工程菌产CT-B和加热灭活霍乱弧菌菌体单独或组合免疫家兔效果观察

霍乱毒素 B 亚单位(CT-B)加灭活霍乱弧菌菌体构成的组合苗已在人群经口免疫试验中被证明效果优于传统的单一菌苗,但 CT-B 来源困难。我们用遗传工程方法构建成了分泌 CT-B 的高产工程菌株,为此型苗的广泛应用开辟了美好前景。本文以日本大耳白兔为动物模型观察工程菌产 CT-B 和灭活霍乱弧菌单独或组合经口免疫的效果。试验组用工程菌产 CT-B     

糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定

目的：构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体，探讨SRR氨基酸相应9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的关系。方法：以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板，用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应9核苷酸的KR6酶域DNA片段，并克隆到载体pWHM3上，构建了同源重组质粒pWHM3-SRR。将pWHM3-SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株，筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3-A、B和C。λC3-A在无硫链丝茵肽(Thio)的R3M斜面上生长两代后，制备的原生质体涂R3M平皿，挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3-SRR。结果：部分基因组DNA序列分析表明，糖多孢红霉菌λC3-SRR染色体上SRR氨基酸相应9核苷酸已经敲除，Zabspec Fab质谱分析证实λC3-SRR菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B。结论：糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应9核苷酸敲除的λC3-SRR突变菌株可以合成3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B，SRR为KR6酶域上NADPH2′-磷酸结合位点。     

糖多孢红霉菌表达载体pZMW的构建

目的：构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法：用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子，并利用pSET152质粒上链霉菌染色体整合位点(attP)和安普霉素抗性基因，构建了染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZW。结果：pZMW表达载体能够整合到链霉菌和糖多孢红霉菌染色体上，并能够在链霉菌和糖多孢红霉菌体内表达硫链丝菌素抗性基因tsr。结论：pZMW表达载体能够在糖多孢红霉菌中表达外源基因。     

碱性磷酸单酯酶在DNA体外重组试验中的应用

在遗传工程中,目的基因与载体DNA进行连接反应时,为确保这些DNA与载体重组成功,通常需加入数倍于目的基因的载体DNA。但是,大量加入载体DNA,由于连接反应使大多数DNA分子自身环化,在转化时产生大量不含目的基因的转化子,而含重组DNA的转化子则很少,需筛选大量菌落,才能得到含有重组DNA的转化子。     

体外重组双功能质粒及其性质的研究——(一)P~(MM-1)的构建与功能表达

目前在遗传工程研究中,大多利用大肠杆菌作为分子无性繁殖的宿主。然而,近几年在开创新的无性繁殖宿主的研究中,枯草杆菌是颇有吸引力的。对枯草杆菌的遗传分析已有了较详细的研究,能转导和转化。它的recE_4突变株,是非缺失重组缺陷株,     

蛋白可溶性的理论预测

蛋白的高级结构、折叠进程是由一级结构确定的 ,而大量数据表明 ,蛋白的平均荷电数 (Ｅ ,Ｄ ,Ｋ ,Ｒ的数目 )、转角形成残基数 (Ｇ ,Ｓ ,Ｎ ,Ｐ)、半胱氨酸数 (Ｃ)等是影响蛋白折叠进程和可溶性的主要因素。根据上述不同氨基酸对蛋白可溶性影响大小的统计规律 ,我们建立了一种数学模型 ,并设计了一种程序ＣａｌＳｏｒＩＮＳ。利用该程序 ,可以根据蛋白的氨基酸序列预测外源蛋白在大肠杆菌中表达的可溶性指数。以分子伴侣如ＧｒｏＥＬＳ ,ＤｎａＫ ,ＧｒｐＥ ,折叠酶系如肽酰脯氨酰顺反异构酶ＰＰＩ、蛋白质二硫键异构酶ＰＤＩ、一些分子内伴…     

重组人干细胞因子理化性质和生物活性分析

干细胞因子（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ,ＳＣＦ）是一种对造血细胞有重要作用的因子,在自体外周血造血前体细胞移植、肿瘤放化疗的辅助治疗、贫血和其他血液病的治疗方面有良好的应用前景。目的：分析所制备的ｒｈＳＣＦ的理化性质和生物活性。方法：用反相高效液相色谱、质谱、凝胶高效液相色谱等方法分别测定了制品的纯度、分子量、氨基酸组成,紫外光谱等,并用ＴＦ－１细胞测定了液相色谱等方法分别测定了制品的纯度、     

以恒河猴为模型的霍乱毒素B亚基与疟原虫多表位构建的DNA疫苗的免疫保护作用

研究以霍乱毒素B亚基 (CTB)为载体的重组疟疾多价抗原 (AWTE)表位的DNA疫苗在恒河猴中的免疫原性及对相应疟原虫感染的免疫保护作用。方法 :以恒河猴为模型 ,肌肉途径免疫编码CTB AWTE基因的质粒 ,免疫间隔为 15d ,免疫 3次 ,免疫剂量为每种质粒每次 50 0 μg/只。结果 :DNA疫苗组免疫 2次后即产生了较高水平的细胞免疫和体液免疫 ,免疫后 91d用 1.2 5× 10 8个猴疟原虫攻击 ,对照组 5只动物在攻击后 14d左右全部感染 ,感染持续 34d以上 ;DNA疫苗组的 5只动物在攻击后 60d没有感染。结论 :这种鸡尾酒式的抗原表位组合构建的DNA疫苗具有很好的免疫原性 ,同时也说明DNA疫苗在抗疟感染中起着举足轻重的作用。     

乳酸和乙酸对重组霍乱毒素B亚单位工程菌表达的影响

霍乱毒素Ｂ亚单位(ＣＴＢ)是口服霍乱疫苗的重要抗原之一。工程菌ＭＭ2是一株表达ＣＴＢ的大肠杆菌,产物ＣＴＢ能分泌到培养液中[1]。重组质粒ｐＭＭＣＴＢ来源于ｐＵＣ19,ｃｔｘＢ基因位于ｌａｃ启动子的下游。ｌａｃ启动子是一个化学诱导型启动子,无诱导物ＩＰＴＧ(异丙基βＤ硫代半乳糖苷)存在时,其下游基因则不能表达。但是我们的研究结果[2,3]表明,在不用ＩＰＴＧ诱导的情况下ＣＴＢ仍可得到表达,而加入ＩＰＴＧ对ＣＴＢ的表达几乎没有影响。此外,在培养基中加入乳酸或乙酸还可促进ＣＴＢ表达,这一点与多数工程菌的表达特点不同。为此,…     

提高转基因动物基因表达水平的途径

本文对转基因动物的研究特点以及近年来在转基因动物提高表达水平方面的研究做以综述。阐述了转基因的整合、MAR、共注射与同源重组、内台子以及RNA的剪接对转基因动物基因表达的影响。