SARS病毒E蛋白基因与EGFP基因在BHK-21细胞中的融合表达

目的：构建SARS病毒E蛋白基因的真核表达载体，观察E蛋白基因在BHK-21细胞中的正常表达及定位。方法：用PCR方法扩增E蛋白基因，上、下游引物两端分别设计EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点，产物双酶切后定向克隆于pEGFP-N1载体，构建真核表达载体pEGFP-E，脂质体法转染BHK-21细胞，荧光显微镜观察E蛋白基因的表达。结果：经酶切和DNA序列测定鉴定，E蛋白基因正确插入到增强绿荧光蛋白EGFP基因上游，荧光显微镜显示E蛋白表达于细胞浆内，包膜上也有分布。结论：在BHK-21细胞中成功表达了SARSCovE-EGFP融合蛋白，蛋白定位于细胞浆内。     

山东省1986～2010年流行性乙型脑炎流行病学特征分析

目的 分析山东省流行性乙型脑炎(简称乙脑)流行情况,为有效预防控制乙脑提供科学依据.方法 采用描述性流行病学分析方法,对1986～2010年山东省乙脑报告病例进行分析,采用ELISA法检测病人早期血清和/或脑脊液乙脑IgM抗体.结果 1986～2010年山东省共报告乙脑病例12 983例,年均发病率为0.61/10万;95.12％的病例集中在7～9月份,8月为发病高峰;59.05％的病例分布于菏泽、临沂、潍坊、济宁4市;15岁以下病例居多,占总病例数的72.53％(9 411例),但≥15岁病例所占比例呈逐渐增加趋势;职业分布以散居儿童(48.79％)、学生(22.67％)、农民(20.26％)为主;共检测1 807例病人血清和/或脑脊液,乙脑IgM抗体阳性1 173例,阳性率为64.91％.结论 山东省乙脑发病率总体呈下降趋势,近年来呈低水平流行,但威胁依然存在,仍需加强防控措施;乙脑发病年龄明显后移,应结合各地区成人发病情况制定乙脑防控策略.     

汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白基因表达载体的构建及表达

摘要：目的构建汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达载体并将其在Vero E6细胞中进行表达,观察细胞融合现象。方法采用PCR和基因克隆技术,将GM04 38株G1、G2基因分别克隆到表达载体pCAGGS／MCS,酶切和测序鉴定正确后,将表达载体pCAGGS-G1、pCAGGS-G2共转染Vero E6细胞,酸性MEM处理后观察细胞融合现象的产生,并以间接免疫荧光试验(IFA)观察糖蛋白的表达情况。结果显示在Vero E6细胞中成功表达出糖蛋白G1、G2,IFA显示荧光信号分布在细胞浆中。二者的共表达可产生良好的生物学活性,在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合,而转染pCAGGS-NP的细胞没有融合现象发生。共表达也未出现明显的促进效应。结论成功构建了糖蛋白G1、G2的表达载体,并在Vero E6细胞中呈有效表达,二者的共表达可在偏酸性条件下引起Vero E6细胞发生融合。     

2006-2007年山东省疾病预防控制机构仪器设备状况调查

[目的]了解山东省疾病预防控制体系仪器设备装备情况,为制定疾控体系仪器设备装备规划提供科学依据。[方法]2007年10月,对山东省、市、县三级疾病预防控制机构2006-2007年的仪器设备情况进行调查。[结果]2007年底,按照国家仪器设备装备标准,省级疾控机构仪器设备配置超过国家常规仪器设备标准;按基本职能必须装备的仪器设备种类拥有率为85．47％,数量拥有率为76．14％。市级机构常规与职能仪器设备种类拥有率分别为79．46％、62．05％,数量拥有率分别为71．46％、29．88％。县级机构常规与职能仪器设备种类拥有率分别为73．90％、61．32％,数量拥有率分别为59．97％、34．19％,46．34％的仪器设备为2000年以前配置。[结论]山东省省级疾病预防控制机构仪器设备能满足常规工作开展需要,市、县级机构仪器设备尚不能维持常规工作的开展。     

