研究等具有重要的意义。大肠杆菌是最常用的遗传宿主 ,因此希望以氯霉素乙酰基转移酶ＣＡＴ、β 半乳糖苷酶Ｌａｃ Ｚ的α片段为报道基因 ,利用目的蛋白———ＣＡＴ/α 小片段融合蛋白中目的蛋白的折叠状态与报道基因功能之间的相关性 ,在大肠杆菌中建立一种简便、通用、快速的遗传筛选模型 ,对蛋白折叠的遗传学规律问题进行研究。实验中以分子伴侣如ＧｒｏＥＬＳ ,…     

大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中应用的研究进展

大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题：聚酮合成酶中ACP的后修饰、6-dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等。通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp，使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰；6-dEB生物合成前体丙酰CoA和丙二酰CoA可通过Pfeifer途径和Dayem途径提供；目前，在大肠杆菌体内已可以合成6-dEB。利用大肠杆菌系统合成新的大环内酯化合物、对大环内酯糖基化修饰和提高大肠杆菌系统合成大环内酯类抗生素产量将是今后研究的重点。     

非受体酪氨酸激酶c-Abl与Siva-1相互作用及在细胞凋亡中的功能研究

目的：研究非受体酪氨酸激酶c-Abl与Siva-1蛋白的相互作用及其对细胞凋亡的影响。方法：应用免疫共沉淀研究蛋白质相互作用；抗酪氨酸抗体研究蛋白体内磷酸化；体外激酶分析研究体外磷酸化；流式细胞仪测定Sub G1细胞百分比以测定细胞调亡。结果：非受体酪氨酸激酶c-Abl在细胞内及体外均与Siva-1形成复合物，通过体外翻译的c-Abl结合实验表明其为直接的相互作用，其相互作用主要通过c-Abl的SH3结构域与Siva-1直接结合，且Siva-1可以被c-Abl磷酸化。通过c-Abl显性负突变结果表明，酪氨酸磷酸化对Siva-1诱导细胞凋亡至关重要。结论：c-Abl使Siva-1磷酸化可促进Siva-1的细胞凋亡功能。     

如意金黄散治验举隅

本文报道以如意金黄散治疗软组织挫伤、乳腺炎、烫伤、下肢溃疡、足癣等病，取得良好疗效。提示应用经方于临床，只要注意辨证论治，准确选方用药，并根据病情灵活选择剂型，即可收到满意治疗效果。     

CT—B信号肽基因的化学合成及克隆

利用固相化学合成的方法合成了霍乱毒素Ｂ亚单位信号肽基因，并将该基因插入到ｐＢＲ３２２载体上，构建成一个可在不同相位插入异源基因的分泌素达载体。经菌洛原位杂交和酶切等方法筛选出正确的克隆，为进一步研究异源表达蛋白的分泌提供了条件。     

简便快速检测质粒DNA的方法 (二)可用于酶切的快速法

在分子遗传和遗传工程的研究中临床医学检验分析都要求简便快速分离和检测质粒DNA。近几年来已建立了“菌落溶解物法”、“硷变性法”、“煮沸法”。这些方法中各有其特点,但有的仍存在着重复性不好、方法不简便、不快速的缺点。我们已应用“菌落溶解物法”满意地分离检测质粒,但它不能进行限制酶切。我们应用“煮沸法”能达到这个目的,并且简便快速,重复性好。这个方法基本步骤是,首先用溶菌酶、去污剂Triton,和加热除去坚硬的细菌璧,使细胞裂解,然后离心除去细胞碎片和蛋白质等的沉淀,加入异丙醇回收DNA。我们用它     

乾列安胶囊对肾阳亏虚型前列腺增生症影响的研究

目的：探讨乾列安胶囊对肾阳亏虚型前列腺增生症的疗效及对实验动物前列腺增生、前列腺炎、肾阳虚证的影响。方法：采用雄性激素、致炎剂、氢化可的松诱导小鼠前列腺增生、大鼠前列腺炎及肾阳虚证动物模型，应用乾列安胶囊治疗，以前列康片为对照药，观察实验动物用药前后前列腺重量、前列腺指数、体重、体温、肾上腺中维生素C重量、肉芽组织重量、30分钟内扭体次数的变化。结果：乾列安胶囊对实验动物前列腺增生、前列腺炎及肾阳虚症有抑制作用，并有抗炎和镇痛作用。结论：乾列安胶囊对肾阳亏虚型前列腺增生症疗效较好，见效快、疗程短，无毒副作用，对前列腺炎亦有明显治疗作用。其疗效明显优于对照药前列康片。     

石苇散加味合穴位注射等治疗输尿管结石63例

输尿管结石是泌尿外科的常见疾病之一,其以腰腹痛和血尿为主要临床表现,但有部分病人可无明显自觉症状,而是在体检或诊疗其它疾病时而被查出。笔者以清热利湿、行气化瘀、通淋排石为法,用石苇散加味合穴位注射等治疗输尿管结石63例,效果满意,现报道如下。 1 一般资料 63例中,男性36例,女性27例;年龄最大者62岁,最小者19岁,平均36岁;单侧输尿管结石41例,双侧输尿管结石22例;输尿管结石位于上段者12例,位于中段者27例,位于下段者24例。就诊时腰腹部疼痛剧烈者23例;结石最大者1.3cm,最小者0.4cm。治疗前经腹部平片或B超检查,所有病例均无…     

与霍乱毒素A1亚基突变体相互作用蛋白的筛选

目的 寻找新的与霍乱毒素A1亚基（CTA1）突变体（S63F）相互作用的蛋白。来探讨CT佐剂活性的分子机理。方法 应用酵母双杂交技术，以CTA1（S63F）为诱饵蛋白筛选人脾细胞cDNA文库，并通过共转染，免疫共沉淀和Western杂交在哺乳动物细胞COS-7中确证诱饵蛋白和候选蛋白之间的相互作用。结果 筛选获得一个与HLAⅠ类分子α亚基高度同源的蛋白。这个蛋白在酵母核内以及COS-7细胞中都显示出与CTA1（S63F0的相互作用，结论 CTA1（S63F）与HLAⅠ类分子α亚基内以及COS-7细胞中都显示出与CTA1（S63F）的相互作用。结论 CTA1（S63F）与HLAⅠ类分子α亚基的相互作用可能导致HLAⅠ类分子进入“膜筏”，引起膜筏不断聚集增大，聚集到一定程度后筏相关酪氨酸蛋白激酶活化，启动胞内信号的级联传递，增强免疫反应。     

CTB-mST2融合蛋白在大肠杆菌表达及其生物活性鉴定

目的:表达霍乱毒素B亚单位(CTB)和大肠杆菌突变的热稳定肠毒素(mST)的融合蛋白,并进行抗原性和免疫原性的分析.方法:通过连接肽(linker)将CTB基因和串连的mST连接,然后插入表达载体pET-22b( ),获得克隆,经IPTG诱导获得CTB-mST2融合蛋白.采用多因素正交优选法优化了培养基及培养条件,对表达产物进行包涵体复性后,经过亲合层析纯化得到融合蛋白,并对该融合蛋白抗原性和免疫原性进行了分析.结果与结论:构建了高效表达工程菌,经摇瓶培养,在优化培养基及培养条件下融合蛋白表达量可达320 mg/L,占总蛋白40%.融合蛋白免疫小鼠,可获得高滴度抗CTB和ST血清;将融合蛋白与灭活的O157∶ H7菌体组合免疫小鼠,可产生对O157∶ H7毒株攻击的保护力.本研究可为构建抗ETEC和EHEC复合疫苗提供依据.