重组天花粉蛋白高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制研究

目的 探索重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)高表达对人宫颈癌Caski细胞p73基因甲基化影响的机制.方法 RT-PCR、QT-PCR、Western blot检测rTCS高表达后Caski细胞中DNA甲基化转移酶I(DNMT1)的表达变化,甲基化特异性PCR(MSP)法检测p73基因5′端启动子区CpG岛甲基化状态的改变.结果 宫颈癌Caski细胞p73为低表达,其启动子呈部分甲基化状态.高表达rTCS的细胞株其DNMT1mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中mRNA水平降低0.56倍(P<0.01),p73基因启动子甲基化程度亦有所降低,p73mRNA水平表达升高.结论 高表达rTCS可能通过抑制DNMT1的表达,致使抑癌基因p73启动子去甲基化而重新表达,最终发挥抑癌基因功能抑制宫颈癌Caski细胞增殖.     

精胺/精眯N1-乙酰基转移酶重组蛋白的原核表达及其抗体制备

目的 探讨精胺/精眯N¹乙酰基转移酶（SSAT）的原核表达及抗SSAT多克隆抗体的制备。方法 RT-PCR法从人肺癌细胞总RNA中克隆SSAT cDNA后,构建SSAT原核表达质粒pET15b/SSAT并转化BL21(DE3)大肠杆菌细胞。SSAT重组蛋白经IPTG诱导表达后,利用PAGE凝胶纯化和Ni-NTA亲和层析纯化。用凝胶纯化的SSAT重组蛋白免疫家兔以制备抗SSAT多克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用Western blot和ELISA技术检测。结果 SSAT重组蛋白可在大肠杆菌中诱导性高表达,用此蛋白免疫动物所得的SSAT抗体的效价以及特异性均较高。结论 建立了SSAT原核表达系统并成功制备出SSAT多克隆抗体。     

高表达OAZI-1增加小鼠黑素瘤B16-F1细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的检测高表达OAZI-1的小鼠黑素瘤B16-F1细胞对抗癌药物多胺类似物CPENSpm敏感性的影响并探讨其作用机制。方法高表达OAZI-1的B16-F1细胞经CPENSpm处理后,MTT法检测细胞增殖;QT-RT-PCR检测细胞内OAZI-1、ODC和OAZ的mRNA表达水平;反相高效液相色谱法检测细胞内多胺含量;化学发光法分析细胞内SMO酶活性。结果高表达OAZI-1显著增加B16-F1细胞对CPENSpm的敏感性,QT-RT-PCR结果显示,OAZI-1高表达增加ODCmRNA但降低OAZ mRNA水平,CPENSpm处理对ODC和OAZ的mRNA水平无进一步影响。与对照细胞相比,CPENSpm处理能更显著性地降低OAZI-1高表达细胞中的多胺含量,同时更强地诱导SMO酶的活性。结论 CPENSpm处理能在更大程度上耗竭OAZI-1高表达的B16-F1细胞中的多胺,由此对该肿瘤细胞显示出更大的细胞毒性。     

人精胺/精眯N 1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

 目的制备鼠抗人精胺/精眯N1鄄乙酰基转移酶（SSAT）单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21（DE3）中原核表达带6伊His 标签的SSAT 重组蛋白,并用Ni鄄NTA 树脂亲和层析纯化。用SSAT 重组蛋白免疫Balb/C 小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT 单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT 单克隆抗体,为SSAT 相关的分子和病理研究奠定了基础。     

孤独症谱系障碍儿童左侧视野优势效应研究

  目的  探索孤独症谱系障碍儿童对面孔加工中左侧视野优势效应的损害情况, 为加深理解孤独症社交损害的注意机制提供依据。  方法  采取重复测量资料的混合设计, 招募2016年9月—2019年12月在天津市各个孤独症康复机构训练的105名孤独症儿童, 组成病例组, 按照病例组的年龄和性别匹配正常发育的天津市小学或幼儿园就读的105名正常儿童为对照组。采用注意偏好范式进行眼动数据采集, 比较两组在左右侧视野对于面孔的注视点数、注视总时间和左半脸百分比等指标, 通过重复测量资料的方差分析, 探索组别、左右视野、面孔性别等因素的主效应和交互作用。  结果  对于左右视野整张面孔的注视点数(FC)和总注视时间(TFD)组别主效应有统计学意义[FC:F_(1，206)=26.27，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=51.23，P < 0.01]。组别×左右视野的交互作用只有FC差异有统计学意义[F_(1，206)=4.62，P=0.03)]。进一步简单效应分析发现，病例组左右侧视野(3.19±0.42，4.05±0.41)差异有统计学意义(P < 0.01)，右侧视野多于左侧，而对照组差异无统计学意义(P=0.22)。左半脸百分比进行重复测量资料的方差分析可见组别主效应[FC:F_(1，206)=13.77，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=12.89，P < 0.01)]和组别与左右视野的交互作用[FC:F_(1，206)=36.99，P < 0.01；TFD:F_(1，206)=38.62，P < 0.01)均有统计学意义。经简单效应分析，仅病例组存在左右视野的差异(FC:0.36±0.03，0.56±0.03，P < 0.01；TFD:0.36±0.03，0.57±0.03，P < 0.01)，右侧视野注视多于左侧。  结论  孤独症谱系障碍儿童的注视行为未见左侧视野视觉优势效应, 其右侧视野的注视相对正常, 提示其病理生理损害可能与右侧面孔加工区异常有关, 也提示其中枢统合能力存在异常。     

