蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖抑制作用及机制,为蜂毒素用于膀胱癌的临床应用提供依据.方法 体外培养T24细胞,分别用0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5和15.0 μg/mL蜂毒素处理,采用四甲基偶氮(MTT)法检测细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;TUNEL染色检测凋亡率和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达.结果 蜂毒素处理后,T24细胞生长明显受到抑制,呈剂量依赖性;细胞出现典型的凋亡形态学改变;凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降.结论 蜂毒素在体外能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,机制可能为诱导其细胞凋亡.     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景:京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合.目的:观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响.方法:采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4 代细胞给予0,25,50,100mmol/L 京尼平苷干预,利用MTT 比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4 代软骨细胞的增殖情况.结果与结论:体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著(P < 0.01).     

京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响

背景：京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合。 目的：观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响。 方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4代细胞给予0,25,50,100 mmol/L京尼平苷干预,利用MTT比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4代软骨细胞的增殖情况。 结果与结论：体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著(P < 0.01)。     

复方细辛不同制剂的镇痛作用比较

目的 :本实验采用酊剂和水煎剂的细辛分别用维拉帕米配制成复方细辛 ,来观察其镇痛作用。同时测定其水煎剂的半数致死量 ,观察其急性毒性 ,判断其临床应用价值。方法 :采用化学刺激法、热板法、牙髓电刺激法。结果 :复方细辛酊剂局部给药及复方细辛水煎剂全身给药均有镇痛作用 ,其中酊剂复方细辛局部应用比水煎剂复方细辛全身应用起效快 ,用量少。但酊剂刺激性大 ,应用时有一定适应证限制。而水煎剂可口服 ,全身作用明显 ,急性毒性实验结果表明 ,毒性极低。所以也有其临床应用价值。结论 :复方细辛酊剂和复方细辛水煎剂均具有安全、可靠的镇痛作用。因此均可作为有效镇痛药用于临床。但它们分别有各自的适应证和优缺点     

HIV-1 Tat蛋白结合Tar的抗艾滋病药物筛选模型的建立研究

目的：建立HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型用于抗艾滋病药物体外筛选。方法：构建表达HIV-1 Tat蛋白的真核表达质粒（pCDNA3．1（＋）-Tat）和HIV-1 LTR-luc荧光素酶报告基因，采用脂质体转染法共转染HeLa细胞，荧光仪检测Tat蛋白结合HIV-1LTR促进荧光素酶在HeLa细胞内的表达情况。结果：成功构建pCDNA3．1（＋）-Tat和HIV-1 LTR-luc质粒，将质粒共转染HeLa细胞，荧光仪检测到荧光素酶的活性，建立了HIV-1 Tat蛋白结合Tar的细胞模型。以DRB（5，6-二氯-1-β呋核亚硝脲-苯并咪唑）为阳性对照，进行模型的条件优化。通过反复试验表明：目的基因和报告基因的比例、细胞浓度以及药物作用时间等对模型的稳定性和敏感性有影响。应用优化的细胞模型对文冠果、紫苏等天然产物浸提物进行筛选及结果的分析。结论：建立的HIV-1Tat蛋白结合Tar的细胞模型可用于抗HIV-1的药物筛选。     

HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的:构建HIV-1p15(Gag)原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法:用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中,利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白的免疫原性。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性。结果:原核表达载体pET28a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约20KD的p15(Gag)蛋白,经western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的HIV-1p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。     

人肺癌组织细胞中HIN-1基因甲基化分析

目的:HIN-1(High in normal-1)是新近鉴定的一个抑癌基因,在乳腺癌细胞中,HIN-1启动子区的高甲基化导致其表达沉默。本研究拟探讨肺癌组织和6种肺癌细胞株中抑癌基因HIN-1启动子区内的甲基化修饰水平。方法:甲基化特异性PCR(MSP)和Biosulfite(亚硫酸氢钠)测序法鉴定样品中HIN-1启动子内CpG甲基化状态,RT-PCR法检测5-aza-dc处理前后HIN-1在细胞内的表达水平。结果:在60例肺癌样本中,HIN-1启动子甲基化阳性样本为35例(阳性率58.3%),而5例正常肺组织样品均为阴性反应。采用RT-PCR法分析了肺癌细胞株H157,H358,H1299,A549,H727,DMS53内HIN-1基因的表达水平,发现前4种细胞株内HIN-1表达水平极低,也是在这4种肺癌细胞中,HIN-1基因启动子呈高甲基化状态。用去甲基化试剂5-aza-dc处理上述4种细胞96h后,所有这4种细胞内均出现HIN-1基因的重新活化。结论:抑癌基因HIN-1启动子高甲基化导致的HIN-1表达抑制可能是肺癌发生发展的重要因素。     

多胺类似物CPENSpm通过干扰多胺代谢抑制肺癌细胞的增殖

目的研究多胺类似物CPENSpm对肺癌细胞株A549增殖和细胞凋亡的影响,以探讨CPENSpm抗肿瘤的作用机制。方法MTS法分析细胞的增殖速度,化学分析法测定多胺代谢酶的活性,HPLC法分析细胞内的多胺含量,亚凋亡峰测定法和DNA片段化分析法鉴定细胞程序性凋亡。结果CPENSpm处理A549肺癌细胞可导致:①癌细胞生长抑制并激发细胞凋亡;②抑制多胺合成关键酶ODC的活性,活化多胺降解代谢关键酶SSAT和SMO的活性;③耗竭细胞内多胺含量。SMO抑制剂MDL72527可拮抗CPENSpm对A549细胞的生长抑制作用。结论CPENSpm通过干扰A549细胞的多胺代谢途径,耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分,诱导产生活性氧H2O2从而抑制癌细胞生长并激发细胞程序性凋亡。     

N~1-乙基-N~(11)-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷对宫颈癌细胞的作用

目的探讨N1-乙基-N11-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷(CHEN)对宫颈癌细胞株Siha的抗肿瘤作用。方法MTT法检测细胞的生长情况;流式细胞术及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果CHEN可显著抑制Siha宫颈癌细胞生长,且抑制作用随药物浓度增加而增强,用10μmol·L-1 CHEN处理细胞,24和48h生长抑制率分别高达61%和75%。细胞凋亡分析发现,CHEN处理可诱导Siha细胞凋亡,导致凋亡峰出现和细胞核DNA片段化。在0~20μmol·L-1浓度范围内,CHEN作用24h对Siha细胞SMO活性无明显影响。结论CHEN通过诱导细胞凋亡而抑制宫颈癌细胞生长,该抑制作用与SMO活性无关。