The Extraarticular Symptoms Influence ACR Response in the Treatment of Rheumatoid Arthritis with Biomedicine: A Single-blind,Randomized,Controlled,Multicenter Trial in 194 patients

Objective: The extraarticular symptoms are important in the pattern differentiation of traditional Chinese medicine (TCM), and the present study is designed in an attempt to find the associations between the extraarticular symptoms and American College of Rheumatology (ACR) Response in 194 cases of rheumatoid arthritis (RA) treated with biomedicine. Methods: The data were obtained from a randomized clinical trial. One hundred ninety-four RA patients were treated with the biomedical therapy (diclofenec, methotrexate and sulfasalazine). ACR20 response in 24 weeks was used for the efficacy evaluation. Eighteen symptoms (including 13 extraarticular symptoms) that TCM practitioners focus on were collected for exploration on the association between the symptoms and the efficacy of the biomedical therapy with association rules method. Results: After 24 weeks, a total of 135 patients receiving biomedicine had achieved an ACR20 response. The association rules analysis on each symptom showed that soreness in the waist was more associated with ACR20 response, but with lower support (selected sample size based, 20.10% and 14.95% respectively); cold intolerance and cold joint were found to be associated with ACR20 response with higher support (48.97% and 53.61% respectively), and the confidences (predicted effective rate) were 73.08% and 71.23% respectively. The associations between combination of symptoms (among them, there was at least one extraarticular symptom) and ACR20 response indicated that cold intolerance or cold joint with higher confidence and support were the most important extraarticular symptoms. Conclusion: The RA patients with "cold intolerance" and "cold joints", which are the extraarticular symptoms that TCM practitioners focus on, may show higher ACR20 response when treated with the biomedical approach.     

反义c-myc对MCF-7细胞端粒酶活性的影响

目的研究脂质体LipfectAMINE^TM（LR）介导的c-myc反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞端粒酶活性的影响及其机制。方法端粒重复序列扩增聚丙烯酰胺凝胶电泳（TRAP-PAGE）及端粒重复序列扩增酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）定量检测不同时间段MCF-7细胞的端粒酶活性,流式细胞仪检测c-myc蛋白表达。结果TRAP-PAGE结果显示,c-myc ASODN对MCF-7细胞的作用,随时间的递增（24h、48h、72h）,端粒酶梯度条带明显地减少,端粒酶活性明显降低。TRAP-ELISA显示,2．5μmol／L的c-myc ASODN作用MCF-7细胞48h吸光度A值降为0．486±0．041,作用72hA值降为0．263±0．034,与未经任何处理的MCF-7细胞A值0．684±0．031相比,端粒酶活性明显受到抑制,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。未经任何处理的MCF-7细胞c-myc蛋白阳性率为（99．684±2．937）％,经c-myc ASODN作用48h c-myc蛋白阳性率低至（61．295±2．825）％,c-myc ASODN作用72h c-myc蛋白阳性率低至（29．482±2．726）％。而c-mye正义寡核苷酸（SODN）无上述作用。结论c-myc ASODN能有效降低MCF-7细胞端粒酶活性和c-myc蛋白表达。     

冠状动脉造影正常的急性心肌梗死2例

急性心肌梗死（AMI）冠脉造影多可发现异常，但我院近期连续发现2例临床表现为AMI（心肌酶谱增高、肌钙蛋白阳性、ECGST段呈典型心肌梗死动态改变）但冠脉造影未见异常的病例，报告如下。     

流行性出血热合并肺水肿的护理

流行性出血热是由病毒引起的一种自然疫源性疾病，可同时造成全身多个器官的损害和功能障碍，能引起各种并发症，如大出血、心衰、肺水肿、继发感染等，而少尿期急性肺水肿是直接危及病人的生命之征。自1980年以来，我院成功抢救了4例重症出血热并发肺水肿的患者，现将护理经验报告如下：     

Survivin启动子调控的PUMA基因表达载体对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:探讨构建带有肿瘤特异性Survivin启动子的PUMA基因表达载体pUC57-Survivin-PUMA对乳腺癌MCF-7细胞的肿瘤特异性促凋亡作用。方法:化学合成PUMA基因片段克隆至pUC57质粒,构建重组质粒pUC57-PUMA;克隆Survivin启动子序列,取代pUC57-PUMA质粒原有的CMV启动子,构建重组质粒pUC57-Survivin-PUMA,测序鉴定。实验设置pUC57-PUMA组、pUC57-Survivin-PUMA组、阴性对照组(pUC57group)和空白对照组(blank group)。将以上各组分别转染人乳腺癌MCF-7细胞及人正常乳腺Hs 578Bst细胞。转染后48h,western blot技术检测各组细胞中PUMA蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:重组质粒经测序鉴定证实符合设计要求,构建成功;MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的PUMA蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中只有pUC57-PUMA组的PUMA蛋白表达较其他3组显著增高(P<0.05)。MCF-7细胞中pUC57-PUMA组和pUC57-Survivin-PUMA组的细胞凋亡率分别为29.02%和29.31%,均较对照组显著增高(P<0.05),而人正常乳腺Hs 578Bst细胞中仅pUC57-PUMA组的细胞凋亡率较其他3组显著增高(P<0.05)。结论:Survivin启动子调控的PUMA表达载体能显著增高乳腺癌MCF-7细胞中PUMA的表达,进而促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡,而对正常乳腺Hs 578Bst细胞的凋亡不产生影响。     