不同刷牙次数和刷牙时间对Ⅱ型糖尿病患者牙周附着水平的影响

目的:分析不同刷牙次数和刷牙时间对Ⅱ型糖尿病患者牙周附着水平的影响。方法:选择Ⅱ型糖尿病患者3 972名为研究对象,对每天刷牙次数和每次刷牙时间进行问卷调查,并分析对牙周附着水平的影响。结果:除≥75岁组外,其余各年龄段每天刷牙≥2次者与<2次者相比,牙周附着丧失程度较轻,每天刷牙≥2次、每次≥2 min者与每天刷牙≥2次、每次<2 min者相比,牙周附着丧失程度较轻。结论:每天刷牙≥2次、每次≥2 min有助于减缓Ⅱ型糖尿病患者的牙周附着丧失程度。     

融合基因CRT/vGPCR的构建及其在真核细胞膜上的表达

目的:将人钙网蛋白(CRT)基因与病毒G蛋白偶联受体(vGPCR)基因进行基因重组融合,由此将CRT携带到肿瘤细胞膜表面。方法:从pSG5-vGPCR质粒中获得全长vG-PCR基因片段并与CRT全长编码序列的3′端连接形成融合基因,然后将融合基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。用此质粒转染人A549肺癌细胞后,用RT-PCR检测重组融合基因的表达,用免疫荧光细胞化学和流式细胞术分析鉴定融合蛋白的表达及其在细胞膜上的定位。结果:成功获得重组融合质粒pcDNA3.1(+)-CRT/vGPCR,经DNA序列测定证实融合基因两阅读框(ORF)对接无误。将上述质粒转染A549细胞后,融合基因可在A549细胞中表达并定位到细胞膜上。结论:通过与CRT基因融合重组,具有膜定位能力的vGPCR能将CRT蛋白高效包被到肿瘤细胞膜上。     

枳Bei子对实验性肝损伤的防护作用

ＣＣｌ４性肝损伤小鼠血清ＧＰＴ活性，血清和肝ＭＤＡ含量显著性升高，但血糖和白蛋白浓度显著性下降，表明肝脏结构与功能的严重损伤，用枳Ｂｅｉ我浆灌胃１４ｄ由述指标变化幅度明显变小，提示枳Ｂｅｉ对ＣＣｌ４引起的肝损伤具有防护作用。     

与癌症共存

与癌症抗争的经历会让你产生新的观点。癌症的治疗需要大量的时间和精力,从而让你没有时间去注意别的事情。但是经历过以后,曾经让你最期待的事,如经过很长时间为住院做的计划、安排门诊的治疗,以及处理治疗及药物所带来的副作用,都已经回到以前的正常生活。     

重组天花粉蛋白体外诱导宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因去甲基化的研究

目的 研究重组天花粉蛋白 (recombinant trichosanthin, rTCS) 对宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因甲基化状态和基因表达的影响。方法 应用不同质量浓度的 rTCS (20、40、80 μg/mL) 处理体外培养的宫颈癌 HeLa 细胞后,MSP 法检测用药前后细胞中 p27 基因的甲基化状态,RealTime PCR 法检测用药前后细胞中 p27 和 DNA 甲基转移酶1 (DNMT1) mRNA 水平的变化,Westernblotting 法检测用药前后细胞中 p27 蛋白表达的变化。结果 HeLa 细胞中 p27 基因为低表达,基因启动子区 CpG 岛呈部分甲基 化状态。40 μg/mL rTCS 处理导致 p27 基因启动子区 CpG 岛去甲基化;在 20、40、80 μg/mL 的 rTCS 作用 48 h 后,p27 基因 mRNA 相对表达水平分别升高 2.22、4.00、6.03 倍,p27 蛋白水平表达也逐渐增加;宫颈癌 HeLa 细胞中 DNMT1 mRNA 高表达,40 μg/mL rTCS 处理 48 h 可至 DNMT1 mRNA 表达水平降低 78%。结论 rTCS 通过抑制 DNMT1,逆转 p27 基因启动子区 CpG 岛的甲基化状态,使宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因表达活化。rTCS 能逆转宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因甲基化状态,调控 p27 基因和 DNMT1 的表达。