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22.
人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6 E7基因重组腺病毒,并通过Western Blot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a( )-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过Western Blot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010 pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3 d后,提取细胞蛋白,Western Blot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒Ad E6E7. 相似文献
23.
目的 探讨掺铒钇铝石榴石(Er:YAG)激光联合种植体修整术治疗种植体周围炎的临床效果。方法 选取保定市第二医院自2020年6月至2022年5月收治的90例种植体周围炎患者为研究对象。采用随机数字表法将患者分为A组与B组,每组各45例。A组患者给予种植体修整术治疗。B组患者在A组基础上,联合Er:YAG激光治疗。分别于治疗前和治疗后1、3、6个月,检测并比较两组患者的牙周探诊深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、临床附着水平(CAL)、菌斑指数(PLI)。分别于治疗前和治疗后1个月,采用酶联免疫吸附法检测两组患者龈沟液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平。比较两组患者的临床疗效。结果 B组患者治疗的总有效率为91.11%(41/45),高于A组的71.11%(32/45),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、3、6个月,B组患者的PD、SBI、CAL、PLI均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后1、3、6个月的PD、SBI、CAL、PLI均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<... 相似文献
24.
25.
目的 构建表达增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的EGFP-pBABE逆转录病毒载体并对其表达进行鉴定.方法 从pEGFP-N3质粒上切下EGFP片段,连接到pBABE载体,构建EGFP-pBABE重组质粒;将该重组质粒转染到PT67细胞后,荧光显微镜下观察EGFP的表达;收集逆转录病毒感染宫颈癌SiHa细胞后荧光显微镜下观察EGFP的表达.结果 成功构建EGFP-pBABE重组质粒.该质粒转染PT67细胞24 h后,荧光显微镜下可观察到EGFP的表达;用该重组质粒包装的逆转录病毒感染宫颈癌SiHa细胞36 h后,在荧光显微镜下可观察到明显的EGFP表达.结论 成功构建表达EGFP的EGFP-pBABE逆转录病毒载体,为进一步利用该载体制备逆转录病毒并观测逆转录病毒感染细胞的效率奠定了良好的实验基础. 相似文献
26.
目的 应用CBCT研究无托槽隐形矫治及传统固定矫治器正畸拔牙对前牙区牙根及牙槽骨的变化情况.方法 选择成人拔牙矫正的患者60例,随机分为无托槽隐形矫治器组及传统固定矫治器组(N=30).正畸治疗前后拍摄CBCT,测量两组正畸患者上下颌中切牙、侧切牙、尖牙的牙根长度及牙槽骨的厚度变化情况.结果 固定矫治器组较无托槽隐形矫... 相似文献
27.
目的构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其转染效率。方法根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,将其定向克隆到真核表达载体pGenesil-1中,酶切和测序后,用脂质体转染到HEK293细胞中,用荧光显微镜和流式细胞仪观察荧光表达,鉴定转染效率。结果与结论成功构建4条表达shRNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞系中,转染效率达50%以上。 相似文献
28.
目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌CaSki细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染入宫颈癌CaSki细胞,随后利用RT—PCR技术检测细胞中HPV-16E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPVE6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P〈0,05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P〈0.05)。结论:HPV-16 E6siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌CaSki细胞后,均能抑制CaSki细胞中HPV-16E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡;两者联合别具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。 相似文献
29.
目的构建HPV16 E6/E7关键基因的原核载体pET-32(+)-E6/E7并将其转到大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,最后获得E6/E7基因表达产物。方法用PCR方法从含有HPV16全基因序列的质粒中扩增E6/E7基因,将E6/E7基因连接到pET-32a(+)质粒上,并转到大肠杆菌BL21(DE3)中。最后检测E6/E7基因。结果获得重组后的载体pET-32(+)-E6/E7。结论成功构建表达了含有E6E7的原核重组载体,并在大肠杆菌中表达。 相似文献
30.
腓肠神经营养血管皮瓣的解剖和临床应用 总被引:10,自引:4,他引:6
目的探讨腓肠伸经营养血管皮瓣的血供特点和临床应用的可行性,方法用6只成人下肢标本,对腓肠神经营养札管的来源、行任、分布及其与知名血管的吻合关系进行解剖观察。设计了腓肠神经营养血管皮瓣应用于临床修复足踝部、小腿下1/3段软组织缺损3例。结果腓肠浅动脉与腓肠神经伴行,在腓肠神经旁形成纵向血管链,除营养神经外,发出众多皮支与深筋膜血管网、皮下血管网广泛吻合营养皮肤,在外踝上5cm与腓动脉穿支有吻合。临床应用3例全部成活.外观满意。结论该皮瓣血供可靠,切取简单安全,可有效地修复足踝部、小腿下1/3段软组织缺损。 相似文献