多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞中PDCD5蛋白的表达

目的:了解程序化细胞死亡蛋白5(programmed cell death 5,PDCD5)在多囊卵巢综合征(polysystic ovary syndrome,PCOS)及对照组卵巢颗粒细胞中的表达情况,探讨PDCD5与PCOS的发病关系.方法:选择体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF)中PCOS患者及对照组各30例,收集其颗粒细胞,分别用流式细胞技术、直接免疫荧光以及免疫组化技术检测PDCD5蛋白在颗粒细胞中的表达水平及定位.结果:与对照组相比,PCOS颗粒细胞亚二倍体细胞数明显增加,颗粒细胞中PDCD5的表达明显上调(P<0.05),PDCD5阳性细胞主要表达在胞浆,部分表达在胞核.结论:PCOS患者黄素化颗粒细胞凋亡较对照组增加,提示细胞凋亡可能在PCOS的发病中起一定作用, 凋亡调控蛋白PDCD5可能参与了正常及PCOS卵巢颗粒细胞的凋亡.     

羊蹄角制剂的抑菌作用及对小鼠免疫功能的影响

羊蹄角制剂对11种常见细菌的体外抑菌作用不明显,但能显著(P<0.01)提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及提高淋巴细胞转化率。     

新生儿窒息血中脂质过氧化物浓度、超氧化物歧化酶活力变化及脂质过氧化物与pH值的相关性测定

观察血中自由基、自由基清除剂以及血中脂质过氧化物与ｐＨ值之间的相关性，探讨新生儿窒息时脑损伤的发病机理，预测预后．结果表明，自由基和脂质过氧化物参与新生儿窒息时脑损害的发生，超氧化物歧化酶在抗氧化过程中起着重要作用，自由基与血ｐＨ值结合，对判断窒息程度、估计预后提供有益的实验依据．     

B7.1、GM-CSF基因修饰的EL- 4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应

目的 研究B7.1，GM-CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法 用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM-CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL-4中，得到EL-4/B7和EL-4/GM转基因瘤苗细胞，观察EL-4/B7和EL-4/GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用，以及预先接种过EL-4/B7或/和EL-4/GM瘤苗的小鼠，对野生型EL-4细胞致瘤性作用的影响，并检测接种EL-4/B7或/和EL-4/GM瘤苗的小鼠血浆IL-2及TNF-α的水平，及其脾淋巴细胞对野生型EL-4的细胞毒效应，另外，检测经EL-4/B7，EL-4/GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度，结果 （1）经EL-4/B7、EL-4/GM细胞注射后，荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢，生存时间延长，淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞；（2）接种一定数量的EL-4/B7，EL-4/GM细胞的小鼠，能抵抗野生型EL-4细胞的攻击；（3）接种瘤苗的小鼠血浆IL-2的水平明显升高，而TNF-α的水平无明显变化；（4）接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞，对野生型EL-4细胞有明显的细胞毒效应；EL-4/B7、EL-4/GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖。结论 B7.1,GM-CSF基因修饰的EL-4细胞，能有效地激发C57BL/6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应，且B7.1基因与GM-CSF基因具有协同作用。     

人趋化素样因子2对小鼠成纤维细胞BALB/c 3T3的促增殖和凋亡抑制作用

目的　探讨人趋化素样因子 2 (CKLF2 )对小鼠成纤维细胞BALB c 3T3增殖和凋亡的影响。方法　构建pcDI CKLF2真核表达载体 ;建立稳定表达人CKLF2的BALB c 3T3(3T3 CKLF2 )细胞系 ;以细胞计数和MTT法分析过表达人CKLF2后对 3T3细胞增殖的影响 ;以流式细胞术检测annexin Ⅴ阳性细胞为凋亡指标 ,分析 3T3 CKLF2细胞和 3T3 pcDI细胞对撤除血清诱导凋亡的反应情况。结果　成功地建立了稳定表达人CKLF2的BALB c 3T3细胞系 ,过量表达人CKLF2的 3T3细胞系增殖速度明显加快 ,同等接种量的细胞培养 40h以后 ,3T3 CKLF2细胞的数量 (1.0 7× 10 6 )比 3T3 pcDI细胞(2 .5 4× 10 5)及野生型 3T3细胞 (3 .0× 10 5)高 2～ 3倍 ;流式细胞术分析表明 ,撤除血清后 3T3 CKLF2的annexin Ⅴ阳性细胞数 (13.34% 48h、15 .44 % 96h)明显低于 3T3 pcDI细胞 (19.36 % 48h、39.2 % 96h)。结论　人CKLF2能够促进BALB c 3T3细胞的增殖和抵抗撤除血清诱导的细胞凋亡 ,这些研究为进一步探讨CKLF家族的生物学功能提供了实验依据。     

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

黄芩苷对CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用及机制

目的: 研究黄芩苷抗CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用并探讨其机制。方法: 构建CA46细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、15 mg/kg黄芩苷组、30 mg/kg黄芩苷组、60 mg/kg黄芩苷组和4 mg/kg依托泊甙 (VP-16) 阳性对照组。采用腹腔注射方式给药,12 d后处死部分裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率,并进行透射电镜、病理学和Western blotting检测;观察各组未处死的裸鼠直至全部死亡,研究黄芩苷对荷瘤裸鼠生存时间的影响。结果: 黄芩苷明显抑制了CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,引起肿瘤细胞的凋亡、坏死以及p-Akt、NF-κB、mTOR和p-mTOR蛋白表达的下调;随着黄芩苷剂量的增加,黄芩苷治疗组荷瘤裸鼠的生存时间明显延长。结论: 黄芩苷可抑制CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

志苓胶囊通过激活caspase-3抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究志苓胶囊(ZLJN,抗癌复方Ⅱ号)对人慢性髓系白血病K562细胞株增殖及凋亡的影响。方法将志苓胶囊按其不同中西药成分比例配制成中药、西药和复方组,与K562细胞共培养后,采用MTT法、集落形成实验分别检测细胞存活率和集落形成率;Annexin V-FITC/PI标记法、DNA倍体分析及DNA片段化分析检测细胞凋亡;流式细胞仪检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3酶原(pro-caspase-3)表达。结果不同药物组与K562细胞共培养后,细胞生长受抑制,集落形成率降低。Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;DNA倍体分析可见亚二倍体峰(凋亡峰);琼脂糖电泳见典型的DNA梯状带。流式细胞检测caspase-3活性增强,Western blot检测pro-caspase-3表达减弱。结论志苓胶囊可有效抑制K562细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与caspase-3活性增强有关。