山东省首次分离出基因1型流行性乙型脑炎病毒

目的从山东省济南市采集的蚊虫标本中分离流行性乙型脑炎（乙脑）病毒（Japanese Encephalitis Virus,JEV）,并确定其基因型别及前膜蛋白（Precursor Membrane,PrM）基因片段和包膜蛋白（Envelope,E）基因区段分子特征。方法对2008年采集的蚊虫标本进行病毒分离,对新分离的病毒进行血清学及分子生物学鉴定。逆转录-聚合酶链反应扩增新分离JEV的PrM、E区段核苷酸序列,测序后应用Clustal X（1.83）软件做碱基配对分析,MEGA3.1完成病毒进化分析,GENEDOS（3.2）软件完成氨基酸位点分析。结果共采集15700只蚊虫标本,包括库蚊、骚扰阿蚊、伊蚊、按蚊。随机抽取20批标本,从其中的1批三带喙库蚊标本中分离到1株病毒,经过血清学及分子生物学鉴定属于基因1型JEV。新分离JEV与减毒活疫苗株SA14-14-2株E区段核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为88.0%和97.2%,存在14处氨基酸位点差异。结论从山东省首次分离到基因1型JEV。     

汉坦病毒包膜糖蛋白G2的基因克隆与序列分析

目的 建立汉坦病毒(HV)包膜糖蛋白G2的克隆载体;进行系统发生树分析,研究G2基因的变异情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增山东省HV G2基因片段,克隆于PMD-18T载体,经氨卞西林筛选,酶切鉴定后,进行序列测定,应用DNASTAR软件将其与世界范围内的病毒株基因序列进行分析.结果 扩增得到山东省高密、淄川、莒南、荣成四地G2基因.序列同源性分析表明,四地G2基因都属于SEO型HV,与Z37株核苷酸同源性最高,与其他SEO型各株的同源性为82.3%～99.8%;绘出了G2基因及氨基酸的系统发生树.结论 成功地建立了山东省四地HV G2基因克隆载体;四地HV G2基因同源性高,为山东省SEO型HV的遗传与变异、分子流行病学研究,以及制备有效的亚单位疫苗提供了依据.     

重组抗原在HSV-Ⅰ感染ELISA检测中的应用

目的　用单纯疱疹病毒(HSV)重组蛋白作为包被抗原建立一种特异性和灵敏性较高的ELISA方法。方法　将重组糖蛋白D(gD)和HSV Ⅰ分别作为包被抗原,检测5 7份临床标本,同时用国产和德国试剂盒进行检测;将德国试剂盒作为金标准,另外三者检测结果在特异性、灵敏性和符合率等方面与其进行比较。结果　与德国试剂盒相比,在特异度、敏感度、符合率方面,重组抗原分别为5 7 1%、82 0 %、78 9%。病毒抗原分别为5 7 1%、78 0 %、75 4 % ;国产试剂盒分别为10 0 0 %、4 8 0 %、5 4 4 %。重组蛋白重复性实验结果经统计学处理差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论　用酵母菌表达的HSV Ⅰ重组gD蛋白作为包被抗原进行ELISA检测是一种敏感、特异的方法,具有较大的应用价值。     

2011年济南市某污水河中肠道病毒的分离鉴定与序列分析

目的 监测济南市区地表河水中的人类肠道病毒(HEV),分析其基因特征。方法 于2011年5、6、7月份对流经济南市中心城区的西泺河各采集1份河水标本,经过阴离子膜吸附的方法浓缩后,接种RD、HEp-2和L20b细胞进行病毒分离。测定分离株VP1编码区序列并进行序列分析。结果 共分离到HEV 9株,其中埃可病毒6型(Echovirus 6,E6)4株,柯萨奇B2病毒(Coxsackievirus B2,CVB2)5株。VP1核苷酸序列分析显示,4株E6病毒与2010年山东省临沂市脑膜炎病例分离株的同源性较高(95.9%~96.7%),提示当地有发生E6引起的脑膜炎病例的可能性;与济南市2010年污水分离株的同源性为94.5%~99.7%。5株CVB2病毒之间有较高的核苷酸同源性(98.4%~100%),与往年山东省急性弛缓性麻痹病例分离株之间同源性为80.9%~95.2%。结论 生活污水的排入河可作为HEV环境监测的采样点,我国无专门HEV病例监测系统,环境监测是了解一个地区HEV流行的重要途径。