人DC与黑色素瘤细胞融合疫苗体外诱导特异性抗肿瘤CTL

目的：探讨HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2＋的树突状细胞（DC）融合后体外诱导Me-lan-A特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的作用及交叉抗原递呈的能力。方法：用PEG法将黑色素瘤细胞与DC融合,在含GM-CSF的RPMI1640完全培养基条件下继续培养24～48h,然后将融合细胞与Me-lan-A特异性T细胞共同培养,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL的活性,流式细胞术分析T细胞的活化率。结果：从异体外周血分离的单核细胞在GM-CSF及IL-4条件下培养6d后,未成熟的DC能表达一定的CD80,CD83,CD86,HLA-DR和HLA-ABC等共刺激分子,而经TNF-浕,PGE-2及CD40L诱导成熟的DC,则这些分子的表达进一步上调。融合细胞体外活化Melan-A特异性T细胞的效率为16.72%±4.26%,阴性对照为0.21%±1.84%,阳性对照为28.60%±5.67%。融合细胞活化的CTL能有效地溶解HLA-A2的黑色素瘤细胞。结论：HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2＋阳性的DC融合肿瘤疫苗,能在体外有效地交叉递呈MHC-I限制性肿瘤抗原,并诱导Melan-A特异性的CTL和有效地杀伤黑色素肿瘤细胞。     

醋氨己酸锌的CHO细胞体外染色体畸变试验

醋氨己酸锌的ＣＨＯ细胞体外染色体畸变试验祝和成，高泽宣，曾庆华，顾焕华，唐明德（湖南医科大学肿瘤研究所４１００７８２湖医大环境卫生学教研室）醋氨己酸锌是湖南开发的一种新型的抗消化性溃疡药物，我们以前已对该药作了动物致畸试验、Ａｍｅｓ试验及微核试验，初...     

体外细胞培养支原体的检测与清除

目的检测及清除细胞培养中支原体的污染.方法应用DNA荧光法及两步PCR法检测支原体,采用BM-Cycline与裸鼠皮下过继联合法去除支原体;结果DNA荧光法、两步PCR法支原体检测率分别为25.0%,40.0%;BM-cyclie与裸鼠过继法对支原体的清除率为100.0%;结论上述方法能有效检测和清除细胞培养中支原体的污染.     

EB病毒LMP1通过NF-kB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(EBV-LMP1)通过活化NF-kB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基困HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用,为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据。方法:以鼻咽癌细胞为实验模型,将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下,构建LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk/GCV系统,采用同位素方法检测tk活性来研究LMP1通过NF-kB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征,MTT方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况。结果:成功构建受LMP1调控且依赖于NF-kB的HSV-tk表达质粒,发现其在GCV处理下,表达LMP1的肿瘤细胞的生长有显著的抑制。结论;携带有LMP1-HSV-tk的细胞对GCV治疗高度敏感,显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景。     

周期蛋白D1在鼻咽癌细胞系中功能及意义的深入研究

目的 深入研究周期蛋白D1在鼻咽癌细胞中的表达特征及生物学功能。以Western blot方法确定D型周期蛋白在鼻咽癌细胞系中的表达谱及表达水平;利用流式细胞术双参数法,确定cyclin D1在鼻咽癌细胞中的表达分布模式;结合反义硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验,分别从mRNA及蛋白质水平抑制、中和cyclinD1的表达,探讨其在鼻咽癌细胞中的生物学功能。结果 在鼻咽癌细胞中,D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型,cyclinD1在两株鼻咽癌细胞均有过表达。cyclinD1在鼻咽癌细胞系中的表达呈细胞周期依赖性,在G0／G1期表达最高,S期及G2／M期下降,但仍可检测到。反义cyclinD1硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验可以有效抑制蛋白质表达,抑制细胞进入S期。结论 鼻咽癌细胞系中,D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型,cyclinD1在鼻咽癌细胞中有过表达,且表达呈细胞周期依赖性,cyclinD1可能是鼻咽癌细胞G1／S期进行中必不可少的细胞周期调节因子。     