DF3启动子调控的hTERT基因RNAi载体的构建及靶向干扰效果的鉴定

目的：构建带有肿瘤特异性DF3启动子、针对hTERT基因的RNA干扰表达载体pGenesil-10-miR30-DF3-hTERT,探讨该表达载体的肿瘤靶向性基因抑制作用。方法：分别用针对hTERT基因的RNA干扰寡核苷酸序列及DF3启动子取代质粒pGenesil-10-Micro30中原有的miR30序列及CMV启动子,构建pGenesil-10-miR30-DF3-hTERT载体并进行酶切及测序鉴定。将该载体分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、肝癌HepG2细胞及造血干细胞,ELISA法检测hTERT蛋白的表达情况。结果：重组质粒经酶切及测序鉴定证实符合设计要求,构建成功。ELISA法检测结果显示,实验组MCF-7细胞及HepG2细胞的hTERT蛋白下降显著（P〈0.05）,其中以MCF-7细胞下降更为明显;造血干细胞实验组则无明显变化（P〉0.05）。结论：DF3启动子调控的hTERT基因的RNA干扰表达载体能有效抑制DF3阳性肿瘤细胞中hTERT的表达,以乳腺癌细胞效果最为显著,而对端粒酶阳性的正常细胞不产生影响。     

腺病毒载体介导hTERT特异性RNAi诱导乳腺癌细胞凋亡的研究

[目的]构建hTERT特异性RNAi腺病毒载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径。[方法]设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建RNAi腺病毒载体rAd-shRNA-hTERT。同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照rAd-shRNA-HK和只含EGFP的rAd-EGFP对照。转染人乳腺癌MCF-7细胞后48h,以荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞hTERT基因的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]病毒载体经酶切、电泳分析表明插入序列正确,构建成功;转染MCF-7细胞后,rAd-shRNA-hTERT组可明显抑制hTERT基因表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。[结论]通过腺病毒介导的RNAi技术可有效抑制MCF-7细胞中hTERT基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡,有望用于肿瘤的基因治疗。     

人乳腺珠蛋白基因真核表达载体的构建及其表达

[目的]构建人乳腺珠蛋白(hMAM)基因的真核表达载体pcDNA3.1-hMAM,并观察重组载体在COS-7细胞中的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础.[方法]利用PCR方法扩增hMAM基因,酶切测序分析后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1,构建真核表达载体pcDNA3.1-hMAM.将重组载体用脂质体转染法转染入COS-7细胞,间接免疫荧光法检测目的基因的表达.[结果]成功扩增hMAM基因,酶切测序结果表明,重组载体含有hMAM基因,在COS-7细胞中可检测到hMAM表达.[结论]hMAM基因的真核表达载体构建成功,为进一步进行DNA肿瘤疫苗研究提供了实验依据.     

人乳腺癌hTERT RNA干扰靶序列筛选方法研究

目的:筛选针对乳腺癌有效的hTERT siRNA,为应用RNAi技术在乳腺癌中敲除hTERT基因研究提供实验基础。方法:采用化学合成法合成3段针对hTERT的siRNA、应用脂质体转染试剂分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、实时荧光定量RT-PCR技术检测hTERT mRNA表达水平以确定干扰效果。结果:3段hTERT siRNA中有2段siRNA可有效降低hTERT mR-NA表达。结论:利用化学合成法合成siRNA,应用实时荧光定量PCR技术检测目的基因干扰效果,可快速、高效筛选特异性抑制基因表达的siRNA。     

唐氏综合征患儿出生率升高的影响因素分析

目的:探讨近年来泸州地区唐氏综合征患儿出生率升高的主要影响因素。方法:做外周血淋巴细胞培养,制备染色体G显带标本,显微镜下核型分析。对唐氏综合征患儿母亲年龄、孕期情况、周围环境等因素进行调查并对比分析。结果:唐氏综合征患儿检出率呈逐年递增趋势,2001年以来,患儿母亲超过35岁生育的例数明显增多。一些患儿母亲有化学、物理等有害环境因素接触史。结论:近年来唐氏综合征患儿出生率的升高与母亲生育年龄和环境因素有关。应改善生存环境,加强孕前、孕中保护。普及优生优育知识,宣传适龄生育,并广泛开展唐氏综合征的遗传筛查。