新多胺类似物TBP对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡及迁移能力的影响

  目的  研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propaneadiamine, TBP)对人膀胱移行细胞癌T24细胞生长、凋亡及迁移能力的影响。   方法   MTT比色法分析细胞增殖, 流式细胞术分析细胞周期改变, TUNEL法检测细胞凋亡, Western blot用于分析细胞凋亡相关蛋白Bax和细胞色素C的表达水平, Transwell技术检测细胞迁移能力的变化。   结果  TBP有效抑制T24细胞增殖及迁移能力。细胞周期分析显示TBP抑制细胞发生G_1/S期转换, 导致S期细胞比例显著性下降, G_0/G_1期细胞比例升高, 同时出现SubG_1亚凋亡峰。TBP处理后, 细胞呈现典型凋亡现象, 细胞浆中促凋亡蛋白Bax和细胞色素C含量明显升高。   结论  TBP能够抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖、降低T24细胞迁移能力, 诱导细胞凋亡, 其机制可能与影响肿瘤细胞的细胞周期, 活化线粒体相关的细胞凋亡途径有关。      

泌特联合莫沙必利治疗老年消化不良患者26例临床分析

目的探讨泌特联合莫沙必利治疗老年消化不良的疗效。方法选择诊断为消化不良的26例老年患者,给予泌特,2片,3次/d,饭后服用,治疗2周为1个疗程,伴胃排空延迟者给予莫沙必利,5mg,3次/d,餐前30min服用,连续观察4周。结果近期治愈5例,显效12例,有效7例。无效2例,总有效率92%。结论泌特治疗老年消化不良疗效肯定,伴胃排空延迟者加莫沙必利效果更佳。     

HIV-1Nef调节内皮细胞黏附分子ICAM-1的表达

目的研究HIV-1的调节基因Nef对ECV304细胞ICAM-1表达的影响,从而为分析HIV-1感染引起内皮细胞生物学活性的变化,以及为阐明Nef参与HIV-1致病的分子机制奠定基础。方法应用本实验室已经建立保存的HIV-1Nef基因在内皮细胞的稳定表达细胞株ECV304-Nef和其阴性对照细胞株ECV304 pcDNA 3.1(+),通过RT-PCR、实时定量PCR(real-time PCR)、Western blot、FCM和细胞黏附试验分析ECV304-Nef细胞ICAM-1的表达水平。结果 RT-PCR、real-time PCR结果显示ECV304-Nef细胞ICAM-1 mRNA表达水平明显升高,为对照组的(4.3±0.2)倍;Western blot结果示ECV304-Nef细胞I-CAM-1蛋白的表达水平高于对照组;FCM分析显示ECV304-Nef细胞和对照组细胞ICAM-1阳性细胞百分率分别为(35.3±2.2)%和(12.5±0.8)%(P0.01),两组间ICAM-1表达有显著差异。细胞黏附实验观察到ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞数明显多于对照组,荧光仪定量分析结果显示ECV304-Nef细胞黏附的Jurkat细胞的荧光强度值显著高与对照组(P0.05)。结论本实验证实了HIV-1Nef基因可以上调血管内皮细胞细胞黏附分子ICAM-1的表达。     

枳椇子抗脂质过氧化作用的实验研究

40％枳子匀浆灌胃能显著降低小鼠血清和肝、脑组织中MAD含量，升高肝、肾、脑组织中SOD活性，增强小鼠的耐寒、耐热机能，延长小鼠游泳时间，提示有抗脂质过氧化和抗衰老作用。     

转录因子MafG抑制Nrf2介导的SSAT转录活化

目的研究转录辅助因子MafG对SSAT启动子活性的影响。方法在M15[pREP4]大肠埃希菌中表达MafG和Nrf2,利用纯化的MafG和Nrf2基因重组蛋白以及标记的PRE探针进行EMSA以确定MafG/Nrf2二聚体结合PRE元件的能力,然后利用报告基因技术,分析MafG表达对Nrf2介导的SSAT启动子活化的影响。结果Nrf2/MafG杂二聚体具备与PRE元件结合的能力,在非小细胞性肺癌细胞株H157内,MafG高表达抑制Nrf2介导的SSAT转录活化。结论Nrf2/MafG二聚体负性调节SSAT基因表达。     

HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.     

肺癌及癌旁组织中经典Wnt信号途径相关基因的甲基化状态观察

目的 观察人肺癌及癌旁组织中经典Wnt信号途径相关基因的甲基化状态,探讨其与肺癌发生的关系.方法 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP)检测25例新鲜肺癌组织及癌旁组织、11例存档肺癌组织、6例炎性假瘤的瘤旁正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株的WIF-1、sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化状态.结果 6例正常肺组织未检测到甲基化基因.18例肺癌组织和10例癌旁组织中可检测到甲基化基因.在13例肺癌组织和2例癌旁组织可检测到2个以上甲基化基因.肺癌组织中WIF-1、sFRP-1和DKK-3三个基因的甲基化率分别为47.2%、36.1%、27.8%;肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而8FRP-1基因呈未甲基化状态.结论 肺癌组织中存在经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1、sFRP-1、DKK-3)的甲基化.其导致的基因功能失活可能发生在肺癌形成的早期.     

Syk（SYK—mRNA）在乳腺癌和非癌组织中的表达及其意义

目的:探讨乳腺癌研究领域中的新分子Syk及其编码基因SYK-mRNA在乳腺癌和非癌组织(乳腺纤维腺瘤和癌旁乳腺组织)中的表达及其意义。方法:分别采用免疫组化S-P法和原位RT-PCR方法检测52例乳腺侵袭性导管癌和39例非癌组织(包括乳腺纤维腺瘤22例和癌旁乳腺组织17例)中Syk和SYK-mRNA的表达。结果:乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和癌旁乳腺组织中Syk表达率分别为42.3%(22/52例)、100%(22/22例)和100%(17/17例);SYK-mRNA的表达率分别为38%(20/52例)、91%(20/22例)和100%(17/17例)。Syk在乳腺癌中的阳性表达率和表达量均显著低于非癌组织(χ2=31.01,P<0.05;F=52.384,P<0.05);SYK-mRNA在乳腺癌中的表达率和表达量也都显著低于非癌组织(χ2=30.64,P<0.05;H=35.08,P<0.05)。Syk和SYK-mRNA表达的一致性为91%(χ2=57.50,P<0.01;kappa=0.815,P<0.01)。结论:乳腺癌的发生和癌细胞的生长可能与Syk(SYK-mRNA)的低表达或缺失有关,提示SYK基因可能是乳腺癌的一种候选抑癌基因。