一株新的卵巢癌细胞系的建立及其生物学特性分析

目的 从人卵巢癌组织建立一株卵巢癌细胞系，为卵巢癌发病机制研究和治疗药物筛选提供可靠的材料。方法 取手术切除的卵巢癌组织，进行组织块培养法，待长满90％汇合面后消化传代培养，并进行形态学、生长动力学及致瘤性等生物学特性分析。结果 该卵巢癌细胞系已在体外培养生存1年以上，传80余代，命名为湖南卵巢癌细胞系1号(HOC1)，其生物学特性显示：这些细胞系体外生长的倍增时间为47．2h；软琼脂集落形成率为18．5％；接种至裸鼠后具100％致瘤性；染色体核型分析为非整倍体，众数为74～92条；透射电镜下可观察到卵巢癌细胞表面含有丰富的微绒毛，胞浆内含有丰富的核糖体。结论 该卵巢癌细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系，并具有明显的恶性表型特征。     

鼻咽癌转化基因的 2.8kb EcoRI 片段在鼻咽癌中不存在点突变

用改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对鼻咽癌活检组织进行筛查，以检测Ｔｘ基因中与转化有关的序列在鼻咽癌中是否存在突变。在被检测的１１例配对的鼻咽癌标本中均未检测到泳动速率的改变。提示在多数鼻咽癌中基因突变不是Ｔｘ基因的活化方式。     

小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用

目的 通过分析小檗碱处理后的Raji细胞中EB病毒DNA的变化,探讨小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用.方法 运用四甲基偶氮唑蓝法确定小檗碱对Raji细胞生长的细胞无毒性浓度,然后采用巢式荧光定量PCR方法检测该浓度处理后的Raji细胞EB病毒DNA含量,分析小檗碱对EB病毒DNA复制的影响.结果 小檗碱对Raji细胞的细胞无毒性浓度(NCC)为0-10μmol/L.不同浓度(1.25、10和40μmol/L)的小檗碱处理后的Raji细胞EB病毒DNA拷贝数与未加药组相比显著降低(P<0.05),呈药物浓度依赖性.结论 小檗碱在细胞无毒性浓度下,可抑制Raji细胞中EB病毒DNA的复制,为使用小檗碱或含小檗碱的中药复方防治EB病毒相关肿瘤提供了新的实验依据.     

人瘢痕组织成纤维细胞的培养

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是皮肤伤口愈合过程中瘢痕组织过度增生性病变.近年来,国内外很多学者运用成纤维细胞培养技术,在体外控制条件下研究瘢痕组织来源的成纤维细胞生长增殖、胶原合成、形态结构及其影响调控因素,而这一系列研究的基础就是怎样快速、优质、高效地成功培养出瘢痕成纤维细胞.我们经过多年的实践摸索出一套稳定的原代细胞培养方法,现将人瘢痕成纤维细胞培养方法报告如下.     

EB病毒LMP1通过NF-κB介导的HSV-tk/GCV治疗EBV相关肿瘤的研究

目的：研究EB病毒潜伏膜蛋白I(EBV-LMPl)通过活化NF-κB反式激活HIV-LTR进而启动自杀基因HSV-tk在EBV相关肿瘤治疗中的作用，为进一步开展肿瘤治疗提供科学的实验依据。方法：以鼻咽癌细胞为实验模型，将HSV-tk基因置于HIV-LTR调控序列之下，构建LMPl调控且依赖于NF-κB的HSV-tk/GCV系统，采用同位素方法检测tk活性来研究LMPl通过NF-κB调控HSV-tk转录的靶向性和表达特征，MTT方法检测在GCV处理下肿瘤细胞的生长状况。结果：成功构建受LMPl调控且依赖于NF-κB的HSV-tk表达质粒，发现其在GCV处理下，表达LMPl的肿瘤细胞的生长有显著的抑制。结论：携带有LMPl-HSV-tk细胞对GCV治疗高度敏感，显示这一肿瘤治疗系统在EBV相关肿瘤中具有一定的应用前景。